Alanine Aminotransferase Liquid Reagent Alanin aminotransferáza (ALTL)

Transkript

1 Alanine Aminotransferase Liquid Reagent Alanin aminotransferáza () Kapalná reagencie Informace pro objednání COBAS INTEGRA 500 Tests Kat. č Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít Alanine Aminotransferase Systémové-ID Calibrator f.a.s ml Kat. č Calibrator f.a.s. (pro USA) 12 3 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U plus 10 3 ml Kat. č Precinorm U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U plus 10 3 ml Kat. č Precipath U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Systémové informace COBAS INTEGRA Alanine Aminotransferase () Test, test ID Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení katalytické aktivity ALT (EC ; L-alanin: 2-oxoglutarát aminotransferáza) v lidském séru a plazmě na systémech COBAS INTEGRA. Tento příbalový leták popisuje aplikaci bez aktivace pyridoxal fosfátem (test, 0-495). Aplikace pro ALT, aktivovanou pyridoxal fosfátem, je popsána v příbalovém letáku Alanine Aminotransferase Pyridoxal Phosphate Activated (Liquid Reagent). Souhrn 1,2 Enzym alanin aminotransferáza (ALT) je hojně přítomný v různých tkáních. Hlavním zdrojem ALT jsou játra, což vede ke stanovení aktivity ALT při diagnostice jaterních onemocnění. Zvýšené hodnoty ALT se objevují při hepatitidě, cirhóze, obstrukční žloutence, karcinomech jater a chronickém alkoholovém abusu. ALT je slabě zvýšená u pacientů, kteří mají nekomplikovaný infarkt myokardu. Ačkoliv hodnoty aspartát aminotransferázy (AST) a ALT rostou kdykoliv, když dochází při onemocnění k narušení integrity buněk jater, je ALT specifičtějším enzymem pro játra. Navíc zvýšené hodnoty ALT přetrvávají déle než aktivita AST. V séru pacientů s deficitem vitamínu B 6 může být aktivita aminotransferázy snížená. Zdánlivý pokles aktivity ALT může být způsoben nižší hladinou pyridoxal fosfátu, prostetické skupiny aminotransferáz, která zvyšuje poměr apoenzymu ku holoenzymu. Princip testu Metoda dle International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), ale bez pyridoxal-5 -fosfátu. 3,4 ALT katalyzuje reakci mezi L-alaninem a 2-oxoglutarátem. Vytvářený pyruvát je pak redukován NADH v reakci katalyzované laktátdehydrogenázou (LDH) na L-laktát a NAD +. L-Alanin + 2-oxoglutarát ALT pyruvát + L-glutamát LDH Pyruvát + NADH + H + L-laktát + NAD + Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě ALT. Stanovuje se měřením poklesu absorbance při 340 nm. Reagencie - pracovní roztoky Složky Koncentrace R1 R2=SR Test TRIS mmol/l L-Alanin mmol/l LDH (mikrobiální) µkat/l ( 1,2 ku/l) Albumin (hovězí) 0,25 0,11 % NADH 1,7 0,2 mmol/l 2-Oxoglutarát mmol/l ph (37 C) 7,3 7,3 Reagencie obsahují nereaktivní stabilizátory (R1), nereaktivní pufr (R2) a nereaktivní konzervans (R1, R2). Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v této Příručce metod, Kapitola 1, Úvod. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při 10 až 15 C 12 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 800 Na palubě při 8 C 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky , V 5 CS 1 / 3

2 Enzymy Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum (bez hemolýzy). Plazma (bez hemolýzy): Li-heparinová nebo EDTA plazma. Nepoužívejte jiné antikoagulanty. Sérum bez hemolýzy je vhodným vzorkem. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Stabilita: 3 dny při C 5,6 7 dní při 2-8 C 5,6 >7 dní při -70 C 6 Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Aplikace pro sérum a plazmu COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-S-SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 39/64 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 59 µl 10 µl Vzorek 11 µl 26 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Způsob měření Způsob výpočtu abs. Způsob reakce Vlnové délky A/B Výpočet první/posl. 54/97 Jednotka U/L Pipetovací parametry Absorbance Kinsearch R1-S-SR 340/378 nm Diluent (H 2 O) R1 59 µl 10 µl Vzorek 11 µl 26 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl Kalibrace