Kinetické UV stanovení pro močovinu/dusík močoviny Vyznačuje Roche/Hitachi analyzátory, na kterých lze soupravy použít

Transkript

1 V16 Vyznačuje Roche/Hitachi analyzátory, na kterých lze soupravy použít Kat. č. Nádobka Obsahuje 90 MODULAR x 66 ml 6 x 43 ml 6 x 186 ml 6 x 118 ml 4 x 470 ml 4 x 93 ml 6 x 40 ml 3 x 49 ml Některé zobrazené analyzátory a soupravy nemusí být dostupné ve všech zemích. Pro další systémové aplikace kontaktujte místní zastoupení Roche Diagnostics. Česky Systémové informace Pro analyzátory Roche/Hitachi MODULAR P/MODULAR D: Urea ACN 418, ACN 419; BUN ACN 41, ACN 47. Použití Enzymatické in vitro stanovení pro kvantitativní stanovení močoviny/dusíku močoviny v lidském séru, plazmě a moči na automatizovaných analyzátorech klinické chemie Roche. Souhrn 1,,3,4,5,6,7,8,9 Stanovení močoviny je nejpoužívanějším testem při hodnocení ledvinných funkcí. Tento test je nejčastěji používán spolu se stanovením kreatininu při diferenciální diagnostice prerenálních urémií (dekompenzace srdce, deplece vody, zvýšený katabolismus proteinů), renálních urémií (glomerulonefritida, chronická nefritida, polycystické ledviny, nefroskleróza, tubulární nekróza) a postrenálních hyperurémií (obstrukce močového traktu). ovina je konečným produktem metabolismu bílkovin a aminolyselin. Při katabolismu jsou bílkoviny štěpeny na jednotlivé aminokyseliny a deaminovány. Z amoniaku, vznikajícího v tomto procesu, je v játrech syntetizována močovina. Jedná se o nejdůležitější metabolickou cestu pro odstraňování nadbytku dusíku z lidského těla. V roce 1913 představil Marshall metodu využívající enzym ureázu pro stanovení močoviny v krvi. Amoniak, uvolňovaný z močoviny ureázou, byl měřen titrací. Od té doby byl vyzkoušen bezpočet dalších technik pro měření vytvářeného amoniaku. Mezi ně patří Berthelotova indofenolová metoda a reakce amoniaku s Nesslerovou reagencií. Následně byly publikovány modifikace od Fawcetta a Scotta a od Chaneye s Marbachem. V roce 1965 Talke a Schubert představili plně enzymatický postup stanovení močoviny spojeným systémem enzymů ureáza/glutamát dehydrogenáza (GLDH). Stanovení Roche je založeno na postupu Talkeho a Schuberta a bylo optimalizováno pro analyzátory umožňující kinetické (pevný čas) měření. Toto uspořádání poskytuje velký rozsah linearity a značnou stabilitu reagencií. Princip testu Kinetická UV metoda a přidání R1 Přidání R a zahájení reakce: ovina je hydrolyzována ureázou za vzniku amoniaku a CO 3 -. ureáza močovina + H O NH 4+ + CO 3 - Vznikající amoniak reaguje s α-ketoglutarátem a NADH v přítomnosti GLDH a vytváří glutamát a NAD +. α-ketoglutarát + NH 4+ + NADH GLDH L-glutamát + NAD + + H O Pokles absorbance v důsledku spotřebovávání NADH je měřen kineticky. Reagencie - pracovní roztoky R1 CAPSO a pufr: 5 mmol/l, ph 9.65; NADH (kvasinky) 0.3 mmol/l; konzervans R BICIN b pufr: 1000 mmol/l, ph 7.6; ureáza (fazole) 10 µkat/l; GLDH (hovězí játra) 15.0 µkat/l; α-ketoglutarát 8.3 mmol/l; konzervans a) CAPSO = 3-[cyklohexylamino]--hydroxy-1-propansulfonová kyselina: b) BICIN = N,N-bis(-hydroxyetyl)-glycin Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Zacházení s reagenciemi R1: Připraveno pro použití R: Připraveno pro použití Uskladnění a stabilita Součásti neotevřené soupravy: Do data exspirace při -8 C R1: 4 týdny otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru R: 4 týdny otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné: Plazma: Li-, Na-heparin nebo K-EDTA plazma. Nepoužívejte heparin amonný. Stabilita: 10 7 dní při 15-5 C 7 dní při -8 C 1 rok při (-15)-(-5) C : odebírejte bez použití konzervans. Stabilita: 10 dny při 15-5 C 7 dní při -8 C 4 týdny při (-15)-(-5) C Analyzátory Roche/Hitachi MODULAR: Vzorky moče jsou automaticky ředěny v analyzátoru 0.9% roztokem NaCl nebo destilovanou/deionizovanou vodou. Odpovídající faktor ředění je zahrnut do výpočtu výsledku. Analyzátory Roche/Hitachi bez automatického ředění vzorku: Vzorky moče ručně nařeďte 0.9% roztokem NaCl nebo destilovanou/deionizovanou vodou (např ). Výsledek vynásobte odpovídajícím faktorem ředění (např. 11). Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn. že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce , V 16 Česky 1 / 5 Roche/Hitachi P D

