α-amylase EPS ver.2 α-amyláza EPS 2.ver (AMYL2)

Transkript

1 α-amyláza EPS 2.ver () Informace pro objednání COBAS INTEGRA 300 Tests Kat. č Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c Systémové-ID použít Calibrator f.a.s ml Kat. č Calibrator f.a.s. (pro USA) 12 3 ml Kat. č COBAS COBAS COBAS INTEGRA INTEGRA INTEGRA Systémové-ID /400 plus Precinorm U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U plus 10 3 ml Kat. č Precinorm U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U plus 10 3 ml Kat. č Precipath U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID COBAS INTEGRA 150 Tests Kat. č Cleaner Cassette Systémové-ID Systémové informace COBAS INTEGRA (). Test, test ID (sérum, plazma). Test AMYU2, test ID (moč). Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení katalytické aktivity α-amylázy (EC ; 1,4-α-D-glukan: glukanohydroláza) v lidském séru, plazmě amočinasystémechcobasintegra. Souhrn 1,2,3,4,5,6,7,8,9 α-amylázy (1,4-α-D-glukanohydrolázy, EC ) katalyzují hydrolytický rozklad polymerických uhlovodíků jako je amylóza, amylopektin a glykogen štěpením 1,4-α-glykosidických vazeb. Glykosidické vazby polysacharidů aoligosacharidůjsou většinou hydrolyzovány souběžně. Maltotrióza, nejmenší jednotka, je konvertována na maltózu a glukózu, ale velmi pomalu. Jsou známy dva typy α-amylázy,pankreatická(p-typ)aslinná(s-typ). Zatímco P-typ můžeme přiřadit jednoznačně ke slinivce a je orgánově specifický, S-typ pochází z různých míst. Vedle slinných žlázjemožnésesnímsetkatveslzách,potu,lidskémmléce, plodové vodě, plicích, varlatech a epitelu vejcovodů. Jelikož specifické klinické symptomy pankreatických onemocnění jsou omezené, má stanovení α-amylázy důležitou úlohu při jejich diagnostice. Proto je především užívána pro diagnostiku a monitorování akutní pankreatitidy. Hyperamylasémie se nevztahuje jen na akutní pankreatitidu nebo zánětlivou fázi chronické pankreatitidy, ale vyskytuje se rovněž vespojitosti s renálním selháním (omezená glomerulární filtrace), nádory na plicích, vaječnících, při plicníchchorobách, onemocnění slinných žláz, diabetické ketoacidóze, cerebrálním traumatu, při chirurgických zásazích nebo v případech makroamylasémie. Specifitu pro pankreas je doporučeno potvrdit doplňujícím vyšetřením specifického enzymu pro pankreas - lipázy nebo pankreatické α-amylázy. Stanovení α-amylázy bylo popsáno v četných metodikách. Jejich základem bylo stanovení poklesu substrátu měřením viskozity, turbidimetricky, nefelometricky a amyloklasticky nebo měřením degradačních produktů vznikajících sacharogenním nebo kinetickým způsobem, v enzymy katalyzovaných reakcích.kinetickámetoda,zdepopisovaná,jezaložena na úplném rozštěpení 4,6-etyliden-(G 7 )-1,4-nitrofenyl-(G 1 )- α,d-maltoheptaosid (Ethylidene Protected Substrate = EPS) α-amylázou a následnou hydrolýzou všech degradačních produktů auvolnění p-nitrofenolu s pomocí α-glukosidázy (100% uvolnění chromoforu). Výsledky této metody korelují svýsledkynaměřenými na HPLC. Princip testu 10,11 EnzymatickákolorimetrickámetodadleIFCC. Definované oligosacharidy jako 4,6-etyliden-(G 7 ) p-nitrofenyl-(g 1 )-α,d-maltoheptaosid (etyliden-g 7 PNP) jsou štěpeny katalytickým účinkem α-amyláz. G 2 PNP, G 3 PNP a G 4 PNP fragmenty, takto vytvořené, jsou úplně hydrolyzovány na p-nitrofenol a glukózu α-glukosidázou. Zjednodušené schéma reakce: 5-ethyliden-G 7 PNP a +5H 2 O α-amyláza 2 etyliden-g 5 +2G 2 PNP + 2 etyliden-g 4 +2G 3 PNP + etyliden-g 3 +G 4 PNP 2G 2 PNP + 2 G 3 PNP + G 4 PNP + 14 H 2 O a) PNP =^ p-nitrofenol b) G =^ Glukóza α-glukosidáza Intenzita zabarvení uvolňovaného p-nitrofenolu je přímo úměrná aktivitě α-amylázy. Stanovuje se měřením nárůstu absorbance při 409 nm. 5PNP+14G b , V 4 CS 1 /4