Kalibrátor Typ kalibrace Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion. vodu. Lineární regrese Opakování kalibrace Kalibrační interval Doporučen duplikát Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle původní přípravy IFCC, ale bez pyridoxal-5 -fosfátu, pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 7 Kontrola kvality Referenční rozmezí Patologické rozmezí Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Precinorm U nebo Precinorm U plus Precipath U nebo Precipath U plus Doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají aktivitu analytu pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktor: U/L 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Ikterus Hemolýza Lipémie (Intralipid) Antikoagulanty Léky Bez významných interferencí. Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 130 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 81 µmol/l nebo 130 mg/dl). Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Citrát a fluorid inhibují enzymovou aktivitu. Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Dobesilát vápenatý a doxycyklin HCl způsobuje uměle nízké hodnoty ALT při testovaných hladinách léčiv. Izoniazid může způsobovat uměle nízké výsledky alaninaminotransferázy při terapeutických koncentracích. Hydroxokobalamin (Cyanokit) může způsobit falešně nízké výsledky. Ostatní Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Zvláštní požadavky na mytí Při zpracovávání určitých kombinací testů v analyzátorech COBAS INTEGRA je nezbytné používat speciální mycí kroky. Pro 2 / , V 5 CS

3 Enzymy více informací o kombinacích testu vyžadujících extra mycí cykly čtěte, prosím, Příručku metod, Úvod, Extra mycí cykly (EWC). Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Rozsah měření U/L (0,03-11,7 µkat/l) Vzorky s vyššími aktivitami se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 2 U/L (0,03 µkat/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 30). Očekávané hodnoty 11 Dle optimalizované standardní metody (srovnatelné s metodou IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem 12 ): Muži do 41 U/L (do 0,68 µkat/l) Ženy do 33 U/L (do 0,55 µkat/l) Vypočítané hodnoty: Pro konverzi od 25 C do 37 C je použit faktor 1, Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Hladina 1 Hladina 2 Průměr 35 U/L 132 U/L (0,58 µkat/l) (2,20 µkat/l) VK v sérii 1,0% 0,47% VK mezi sériemi 1,5% 1,9% Porovnání metod Hodnoty ALT ve vzorcích lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 s použitím COBAS INTEGRA Alanine Aminotransferase reagent(), byly porovnány s výsledky stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro ALT na analyzátoru COBAS INTEGRA a alternativními biochemickými systémy. Vzorky byly měřeny v duplikátu. Počet (n) představuje všechny replikáty. Analyzátor COBAS INTEGRA Alternativní systém Počet vzorků (n) Korel. koeficient (r) 1,000 1,000 (r s ) 0,998 0,995 Lin. regrese y = 1,07x - 2,3 U/L y = 0,98x + 0,8 U/L Passing/Bablok 14 y = 1,06x - 1,8 U/L y = 0,98x + 0,9 U/L Hodnoty byly v rozmezí od 4 do 496 U/L (0,07 až 8,27 µkat/l). Odkazy 1. Sherwin JE. Liver function. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation. St. Louis: Mosby 1984: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 3. IFCC method for alanine aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-alanine aminotransferase (EC , ALAT) Klin Chem Mitt 1989;20: Heins M, Heil H, Withold W. Storage of Serum or Whole Blood Samples? Effect of Time and Temperature on 22 Serum Analytes. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1995;33: Data on file at Roche Diagnostics. 7. Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C - Part 4. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Alanine Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Report on the Symposium Drug effects in clinical chemistry methods, Breuer J, Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Thefeld W, Hoffmeister H, Busch, E-W, Koller PU, Vollmar J. Referenzwerte für die Bestimmungen der Transaminasen GOT und GPT sowie der alkalischen Phosphatase im Serum mit optimierten Standardmethoden. Dtsch Med Wschr 1974;99: Klein G, Lehmann P, Michel E, Regenauer H. Vergleich der IFCC-Methoden für ALAT, ASAT und GGT bei 37 C mit den eingeführten Standardmethoden bei 25 C und 37 C. Lab Med 1994;18: Zawta B, Klein G, Bablok W. Temperaturumrechnung in der klinischen Enzymologie? Klin Lab 1994;40: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim , V 5 CS 3 / 3