2 Vzorky, obsahující precipitáty, centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Kalibrátor: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems), Kat. č Kontroly: Precinorm U, např. Kat. č nebo Precinorm U plus, Kat. č ; Precipath U, např. Kat. č nebo Precipath U plus, Kat. č , PreciControl ClinChem Multi 1, Kat. č , PreciControl ClinChem Multi, Kat. č Komínky, Kat. č % NaCl Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny, uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definováno uživatelem. Kalibrace Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle SRM c 909b. /moč Tato souprava vyžaduje použití barevně odlišených komínků, které redukují příjem atmosférického NH 3 reagenciemi. Komínky mají být umístěny přímo do odpovídající reagenční nádobky: bílá = R1. Komínky mohou být opět použity pro nádobky stejné soupravy. Komínky se používají ve všech systémech. S1: 0.9% NaCl S: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems) Frekvence kalibrace bodová kalibrace je doporučena: každých 4 dnů po změně šarže reagencií jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality c) SRM = Standard Reference Material Kontrola kvality /moč Ke kontrole kvality použijte neředěné kontrolní materiály uvedené v části "Potřebný materiál". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontrolní intervaly a limity by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátor automaticky vypočítá koncentraci analytu pro každý vzorek. Převodní faktory: mg/dl močoviny x = mmol/l močoviny mmol/l močoviny = mg/dl močoviny mg/dl dusík močoviny x = mmol/l močoviny mg/dl močoviny x = mg/dl dusíku močoviny Při použití 4hod. sběru moče jako vzorku vynásobte výsledek objemem za 4 hodin a získáte g nebo mmol/4 hodin. Omezení - interference Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10 % počáteční hodnoty. Ikterus: 11 Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 60 mg/dl nebo 106 µmol/l). Hemolýza: 11 Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 1000 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 1000 mg/dl nebo 61 µmol/l). Lipémie (Intralipid): 11 Bez významných interferencí do hodnoty L indexu Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Amoniak, vznikající v kyvetě při stanovení GLDH, interferuje se stanovením močoviny/bun. Reagencie močovina/bun nesmí být instalovány na analyzátor společně s reagenciemi stanovení GLDH. Endogenní ioniy amoniaku v moči interferují se stanovením močovina/bun. Zvýšené koncentrace se mohou vyskytovat při zvýšené kyselosti (acidóza). Velká péče musí být věnována předcházení kontaminaci vzorků a kalibrátorů amoniakem, používaným pro metodu močovina/dusík močoviny. Ve velmi vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testů v analyzátorech Roche/Hitachi je nezbytné používat speciální mycí cykly. Pro další pokyny čtěte nejnovější verzi Seznamu zamezení přenosu (carry-over) a příručku pro obsluhu. Uživatelé z USA naleznou pokyny pro speciální mycí cykly v dokumentu Special Wash Programming (umístěném na stránce MyLabOnline) a v příručce pro obsluhu. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vydáním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). Limity a rozmezí Rozsah měření /plazma mmol/l (5-400 mg/dl močoviny nebo -186 mg/dl dusíku močoviny) Analyzátory Roche/Hitachi MODULAR P/MODULAR D: Vzorky s vyššími koncentracemi měřte použitím funkce rerun. Vzorky nařeďte 1:1.5 pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem 1.5. Na přístrojích bez automatického opakování (rerunu) ručně nařeďte vzorek 0.9% roztokem NaCl, destilovanou/deionizovanou vodou (např ). Výsledek vynásobte odpovídajícím faktorem ředění (např. ). Analyzátor Roche/Hitachi 90: mmol/l ( mg/dl močoviny nebo mg/dl dusíku močoviny) Vzorky s vyšší koncentrací stanovte ručním naředěním 0.9% roztokem NaCl nebo destilovanou/deionizovanou vodou (např.1 + ). Výsledek vynásobte odpovídajícím faktorem ředění (např. 3). Vzorky s koncentracemi nižšími než technický limit 66.6 mmol/l (400 mg/dl močoviny nebo 186 mg/dl dusíku močoviny) stanovte neředěné. Analyzátor Roche/Hitachi MODULAR P: mmol/l ( mg/dl močoviny nebo mg/dl dusíku močoviny) Vzorky s vyššími koncentracemi měřte použitím funkce rerun. Vzorky ředíme 1:1.5 pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků, naředěných funkcí rerun, jsou automaticky vynásobeny faktorem 1.5. Vzorky s koncentracemi nižšími než technický limit 66.6 mmol/l (400 mg/dl močoviny nebo 186 mg/dl dusíku močoviny) stanovte pomocí funkce rerun. Vzorky jsou měřeny neředěné. Spodní limity měření Spodní detekční limit testu /plazma Detekční limit: 0.83 mmol/l (5 mg/dl močoviny nebo mg/dl dusíku močoviny) Detekční limit: 1.0 mmol/l (6 mg/dl močoviny nebo.8 mg/dl dusíku močoviny). Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard SD, opakovatelnost, n = 1). Očekávané hodnoty (močovina) /plazma mmol/l ( mg/dl) 4h. moč mmol/4 h ( g/4 h), odpovídá mmol/l ( g/dl) Založeno na průměrné diuréze L/4 h. Roche/Hitachi / , V 16 Česky

3 V16 Očekávané hodnoty (dusík močoviny) /plazma Dospělý (18-60 let): mmol/l (6-0 mg/dl) Dospělý (60-90 let): mmol/l (8-3 mg/dl) Kojenec (<1 rok): mmol/l (4-19 mg/dl) Kojenec/dítě: mmol/l (5-18 mg/dl) 4-hod. moč: mmol/4 h (1-0 g/4 h), odpovídá mmol/l ( mg/dl) d Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. d) Založeno na průměrné diuréze L/4 h Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky, získané v různých laboratořích, se mohou lišit. Preciznost ovina postupu s opakovatelností* (n = 1) a mezilehlou precizností** (3 alikvoty na sérii, 1 série denně, 1 dní). Byly získány následující výsledky: Lidské sérum Precinorm U Precipath U postupu. (n = 1), mezilehlá preciznost** (3 alikvoty na sérii, 1 série denně, 1 dní). Byly získány následující výsledky: Lidská moč Lidská moč Lidská moč Dusík močoviny postupu. (n = 1), mezilehlá preciznost** (3 alikvoty na sérii, 1 série denně, 1 dní). Byly získány následující výsledky: Lidské sérum Precitrol N Precitrol A postupu. (n = 1), mezilehlá preciznost** ( alikvoty na sérii, 1 série denně, 10 dní). Byly získány následující výsledky: Lidská moč Kontrola moč Kontrola moč *opakovatelnost = preciznost v sérii **mezilehlá preciznost = celková preciznost / preciznost mezi sériemi / preciznost mezi dny Porovnání metod ovina Porovnání nové kombinace vlnových délek 700/340 nm (y) a staré 405/340 nm (x), použitím kapalných reagencií Roche pro močovinu na analyzátoru Roche/Hitachi 717, poskytlo následující korelaci (mg/dl močoviny): y = 1.01x y = 1.0x 1.4 r = 1.00 Počet naměřených vzorků: 85 Koncentrace vzorků byly v rozmezí 4.84 až 57.3 mmol/l (9 až 343 mg/dl) močoviny. Porovnání nové kombinace vlnových délek 700/340 nm (y) a staré 376/340 nm (x), použitím kapalných reagencií Roche pro močovinu na analyzátoru Roche/Hitachi 911, poskytlo následující korelaci (mg/dl močoviny): y = 0.99x y = 1.00x r = Počet