2 Enzymy Reagencie - pracovní roztoky Složky Koncentrace R1 R2 = SR Test HEPES 52,4 52,4 49,1 mmol/l Chlorid sodný mmol/l Chlorid vápenatý 0,08 0,06 mmol/l Chlorid hořečnatý 12,6 9,8 mmol/l α-glukosidáza 66,8 52,3 µkat/l (mikrobiální) ( 3,1 ku/l) Ethyliden-G 7 -PNP 22 3,4 mmol/l ph (37 C) 7,00 7,00 7,00 Obě reagencie obsahují nereaktivní detergenty a stabilizátory. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v této Příručce metod, Kapitola 1, Úvod. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při 10 až 15 C 12 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 700/800 Na palubě při 8 C 12týdnů Odběr vzorků apříprava 9,12 Pro odběr apřípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum. Plazma: Heparin (Li-, Na-, NH + 4 -) nebo EDTA (K 2 -, K 3 -) plazma. HodnotyEDTAplazmyjsoupřibližně o 5-10% nižší než v séru. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn. že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémyodběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Moč: Odběr moči bez aditiv. α-amyláza je nestabilní v kyselé moči. Neprodleně zpracujte nebo před skladováním alkalizujte ph (okolo ph 7). 13 Stabilita v séru: 13 Stabilita v moči: 14 7dnípři C 1měsíc při 2-8 C 2dnypři15-25 C 10 dní při 2-8 C Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) COBAS INTEGRA Cleaner Cassette, Kat. čís , System-ID Doporučujeme dodatečný cyklus mytí, který zabezpečí bezproblémovou kombinaci testu v systému COBAS INTEGRA. Pro více informací ohledně kombinace testu adodatečnéhocyklu mytí viz kapitolu 1, Úvod, Část III. Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce specifické pro jednotlivé analyzátory vyhledejte vnávodukpoužití. Aplikace pro sérum, plazmu a moč COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinetický Způsob reakce R1-S-SR Směr reakce Nárůst Vlnové délky A/B 409/659 nm Výpočet první/posl. 50/69 Jednotky U/L Pipetovací parametry Sérum, plazma a moč Diluent (H 2 O) R1 100 µl Vzorek 4µL 4µL SR 20 µl Celkový objem 128 µl COBAS INTEGRA 700/800 definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinetický Způsob reakce R1-S-SR Směr reakce Nárůst Vlnové délky A/B 409/659 nm Výpočet první/posl. 73/98 Jednotky U/L Pipetovací parametry Sérum, plazma a moč Diluent (H 2 O) R1 100 µl Vzorek 4µL 4µL SR 20 µl Celkový objem 128 µl Kalibrace Kalibrátor Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion. vodu. Typ kalibrace Opakování kalibrace Doporučen duplikát Kalibrační interval Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována ručně podle reagencií Roche v souladu s IFCC. Kontrola kvality Kontrola kvality Precinorm U nebo Precinorm U plus Sérum, plazma Precipath U nebo Precipath U plus Kontrola kvality moči Kvantitativní kontroly močí jsou doporučeny pro rutinní kontrolu kvality. Kontrolní interval Doporučeno 24 hodin Pořadí kontrol Určeno uživatelem Kontrola po kalibraci Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci analytu pro každý vzorek. Pro více informací viz kapitolu 7, Data Analysis (Zpracování dat), návod k 2 / , V 4 CS