4 Alanine Aminotransferase Pyridoxal Phosphate Activated (Liquid Reagent) Alanin aminotransferáza (ALTPL) Aktivovaná pyridoxal fosfátem (kapalná reagencie) Informace pro objednání COBAS INTEGRA 500 Tests Kat. č Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít Alanine Aminotransferase Systémové-ID Calibrator f.a.s ml Kat. č Calibrator f.a.s. (pro USA) 12 3 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U 20 5 ml Kat. č Systémové-ID Precinorm U plus 10 3 ml Kat. č Precinorm U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Precipath U plus 10 3 ml Kat. č Precipath U plus (pro USA) 10 3 ml Kat. č Systémové-ID Pyridoxal fosfát ml Kat. č Systemové-ID Systémové informace COBAS INTEGRA Alanine Aminotransferase () Test ALTPL, test ID Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení katalytické aktivity ALT (EC ; L-alanin: 2-oxoglutarát aminotransferáza) v lidském séru a plazmě na systémech COBAS INTEGRA. Tento příbalový leták popisuje aplikaci s aktivací pyridoxal fosfátem (test ALTPL, 0-595). Aplikace pro ALT bez pyridoxal fosfátu je popsána v příbalovém letáku Alanine Aminotransferase Liquid Reagent. Souhrn 1,2 Enzym alanin aminotransferáza (ALT) je hojně přítomný v různých tkáních. Hlavním zdrojem ALT jsou játra, což vede ke stanovení aktivity ALT při diagnostice jaterních onemocnění. Zvýšené hodnoty ALT se objevují při hepatitidě, cirhóze, obstrukční žloutence, karcinomech jater a chronickém alkoholovém abusu. ALT je slabě zvýšená u pacientů, kteří mají nekomplikovaný infarkt myokardu. Ačkoliv hodnoty aspartát aminotransferázy (AST) a ALT rostou kdykoliv, když dochází při onemocnění k narušení integrity buněk jater, je ALT specifičtějším enzymem pro játra. Navíc zvýšené hodnoty ALT přetrvávají déle než aktivita AST. Přidání pyridoxal fosfátu k metodě způsobuje zvýšení aktivity aminotransferáz. Aktivace je vyšší u AST než u ALT. Aktivace pyridoxal fosfátem předchází falešnému snížení aktivity aminotransferáz ve vzorcích pacientů s nedostatkem endogenního pyridoxal fosfátu (deficit vitamínu B 6 ). Princip testu Metoda dle International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), s pyridoxal-5 -fosfátem. 3,4 ALT katalyzuje reakci mezi L-alaninem a 2-oxoglutarátem. Vytvářený pyruvát je pak redukován NADH v reakci katalyzované laktátdehydrogenázou (LDH) na L-laktát a NAD +. Pyridoxal fosfát slouží jako koenzym při přenosu aminoskupiny v reakci. Zajišťuje úplnou aktivaci enzymů. L-Alanin + 2-oxoglutarát ALT pyruvát + L-glutamát LDH Pyruvát + NADH + H + L-laktát + NAD + Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě ALT. Stanovuje se měřením poklesu absorbance při 340 nm. Reagencie - pracovní roztoky Složky Koncentrace R1 SD R2=SR Test TRIS mmol/l L-Alanin mmol/l LDH (mikrobiální) µkat/l ( 1,2 ku/l) Albumin (hovězí) 0,25 0,11 % Pyridoxal phosphate µmol/l NADH 1,7 0,2 mmol/l 2-Oxoglutarát mmol/l ph (37 C) 7,3 7,3 Reagencie obsahují nereaktivní stabilizátory (R1), nereaktivní pufry (SD, R2) a konzervans (R1, SD, R2). Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v této Příručce metod, Kapitola 1, Úvod. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití , V 5 CS 1 / 4 ALTPL