stanovených vzorků moče: 53 Koncentrace vzorků byly v rozmezí 15.4 až 71 mmol/l (9 až 165 mg/dl) močoviny. Dusík močoviny Porovnání stanovení dusíku močoviny použitím reagencií Roche Diagnostics Germany urea liquid a Roche Diagnostics Corporation urea-n reagent na analyzátoru Roche/Hitachi 917 poskytlo následující korelaci (mg/dl dusíku močoviny): y = 0.99x y = 0.98x r = 1.00 Počet naměřených vzorků: 51 Koncentrace vzorků byly v rozmezí 3.1 až 51.4 mmol/l (9 až 144 mg/dl) dusíku močoviny. Porovnání stanovení dusíku močoviny použitím reagencií Roche Diagnostics Germany urea liquid a Roche Diagnostics Corporation urea-n reagent na analyzátoru Roche/Hitachi 917 poskytlo následující korelaci (mg/dl N-močoviny): y = 0.975x y = 0.958x r = Počet naměřených vzorků: 30 Koncentrace vzorků byly v rozmezí 35.0 až 451 mmol/l (98 až 16 mg/dl) dusíku močoviny , V 16 Česky 3 / 5 Roche/Hitachi

4 Odkazy 1. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co, 1976:991.. Marshall EK Jr. A new method for the determination of urea in blood. J Biol Chem 1913;15: Berthelot MPE. Repert Chim Appl 1859;8. 4. Gentzkow CJ. An accurate method for the determination of blood urea nitrogen by direct Nesslerization. J Biol Chem 194;143: Fawcett JK, Scott JE. A rapid and precise method for the determination of urea. J Clin Path 1960;13: Chaney AL, Marbach EP. Modified reagents for determination of urea and ammonia. Clin Chem 196;8: Talke H, Schubert GE. Enzymatische Harnstoffbestimmung im Blut und Serum im optischen Test nach Warburg. Klin Wschr 1965;43: Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 rd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders, 1995: Neumann U, Ziegenhorn J. Scand J Clin Lab Invest 1977;37, Supplement 147: Abstract Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.. Jan Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;3: Löhr B, El-Samalouti V, Junge W et al. Reference Range Study for Various Parameters on Roche Clinical Chemistry Analyzers. Clin Lab 009;55: Wu AHB, Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th ed., St. Louis (MO), WB Saunders Company, 006. p Passing H, Bablok W, Bender R, et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;Nov:6(11); Nastavení přístroje US uživatelé: Doplňující informace o ovládání vyhledejte v aplikačním letáku a dokumentu Special Wash Programming (umístěny na internetové stránce MyLabOnline). Uživatelé analyzátorů Roche/Hitachi MODULAR: Zadejte aplikační parametry prostřednictvím letáku s čárovým kódem. Analyzátor Roche/Hitachi 90 No. <Chemistry> 1 Test Name UREA Assay Code (Mthd) Point Kin. 3 Assay Code (. Test) 0 4 Reaction Time 5 5 Assay Point Assay Point 15 7 Assay Point Assay Point Wavelength (SUB) Wavelength (MAIN) Sample Volume R1 Volume R1 Pos R1 Bottle Size Large 15 R Volume R Pos R Bottle Size Large 18 R3 Volume 0 19 R3 Pos. 0 0 R3 Bottle Size Small 1 Calib. Type (Type) Linear Calib. Type (Wght) 0 3 Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos S1 ABS 0 36 K Factor K Factor K3 Factor K4 Factor K5 Factor A Factor 0 4 B Factor 0 43 C Factor 0 44 SD Limit Duplicate Limit Sens. Limit S1 Abs. Limit (L) S1 Abs. Limit (H) Abs. Limit Abs. Limit (D/I) Decrease 51 Prozone Limit 0 5 Proz. Limit (Upp/Low) Lower 53 Prozone (Endpoint) Expect. Value (L) Expect. Value (H) Instr. Fact. (a) 1 57 Instr. Fact. (b) 0 58 Key setting Data vložená obsluhou Roche/Hitachi 4 / , V 16 Česky

5 V16 Další informace naleznete v odpovídajícím návodu k použití analyzátoru, v odpovídajících aplikačních letácích a pokynech pro použití všech potřebných komponent. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 01, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim , V 16 Česky 5 / 5 Roche/Hitachi