3 Enzymy použití (analyzátor COBAS INTEGRA 700) nebo Data analysis (Zpracování dat) v Online Help (nápovědě) (COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktor: U/L 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 15 Nepipetujte ústy a zajistěte, aby reagencie nepřišly do styku s pokožkou. (Sliny a pot obsahují α-amylázu!) Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Žloutenka Bez významných interferencí do hodnoty Iindexu52(přibližná koncentrace konjugovaného bilirubinu: 889 µmol/l nebo 52 mg/dl). Bez významné interference s nekonjugovaným bilirubinem. Hemolýza Bez významných interferencí do hodnoty Hindexu260(přibližná koncentrace hemoglobinu: 161 µmol/l nebo 260 mg/dl). Lipemie Bez významných interferencí. Antikoagulanty Prokázána interference s citrátem a fluoridem. 12 Ostatní Léčivanazákladě icodextrinu mohou vést ke snížení hodnot amylázy. 16 Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účelyjevždynezbytnépoužívat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Rozsah měření Sérum/plazma/moč U/L (0,05-33 µkat/l) Rozšířený rozsah měření (vypočítaný) Faktor postdiluce: 5 doporučeno U/L (0, µkat/l) Spodní detekční limit 3 U/L (0,05 µkat/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako 3-násobek standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 21). Očekávané hodnoty 9 Sérum, plazma U/L (0,47-1,7 µkat/l) Moč spontánní odběr 460 U/L ( 7,7 µkat/l) 24-hod. sběr moči c 410U/24h ( 6,82 µkat/24 h) poměr α-amyláza/kreatinin 310 U/g ( 5,17 µkat/mmol) c) vypočítané hodnoty poměr α-amyláza/kreatinin Kvůli potlačení vlivu odchylek aktivity α-amylázy v moči je vhodné stanovovat poměr α-amylázy/kreatininu. Přitom se stanovuje aktivita α-amylázy a koncentrace kreatininu ve vzorku spontánně odebrané moče. α-amyláza [U/L nebo µkat/l] Poměr [U/g nebo µkat/mmol] = kreatinin [g/l nebo mmol/l] Poměr clearence amyláza/kreatinin (ACCR) 13 ACCR je vypočítáno na základě aktivity amylázy a koncentrace kreatininu. Oba vzorky, sérum i moč, musí být odebrány ve stejnou dobu. Amyláza v moči[u/l]xkreatininvséru[mg/l] ACCR [%] = Amyláza v séru [U/L] x kreatinin v moči[mg/l] 100 ACCR se rovná přibližně 2-5% Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje pro sérum a plazmu Údaje typické pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 21, mezi sériemi n = 21). Byly získány následující výsledky: Level 1 Level 2 Průměr 76 U/L 192 U/L (1,3 µkat/l) (3,2 µkat/l) VK v sérii 1,4% 1,2% Průměr 73 U/L 181 U/L (1,2 µkat/l) (3,0 µkat/l) VK mezi sériemi 1,4% 1,4% Porovnání metod Hodnoty α-amylázy pro vzorky lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 použitím reagencie COBAS INTEGRA (), byly porovnány s výsledky stanovenýmistejnýmireagenciemina analyzátoru Roche/Hitachi 917 a předchozími reagenciemi (AMYLL) na analyzátoru COBAS INTEGRA 700. Analyzátor Roche/Hitachi 917 Počet vzorků (n) = 64 Passing/Bablok 17 y = 0,98x + 0,51 U/L y = 1,00x - 1,28 U/L τ = 0,987 r = 1,000 SD (md 95) = 5,57 Sy.x = 5,59 Hodnoty byly v rozmezí od 22 až 1900 U/L (0,37 až 31,7 µkat/l). Analyzátor COBAS INTEGRA 700 Počet vzorků (n) = 64 Passing/Bablok 17 y = 0,98x + 1,72 U/L y = 0,97x + 3,01 U/L τ = 0,982 r = 1,000 SD (md 95) = 12,22 Sy.x = 5,71 Hodnoty byly v rozmezí od 22 až 1930 U/L (0,37 až 32,2 µkat/l). Specifické