5 Enzymy Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 až 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus Na palubě při 10 až 15 C 12 týdnů Systémy COBAS INTEGRA 800 Na palubě při 8 C 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum (bez hemolýzy). Plazma (bez hemolýzy): Li-heparinová nebo EDTA plazma. Nepoužívejte jiné antikoagulanty. Sérum bez hemolýzy je vhodným vzorkem. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Stabilita: 3 dny při C 5,6 7 dní při 2-8 C 5,6 >7 dní při -70 C 6 Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Pyridoxal Phosphate, Kat. č , System-ID Roztok pyridoxal fosfátu je připraven k použití a je umístěn do své předdefinované pozice ve stojánku. Jedna nádobka postačuje pro 500 testů a je stabilní na palubě 8 týdnů. Stanovení Nejvhodnějšího provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Aplikace pro sérum a plazmu COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-SD S-SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 39/64 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 59 µl 10 µl Vzorek 11 µl 8 µl Speciální diluent (SD) 18 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Způsob měření Absorbance Způsob výpočtu abs. Kinsearch Způsob reakce R1-SD/S-SR Vlnové délky A/B 340/378 nm Výpočet první/posl. 54/97 Jednotka U/L Pipetovací parametry Diluent (H 2 O) R1 59 µl 10 µl Vzorek 11 µl Speciální diluent (SD) 18 µl 8 µl SR 17 µl 9 µl Celkový objem 132 µl Kalibrace Kalibrátor Typ kalibrace Opakování kalibrace Kalibrační interval Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion. vodu. Lineární regrese Doporučen duplikát Každá šarže a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle původní přípravy IFCC pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 7 Kontrola kvality Referenční rozmezí Patologické rozmezí Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Precinorm U nebo Precinorm U plus Precipath U nebo Precipath U plus Doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte platná vládní nařízení a lokální směrnice pro kontrolu kvality. Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají aktivitu analytu pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Převodní faktor: U/L 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ±10% počáteční hodnoty. Sérum, plazma Ikterus Hemolýza Bez významných interferencí. Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 130 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 81 µmol/l nebo 130 mg/dl). ALTPL 2 / , V 5 CS

6 Enzymy Lipémie (Intralipid) Antikoagulanty Léky Ostatní Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Citrát a fluorid inhibují enzymovou aktivitu. Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Dobesilát vápenatý a doxycyklin HCl způsobuje uměle nízké hodnoty ALT při testovaných hladinách léčiv. Izoniazid může způsobovat uměle nízké výsledky alaninaminotransferázy při terapeutických koncentracích. Hydroxokobalamin (Cyanokit) může způsobit falešně nízké výsledky. Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky. Hladina 1 Hladina 2 Průměr 41 U/L 132 U/L (0,68 µkat/l) (2,20 µkat/l) VK v sérii 1,5% 0,73% VK mezi sériemi 2,0% 1,3% Porovnání metod Hodnoty ALT pro vzorky lidského séra a plazmy získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 s COBAS INTEGRA Alanine Aminotransferase reagent () a pyridoxal fosfátem jako speciálním diluentem byly porovnány s výsledky stanovenými komerčně dostupnými reagenciemi pro ALT (s pyridoxal fosfátem) na analyzátoru COBAS INTEGRA a biochemických systémech alternativních výrobců. Vzorky byly měřeny v duplikátu. Počet (n) představuje všechny replikáty. Analyzátor COBAS INTEGRA Alternativní systém Počet vzorků (n) Korel. koeficient (r) 1,000 0,999 (r s ) 0,998 0,997 Lin. regrese y = 1,06x - 2,3 U/L y = 1,03x + 0,3 U/L Passing/Bablok 13 y = 1,05x - 1,8 U/L y = 1,03x + 0,6 U/L Hodnoty byly v rozmezí od 4 až 446 U/L (0,07 až 7,43 µkat/l). Zvláštní požadavky na mytí Při zpracovávání určitých kombinací testů v analyzátorech COBAS INTEGRA je nezbytné používat speciální mycí kroky. Pro více informací o kombinacích testu vyžadujících extra mycí cykly čtěte, prosím, Příručku metod, Úvod, Extra mycí cykly (EWC). Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Rozsah měření U/L (0,03-11,7 µkat/l) Vzorky s vyššími aktivitami se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 2 U/L (0,03 µkat/l) Detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky od vzorku s nulovou hodnotou (nulový vzorek + 3 SD, přesnost v sérii, n = 30). Očekávané hodnoty Dle IFCC/Standard Method 94 s aktivací pyridoxal fosfátem měřeno při 37 C: 11 Muži U/L (0,17-0,83 µkat/l) Ženy U/L (0,17-0,58 µkat/l) Konsenzuální hodnoty s aktivací pyridoxal fosfátem: 12 Muži do 50 U/L (do 0,83 µkat/l) Ženy do 35 U/L (do 0,58 µkat/l) Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena analýzou lidských vzorků a kontrol podle interního postupu (v sérii n = 20, mezi sériemi n = 20). Byly získány následující výsledky: Odkazy 1. Sherwin JE. Liver function. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation. St. Louis: Mosby 1984: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 3. IFCC method for alanine aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-alanine aminotransferase (EC , ALAT) Klin Chem Mitt 1989;20: Heins M, Heil H, Withold W. Storage of Serum or Whole Blood Samples? Effect of Time and Temperature on 22 Serum Analytes. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1995;33: Data on file at Roche Diagnostics. 7. Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C - Part 4. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Alanine Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Breuer J, Report on the Symposium Drug Effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Klauke R, Schmidt E, Lorentz K. Recommendations for carrying out standard ECCLS procedures (1988) for the catalytic concentrations of creatine kinase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase and γ-glutamyltransferase at 37 C. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31: Thomas L et al. Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum. J Lab Med 2005;29(5): , V 5 CS 3 / 4 ALTPL

7 Enzymy 13. Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics. Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim ALTPL 4 / , V 5 CS

8 V4 Alanine Aminotransferase acc. to IFCC without pyridoxal phosphate activation Vyznačuje systémy cobas c, na kterých lze reagencie použít Informace pro objednání Systémy Roche/Hitachi cobas c Alanine Aminotransferase acc. to IFCC cobas c 311 cobas c tests Kat. č Systémové-ID Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml) Kat. č Kód 401 Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 401 Precinorm U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 300 Precinorm U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 300 Precipath U plus (10 x 3 ml) Kat. č Kód 301 Precipath U plus (10 x 3 ml, pro USA) Kat. č Kód 301 Precinorm U (20 x 5 ml) Kat. č Kód 300 Precipath U (20 x 5 ml) Kat. č Kód 301 NaCl Diluent 9% (50 ml) Kat. č Systémové-ID Česky Systémové informace : ACN 685 Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení alanin aminotransferázy (ALT) v lidském séru a plazmě na systémech Roche/Hitachi cobas c. Souhrn 1,2 Enzym alanin aminotransferáza (ALT) je hojně přítomný v různých tkáních. Hlavním zdrojem ALT jsou játra, což vede ke stanovení aktivity ALT při diagnostice jaterních onemocnění. Zvýšené hodnoty ALT se objevují při hepatitidě, cirhóze, obstrukční žloutence, karcinomech jater a chronickém alkoholovém abusu. ALT je slabě zvýšená u pacientů, kteří mají nekomplikovaný infarkt myokardu. Ačkoliv hodnoty aspartát aminotransferázy (AST) a ALT rostou kdykoliv, když dochází při onemocnění k narušení integrity buněk jater, je ALT specifičtějším enzymem pro játra. Navíc zvýšené hodnoty ALT přetrvávají déle než aktivita AST. V séru pacientů s deficitem vitamínu B 6 může být aktivita aminotransferázy snížená. Zdánlivý pokles aktivity ALT může být způsoben nižší hladinou pyridoxal fosfátu, prostetické skupiny aminotransferáz, která zvyšuje poměr apoenzymu ku holoenzymu. Princip testu Toto stanovení se drží doporučení IFCC, bylo ale optimalizováno pro výkon a stabilitu. 3,4 ALT katalyzuje reakci mezi L-alaninem a 2-oxoglutarátem. Vytvářený pyruvát je pak redukován NADH v reakci katalyzované laktátdehydrogenázou (LDH) na L-laktát a NAD +. Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: 12 týdnů NaCl Diluent 9% Doba skladování při 2-8 C: Při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: 12 týdnů Viz datum exspirace na štítku cobas c packu. Viz datum exspirace na štítku cobas c packu. Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou vhodné ke stanovení. Sérum (bez hemolýzy). Plazma (bez hemolýzy): Li-heparinová a K 2 -EDTA plazma. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Oddělujte ihned sérum a plazmu od sraženiny nebo buněk. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením testu. Stabilita: 3 dny při C 6,7 7 dní při 2-8 C 6,7 >7 dní při (-60) (-80) C 7 L-Alanin + 2-oxoglutarát ALT pyruvát + L-glutamát LDH Pyruvát + NADH + H + L-laktát + NAD + Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě ALT. Stanovuje se měřením poklesu absorbance. Reagencie - pracovní roztoky R1 TRIS pufr: 224 mmol/l, ph 7,6 (25 C); L-alanin: 1120 mmol/l; albumin (hovězí): 0,25%; LDH (mikroorganismy): 45 µkat/l; stabilizátory; konzervans R2 2-Oxoglutarát: 94 mmol/l; NADH: 1,7 mmol/l; aditiva; konzervans. Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Bezpečnostní listy jsou dostupné pro odborné uživatele na vyžádání. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Zacházení s reagenciemi Připraveno pro použití. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Viz část "Informace pro objednání". Destilovaná voda Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního provedení stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v návodu k použití. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definováno uživatelem , V 4 Česky 1 / 3 systémy cobas c

9 Alanine Aminotransferase acc. to IFCC without pyridoxal phosphate activation Aplikace pro sérum a plazmu cobas c 311 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10 / Vlnová délka (sub/main) 700/340 nm Jednotky Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 59 µl 32 µl R2 17 µl 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 9 µl Snížený 9 µl 15 µl 135 µl Zvýšený 18 µl cobas c 501 definice testu Typ stanovení Rate A Reakční čas / Body stanovení 10 / Vlnová délka (sub/main) 700/340 nm Jednotky Pipetování reagencie Diluent (H 2 O) R1 59 µl 32 µl R2 17 µl 20 µl Množství vzorku Vzorek Ředění vzorku Vzorek Diluent (NaCl) Běžný 9 µl Snížený 9 µl 15 µl 135 µl Zvýšený 18 µl Kalibrace Kalibrátory Typ kalibrace Frekvence kalibrace S1: H 2 O S2: C.f.a.s. Linear 2-bodová kalibrace - po změně šarže reagencií - a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle originální formulace IFCC, ale bez Pyp, použitím kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, ε. 5 Kontrola kvality Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Jiný vhodný kontrolní materiál může být rovněž použit. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v požadovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí požadované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Systém Roche/Hitachi cobas c automaticky vypočítá koncentraci analytu každého vzorku. Převodní faktor: U/L x 0,0167 = µkat/l Omezení - interference 8 Kritérium: Výtěžnost v rámci ±10% počáteční hodnoty při aktivitě ALT 30 U/L (0,5 µkat/l). Ikterus: Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 1026 µmol/l (60 mg/dl)). Hemolýza: Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 200 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 124 µmol/l (200 mg/dl)). Kontaminace erytrocyty zvýší výsledky, protože hladina analytu v erytrocytech je vyšší než v běžném séru. Úroveň interference může kolísat v závislosti na obsahu analytu v lyzovaných erytrocytech. Lipemie (Intralipid): Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi koncentrací triglyceridů a L indexem (odpovídá zákalu) je slabá korelace. Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs. Doporučuje se naředěný vzorek zpracovat automatickým rerunem. Léky: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference 9,10 Výjimka: Dobesilát vápenatý a Isoniazid způsobují uměle nízké výsledky. Cyanokit (Hydroxokobalamin) může způsobit ovlivnění výsledků. Ve velmi vzácných případech gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), může způsobit nespolehlivé výsledky. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s chorobopisem pacienta, klinickým vyšetřením a ostatními nálezy. Zvláštní požadavky na mytí: Je nezbytné používat speciálních mycích cyklů při zpracovávání určitých kombinací testů v systémech Roche/Hitachi cobas c. Pro informace o kombinacích testu vyžadujících speciální cyklus mytí viz poslední verzi Seznamu vyhnutí se přenosu mezi vzorky (carry-over) a příručku pro obsluhu pro další pokyny. Rozsah měření U/L (0,08-11,7 µkat/l) Vzorky s vyššími koncentracemi se vyšetřují pomocí funkce rerun. Naředění vzorků pomocí funkce rerun je ředěním 1:10. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 10. Spodní detekční limit 5 U/L (0,08 µkat/l) Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard SD, přesnost v sérii, n = 21). Očekávané hodnoty 11 Dle optimalizované standardní metody (srovnatelné s metodou IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem 12 ): Muži do 41 U/L až do 0,68 µkat/l Ženy do 33 U/L až do 0,55 µkat/l Vypočítané hodnoty: Pro konverzi od 25 C do 37 C je použit faktor 1, Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické technické údaje Údaje typické pro analyzátory jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Přesnost Reprodukovatelnost byla stanovena opakovanou analýzou lidských vzorků podle interního postupu (v sérii n = 21; celkem n = 60). Byly získány následující výsledky: V sérii Průměr SD VK % Precinorm U 39,5 (0,66) 0,3 (0,01) 0,6 Precipath U 120 (2,00) 1 (0,01) 0,4 Lidské sérum (1,89) 0,5 (0,01) 0,4 Lidské sérum 2 7,2 (0,12) 0,7 (0,01) 9,3 Celkem Průměr SD VK % Precinorm U 39,3 (0,66) 0,6 (0,01) 1,4 Precipath U 120 (2,00) 1 (0,02) 1,0 Lidské sérum 3 24,0 (0,40) 0,6 (0,01) 2,6 Lidské sérum 4 98,1 (1,64) 3,2 (0,05) 3,3 systémy cobas c 2 / , V 4 Česky

10 V4 Alanine Aminotransferase acc. to IFCC without pyridoxal phosphate activation Porovnání metod Hodnoty ALT pro vzorky lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 501 (y), byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím stejné reagencie na analyzátoru Roche/Hitachi 917 (x). Počet vzorků (n) = 198 Passing/Bablok 14 Lineární regrese y = 1,000x - 0,29 U/L y = 0,997x - 1,05 U/L τ = 0,924 r = 0,996 Aktivita vzorků byla v rozmezí 4,6 až 383 U/L (0,08 až 6,4 µkat/l). Odkazy 1. Sherwin JE. Liver function. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation. St. Louis: Mosby 1984: Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF. Enzymes. In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: WB Saunders 1987: Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 3. IFCC method for alanine aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-alanine aminotransferase (EC , ALAT) Klin Chem Mitt 1989;20: Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C Part 4. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Alanine Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7): Heins M, Heil H, Withold W. Storage of Serum or Whole Blood Samples? Effect of Time and Temperature on 22 Serum Analytes. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1995;33: Data on file at Roche Diagnostics. 8. Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Report on the Symposium Drug effects in clinical chemistry methods, Breuer J, Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interferences in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Thefeld W, Hoffmeister H, Busch, E-W, Koller PU, Vollmar J. Referenzwerte für die Bestimmungen der Transaminasen GOT und GPT sowie der alkalischen Phosphatase im Serum mit optimierten Standardmethoden. Dtsch Med Wschr 1974;99: Klein G, Lehmann P, Michel E, Regenauer H. Vergleich der IFCC-Methoden für ALAT, ASAT und GGT bei 37 C mit den eingeführten Standardmethoden bei 25 C und 37 C. Lab Med 1994;18: Zawta B, Klein G, Bablok W. Temperaturumrechnung in der klinischen Enzymologie? Klin Lab 1994;40: Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim , V 4 Česky 3 / 3 systémy cobas c