technické údaje pro moč Údaje typické pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 21, mezi sériemi n = 21). Byly získány následující výsledky: Level 1 Level 2 Průměr 39,4 U/L 201 U/L (0,66 µkat/l) (3,4 µkat/l) VK v sérii 0,8% 0,4% Průměr 36,7 U/L 189 U/L (0,61 µkat/l) (3,2 µkat/l) VK mezi sériemi 1,0% 1,0% Porovnání metod Hodnoty α-amylázy pro vzorky lidské moči, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 použitím kazety COBAS INTEGRA (), byly porovnány s hodnotami stanovenými stejnými reagenciemi na analyzátoru Roche/Hitachi 917 a předchozími reagenciemi (AMYLL) na analyzátoru COBAS INTEGRA , V 4 CS 3 /4

4 Enzymy Analyzátor Roche/Hitachi 917 Počet vzorků (n) = 59 Passing/Bablok 17 y = 0,98x - 0,32 U/L y = 0,99x - 1,03 U/L τ = 0,988 r = 1,000 SD (md 95) = 17,3 Sy.x = 6,54 Hodnoty byly v rozmezí od 0,66 až 1767 U/L (0,01 až 29,5 µkat/l). Významné doplňky nebo změny jsou označeny prouhou podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim Analyzátor COBAS INTEGRA 700 Počet vzorků (n) = 59 Passing/Bablok 17 y = 0,96x + 0,54 U/L y = 0,95x +1,92U/L τ = 0,991 r = 1,000 SD (md 95) = 18,6 Sy.x = 6,28 Hodnoty byly v rozmezí od 0,64 až 1853 U/L (0,01 až 30,9 µkat/l). Odkazy 1. Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag 1991: Salt WB II, Schenker S. Amylase - its clinical significance: a review of the literature [Review]. Medicine 1976;55: Steinberg WM, Goldstein SS, Davies ND et al. Diagnostic assays in acute pancreatitis [Review]. Ann Intern Med 1985;102: Tietz NW, Huang WY, Rauh DF et al. Laboratory tests in the differential diagnosis of hyperamylasemia. Clin Chem 1986;32: Junge W, Troge B, Klein G et al. Evaluation of a New Assay for Pancreatic Amylase: Performance Characteristics and Estimation of Reference Intervals. Clin Biochem 1989;22: Rauscher E et al. Fresenius Z Analyt Chem 1986;324: Kruse-Jarres JD, Hafkenscheid JCM, Hohenwallner W et al. Evaluation of a New α-amylase Assay Using 4.6-Ethylidene-(G7)-1-4-nitrophenyl-(G1)-α-D-maltoheptaoside as Substrate. J Clin Chem Clin Biochem 1989;27: Junge W, Wortmann W, Wilke B et al. Development and evaluation of assays for the determination of total and pancreatic amylase at 37 C according to the principle recommended by the IFCC. Clin Biochem 2001;34: Erratum Clin Biochem 2003; 36: Lorentz, K. Approved Recommendation on IFCC Methods for the Measurement of Catalytic Concentration of Enzymes. Part 9. IFCC Method for α-amylase (1,4-α-D-Glucan 4-Glucanohydrolase, EC ). Clin Chem Lab Med 1998;36: Kurrle-Weitenhiller A, Hölzel W, Engel D et al. Method for the determination of total and pancreatic α-amylase based on 100% cleavage of the protected substrate ethylidene-4-nitrophenyl-maltoheptaoside. Clin Chem 1996;42(S6):S Young DS. Effects of preclinical variables on clinical laboratory tests. AACC Press, 1997, 2nd ed. 13. Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. Philadelphia, PA: WB Saunders Company 1995: Hohenwallner W, Hägele EO, Scholer A et al. Ber Öster Ges Klin Chem 1983;6: GlickMR,RyderKW,JacksonSA.GraphicalComparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Gokal R et al. Metabolic and laboratory effects of icodextrin. Kidney International, Supp ;62: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: / , V 4 CS

5 V3 Vyznačuje systémy cobas c, na kterých lze reagencie použít Informace pro objednání Systémy Roche/Hitachi cobas c cobas c 311 cobas c tests Kat. č Systémové-ID Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml) Kat. č Kód 401 Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 401 Precinorm U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 300 Precinorm U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 300 Precipath U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 301 Precipath U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 301 Precinorm U (20 x 5 ml) Kat. č Kód 300 Precipath U (20 x 5 ml) Kat. č Kód 301 NaCl Diluent 9% (50 ml) Kat. č Systémové-ID Česky Systémové informace : ACN 570 SAMY2: ACN 566 (STAT, reakční čas: 7) Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení α-amylázy v lidském séru, plazmě a moči na systémech Roche/Hitachi cobas c. Souhrn 1,2,3,4,5,6,7,8,9 α-amylázy (1,4-α-D-glukanohydrolázy, EC ) katalyzují hydrolytický rozklad polymerických uhlovodanů jako je amylóza, amylopektin a glykogen štěpením 1,4-α-glykosidických vazeb. Glykosidické vazby polysacharidů a oligosacharidů jsou většinou hydrolyzovány souběžně. Maltotrióza, nejmenší jednotka, je konvertována na maltózu a glukózu, ale velmi pomalu. Jsou známy dva typy α-amylázy, pankreatická (P-typ) a slinná (S-typ). Zatímco P-typ můžeme přiřadit jednoznačně ke slinivce a je orgánově specifický, S-typ pochází z různých míst. Vedle slinných žláz je možné se s ním setkat ve slzách, potu, lidském mléce, plodové vodě, plicích, varlatech a epitelu vejcovodů. Jelikož specifické klinické symptomy pankreatických onemocnění jsou omezené, má stanovení α-amylázy důležitou úlohu při jejich diagnostice. Proto je především užívána pro diagnostiku a monitorování akutní pankreatitidy. Hyperamylasémie se nevztahuje jen na akutní pankreatitidu nebo zánětlivou fázi chronické pankreatitidy, ale vyskytuje se rovněž ve spojitosti s renálním selháním (omezená glomerulární filtrace), nádory na plicích, vaječnících, při plicních chorobách, onemocnění slinných žláz, diabetické ketoacidóze, cerebrálním traumatu, při chirurgických zásazích nebo v případech makroamylasémie. Specifitu pro pankreas je doporučeno potvrdit doplňujícím vyšetřením specifického enzymu pro pankreas - lipázy nebo pankreatické α-amylázy. Stanovení α-amylázy bylo popsáno v četných metodikách. Jejich základem bylo stanovení poklesu substrátu měřením viskozity, turbidimetricky, nefelometricky a amyloklasticky nebo měřením degradačních produktů vznikajících sacharogenním nebo kinetickým způsobem, v enzymy katalyzovaných reakcích. Kinetická metoda, zde popisovaná, je založena na úplném rozštěpení 4,6-etyliden-(G 7 )-1,4-nitrofenyl-(G 1 )- α,d-maltoheptaosid (Ethylidene Protected Substrate = EPS) α-amylázou a následnou hydrolýzou všech degradačních produktů a uvolnění p-nitrofenolu s pomocí α-glukosidázy (100% uvolnění chromoforu). Výsledky této metody korelují s výsledky naměřenými na HPLC. Toto stanovení se drží doporučení IFCC, bylo ale optimalizováno pro výkon a stabilitu. Princip testu 10,11 Enzymatická kolorimetrická metoda dle IFCC. Definované oligosacharidy jako 4,6-etyliden-(G 7 ) p-nitrofenyl-(g 1 )-α,d-maltoheptaosid (etyliden-g 7 PNP) jsou štěpeny katalytickým účinkem α-amyláz. G 2 PNP, G 3 PNP a G 4 PNP fragmenty, takto vytvořené, jsou úplně hydrolyzovány na p-nitrofenol a glukózu α-glukosidázou. Zjednodušené schéma reakce: α-amyláza 5-ethyliden-G 7 PNP a + 5 H 2 O 2 etyliden-g G 2 PNP + 2 etyliden-g G 3 PNP + etyliden-g 3 + G 4 PNP α-glukosidáza 2 G 2 PNP + 2 G 3 PNP + G 4 PNP + 14 H 2 O 5 PNP + 14 G b a) PNP =^ p-nitrofenol b) G =^ Glukóza Intenzita zabarvení uvolňovaného p-nitrofenolu je přímo úměrná aktivitě α-amylázy. Stanovuje se měřením nárůstu absorbance. Reagencie - pracovní roztoky R1 HEPES: 52,4 mmol/l chlorid sodný: 87 mmol/l; chlorid vápenatý: 0,08 mmol/l; chlorid hořečnatý: 12,6 mmol/l; α-glukosidáza (mikrobiální): 66,8 µkat/l; ph 7,0 (37 C); stabilizátory, konzervans R2 HEPES: 52,4 mmol/l; etyliden-g 7 -PNP: 22 mmol/l; ph 7,0 (37 C); stabilizátory, konzervans Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Bezpečnostní listy jsou dostupné pro odborné uživatele na vyžádání. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: NaCl Diluent 9% Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: Viz datum exspirace na štítku cobas c packu. 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku cobas c packu. 12 týdnů Odběr vzorků a příprava 9,15 Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum Plazma: Li-heparin plazma. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Moč: Odběr moči bez aditiv. α-amyláza je nestabilní v kyselé moči. Neprodleně zpracujte nebo před skladováním alkalizujte ph (okolo ph 7) , V 3 Česky 1 / 4 systémy cobas c

6 Stabilita v séru nebo plazmě: 12 Stabilita v moči: 13 7 dní při C 1 měsíc při 2-8 C 2 dny při C 10 dní při 2-8 C Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Viz část "Informace pro objednání". Destilovaná voda Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce specifické pro jednotlivé analyzátory vyhledejte v návodu k použití. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definováno uživatelem. Aplikace pro sérum, plazmu a moč cobas c 311 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10/22-32 (STAT 7/22-32) Vlnová délka (sub/main) 700/415 nm Směr reakce Nárůst Jednotka Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 100 µl R2 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 4 µl Snížený 8 µl 15 µl 135 µl Zvýšený 8 µl cobas c 501 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10/30-47 (STAT 7/30-47) Vlnová délka (sub/main) 700/415 nm Směr reakce Nárůst Jednotka Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 100 µl R2 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 4 µl Snížený 8 µl 15 µl 135 µl Zvýšený 8 µl Kalibrace Kalibrátory Typ kalibrace Frekvence kalibrace S1: H 2 O S2: C.f.a.s. Linear 2-bodová kalibrace - po změně šarže reagencií - a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle reagencií Roche pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ɛ. Kontrola kvality Sérum/plazma Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Moč Kvantitativní kontroly močí jsou doporučeny pro rutinní kontrolu kvality. Výpočet Systém Roche/Hitachi cobas c automaticky vypočítá koncentraci analytu každého vzorku. Převodní faktor: U/L x 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 14,15 Lehká změna žlutého zabarvení roztoku 2 nemá vliv na samotnou funkci testu. Nepipetujte ústy a zajistěte, aby reagencie nepřišly do styku s pokožkou. Sliny a pot obsahují α-amylázu! Kritérium: Výtěžnost v rámci ±10% počáteční hodnoty při aktivitě amylázy 100 U/L (1,67 µkat/l). Sérum/plazma Ikterus: Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 1026 µmol/l (60 mg/dl)). Hemolýza: Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 500 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 310 µmol/l (500 mg/dl)). Lipemie (Intralipid): Bez významných interferencí do hodnoty L indexu Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Silně zakalené a výrazně lipemické vzorky mohou být označeny Abs. Antikoagulanty: Prokázána interference s citrátem, fluoridem a EDTA. Glukóza: Bez interference glukózy do 111 mmol/l (2000 mg/dl). Přibližně 10% vyšší výtěžnost byla zjištěna při koncentracích glukózy 250 mmol/l (4500 mg/dl). Kys. askorbová: Bez interferencí od kyseliny askorbové až do 5,68 mmol/l (100 mg/dl). Léky: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 16,17 Výjimka: Léčiva na základě icodextrinu mohou vést ke snížení výsledků amylázy. 18 Ve velmi vzácných případech gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), může způsobit nespolehlivé výsledky. Moč Kys. askorbová: Bez interferencí od kyseliny askorbové až do 2,27 mmol/l (40 mg/dl). Přibližně 15% nižší výtěžnost byla zjištěna při koncentracích kyseliny askorbové 22,7 mmol/l (400 mg/dl). Léky: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 16,17 Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Zvláštní požadavky na mytí: Je nezbytné používat speciálních mycích cyklů při zpracovávání určitých kombinací testů v systémech cobas c. Pro informace o kombinacích testu vyžadujících speciální cyklus mytí viz poslední verzi příbalového letáku NaOHD/SMS/Multiclean a příručku pro obsluhu pro další pokyny. Rozsah měření Sérum/plazma/moč U/L (0,05-25,0 µkat/l) Vzorky s vyššími koncentracemi se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:5. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 5. systémy cobas c 2 / , V 3 Česky

7 V3 Spodní detekční limit 3 U/L (0,05 µkat/l) Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard SD, přesnost v sérii, n = 21). Očekávané hodnoty 9 Sérum, plazma U/L (0,47-1,7 µkat/l) Moč spontánní odběr 460 U/L ( 7,7 µkat/l) 24-hod. sběr moče c 410 U/24 h ( 6,82 µkat/24 h) poměr α-amyláza/kreatinin 310 U/g ( 5,17 µkat/g) c) vypočítané hodnoty poměr α-amyláza/kreatinin Kvůli potlačení vlivu odchylek aktivity α-amylázy v moči je vhodné stanovovat poměr α-amylázy/kreatininu. Přitom se stanovuje aktivita α-amylázy a koncentrace kreatininu ve vzorku spontánně odebrané moče. Poměr [U/g nebo µkat/mmol] = α-amyláza [U/L nebo µkat/l] kreatinin [g/l nebo mmol/l] Poměr clearence amyláza/kreatinin (ACCR) 12 ACCR je vypočítáno na základě aktivity amylázy a koncentrace kreatininu. Oba vzorky, sérum i moč, musí být odebrány ve stejnou dobu. ACCR [%] = Amyláza v moči [U/L] x kreatinin v séru [mg/l] Amyláza v séru [U/L] x kreatinin v moči [mg/l] 100 ACCR se rovná přibližně 2-5%. Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 21; celkem n = 63). Následující výsledky byly získány: Sérum/plazma V sérii Průměr SD VK % Precinorm U 83,2 (1,39) 0,8 (0,01) 0,9 Precipath U 182 (3,09) 1 (0,02) 0,6 Lidské sérum 1 34,5 (0,58) 0,4 (0,01) 1,2 Lidské sérum 2 97,9 (1,63) 0,7 (0,01) 0,7 Celkem Průměr SD VK % Precinorm U 84,0 (1,40) 1,1 (0,02) 1,3 Precipath U 184 (3,08) 3 (0,05) 1,5 Lidské sérum 3 35,1 (0,59) 0,9 (0,01) 2,4 Lidské sérum 4 98,9 (1,65) 1,6 (0,03) 1,6 Moč V sérii Průměr SD VK % Hladina kontroly 1 50,6 (0,85) 0,5 (0,01) 0,9 Hladina kontroly (2,74) 1 (0,02) 0,6 Moč 1 21,4 (0,36) 0,2 (0,003) 1,1 Moč 2 68,5 (1,14) 0,7 (0,01) 0,9 Celkem Průměr SD VK % Hladina kontroly 1 51,8 (0,87) 0,9 (0,01) 1,7 Hladina kontroly (2,81) 2 (0,03) 1,1 Moč 3 24,5 (0,41) 0,5 (0,01) 1,9 Moč 4 67,0 (1,12) 2,8 (0,05) 4,2 Porovnání metod Hodnoty amylázy pro vzorky lidského séra, plazmy a moči, získané na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 501 (y), byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím stené reagencie na analyzátoru Roche/Hitachi 917 (x). Sérum/plazma Počet vzorků (n) = 79 Passing/Bablok 19 y = 0,999x + 2,83 U/L y = 0,998x + 4,75 U/L τ = 0,969 r = 0,998 Aktivita vzorků byla v rozmezí 52 až 1409 U/L (0,87 až 23,5 µkat/l). Moč Počet vzorků (n) = 88 Passing/Bablok 19 y = 0,986x + 0,42 U/L y = 0,982x + 2,03 U/L τ = 0,987 r = 1,000 Aktivita vzorků byla v rozmezí 34,3 až 1248 U/L (0,57 až 20,8 µkat/l). Odkazy 1. Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3 rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag, Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2 nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag, 1991; Salt WB II, Schenker S. Amylase - its clinical significance: a review of the literature [Review]. Medicine 1976;55: Steinberg WM, Goldstein SS, Davies ND et al. Diagnostic assays in acute pancreatitis [Review]. Ann Intern Med 1985;102: Tietz NW, Huang WY, Rauh DF et al. Laboratory tests in the differential diagnosis of hyperamylasemia. Clin Chem 1986;32: Junge W, Troge B, Klein G et al. Evaluation of a New Assay for Pancreatic Amylase: Performance Characteristics and Estimation of Reference Intervals. Clin Biochem 1989;22: Rauscher E et al. Fresenius Z Analyt Chem 1986;324: Kruse-Jarres JD, Hafkenscheid JCM, Hohenwallner W et al. Evaluation of a New α-amylase Assay Using 4,6-Ethylidene-(G 7 )-1-4-nitrophenyl-(G 1 )-α-d-maltoheptaoside as Substrate. J Clin Chem Clin Biochem 1989;27: Junge W, Wortmann W et al. Development and evaluation of assays for the determination of total and pancreatic amylase at 37 C according to the principle recommended by the IFCC. Clin Biochem. 2001; 34: Erratum Clin Biochem 2003; 36: Lorentz, K. Approved Recommendation on IFCC Methods for the Measurement of Catalytic Concentration of Enzymes. Part 9. IFCC Method for α-amylase (1,4-α-D-Glucan 4-Glucanohydrolase, EC ). Clin Chem Lab Med 1998;36: Kurrle-Weitenhiller A, Hölzel W, Engel D et al. Method for the determination of total and pancreatic α-amylase based on 100% cleavage of the protected substrate ethylidene-4-nitrophenyl-maltoheptaoside. Clin Chem 1996;42(S6):S Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Company; 1995: Hohenwallner W, Hägele EO, Scholer A et al. Ber Öster Ges Klin Chem 1983;6: Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Young DS. Effects of Preclinical Variables on Clinical Laboratory Tests. AACC Press, 1997, 2 nd edition. 16. Report on the Symposium Drug effects in clinical chemistry methods, Breuer J, Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Gokal R. Metabolic and laboratory effects of icodextrin, Kidney International 2002;62; Supplement 81; Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: , V 3 Česky 3 / 4 systémy cobas c

8 Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim systémy cobas c 4 / , V 3 Česky