A1C-3. Tina-quant Hemoglobin A1c 3. generace - Aplikace pro hemolyzát a plnou krev Informace pro objednání

Transkript

1 Informace pro objednání Tina-quant Hemoglobin A1c Gen testů Calibrator f.a.s. HbA1c (3 x 2 ml) Kód PreciControl HbA1c norm (4 1 ml) Kód PreciControl HbA1c path (4 1 ml) Kód Hemolyzing Reagent Gen.2 (51 ml)* Systémové ID HbA1c Hemolyzing Reagent pro Pouze pro Aplikaci Tina quant HbA1c (1000 ml) pro hemolyzát * Hodnota zakódovaná v nastavení přístroje je 45 ml pro započtení mrtvého objemu nádobky. Analyzátory, na kterých lze cobas c pack(y) použít Systémové ID Roche/Hitachi cobas c 311, cobas c 501/502 Česky Systémové informace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP HB-W3: ACN 871 Hemoglobin (Hb) A1-W3: ACN 881 Hemoglobin A1c (HbA1c) RWD3: ACN 891 Poměr HbA1c (podle DCCT/NGSP) A1CD2: ACN 952 Hemolyzační reagencie Aplikace pro hemolyzát - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP HB-H3: ACN 841 Hemoglobin (Hb) A1 H3: ACN 851 Hemoglobin A1c (HbA1c) RHD3: ACN 861 Poměr HbA1c (podle DCCT/NGSP) A1CD2: ACN 952 Hemolyzační reagencie Použití In vitro test pro kvantitativní mmol/mol hemoglobinu (IFCC) a hemoglobinu A1c (DCCT/NGSP) v plné krvi nebo v hemolyzátu na systémech Roche/Hitachi cobas c. Měření HbA1c slouží k dlouhodobému monitorování glukózy v krvi u nemocných s diabetem mellitus. Tento test je navíc určen jako pomůcka při diagnostikovaném diabetu a rozpoznání pacientů s rizikem rozvoje diabetu. Souhrn Odkazy 1,2,3,4,5,6,7,8 Hemoglobin (Hb) se skládá ze 4 bílkovinných subjednotek, každá obsahuje část hemu a je červeně zbarveným proteinem v erytrocytech. Jeho hlavní funkcí je transport kyslíku a oxidu uhličitého v krvi. Každá molekula Hb je schopna vázat 4 molekuly kyslíku. Hb se vyskytuje v rozmanitých podskupinách a derivátech. V této heterogenní skupině je HbA1c jedním z glykovaných hemoglobinů, které vznikají připojením různých cukrů na molekulu Hb. HbA1c je vytvářen ve 2 krocích neenzymovou reakcí glukózy s N terminální aminoskupinou β řetězce normálního Hb dospělých (HbA). První krok je reverzibilní a vzniká při něm labilní HbA1c. Toto je přeuspořádáno, aby v druhém reakčním kroku vytvořilo stabilní HbA1c. Relativní množství HbA, přeměněného na stabilní HbA1c, se v erytrocytech zvyšuje podle průměrné koncentrace glukózy v krvi. Přeměna na stabilní HbA1c je omezena životností erytrocytů tj. přibližně 100 až 120 dnů. V důsledku toho odráží HbA1c průměrnou hodnotu krevní glukózy v uplynulých 2 až 3 měsících. Proto je HbA1c vhodný k dlouhodobému monitorování glukózy v krvi u jedinců s diabetes mellitus. Hladiny glukózy bližší času mají větší vliv na hladinu HbA1c. 1 Vzájemný vztah mezi HbA1c a průměrnou hodnotou glukózy v krvi v uplynulých 2 až 3 měsících byl analyzován v několika studiích. Nedávná studie uvedla následující korelace: IFCC Standardizace (přepočítaná dle odkazu 8) Odhadovaná průměrná glukóza [mmol/l] = HbA1c (mmol/mol) nebo Odhadovaná průměrná glukóza [mg/dl] = 2.64 x HbA1c (mmol/mol) Standardizace dle DCCT/NGSP 7 Odhadovaná průměrná glukóza [mmol/l] = 1.59 HbA1c () nebo Odhadovaná průměrná glukóza [mg/dl] = 28.7 x HbA1c () Riziko diabetických komplikací, jako je diabetická nefropatie a retinopatie, vzrůstá, čím je horší metabolická kontrola. Ve shodě s funkcí indikátoru průměrné hladiny krevní glukózy, lze podle HbA1c předpovídat rozvoj diabetických komplikací u diabetiků. 3,4 Pro monitorování dlouhodobé glykemické kontroly obecně stačí testování každé 3 až 4 měsíce. V určitých klinických stavech, jako např. těhotná diabetička, nebo při zásadní změně léčby, může být vhodné stanovovat HbA1c ve 2 až 4týdenních intervalech. 6 Princip testu Odkazy 9,10,11 Tato metoda používá TTAB a) jako detergent v hemolyzační reagencii pro eliminaci interference leukocytů (TTAB nelyzuje leukocyty). Předpříprava vzorku odstraňující labilní HbA1c není nutná. Všechny varianty hemoglobinu, které jsou glykované na N terminálním konci β řetězce a které mají oblasti, rozpoznávané protilátkami, shodné s Hb1c jsou rovněž stanovovány. Metabolický stav pacienta s uremií nebo nejrozšířenějšími hemoglobinopatiemi (HbAS, HbAC, HbAE) může být tudíž stanoven použitím tohoto. 12,13 a) TTAB = Bromid tetradecyltrimetylamonný Hemoglobin A1c Stanovení HbA1c je založeno na turbidimetrické inhibici (TINIA) v hemolyzované plné krvi. Napipetování vzorku a přidání R1 (pufr/protilátka) Glykohemoglobin (HbA1c) ve vzorku reaguje s protilátkou proti HcA1c za tvorby rozpustného komplexu antigen-protilátka. Vzhledem k tomu, že místo pro specifické protilátky proti HbA1c je na molekule HbA1c přítomné pouze 1x, tvorba nerozpustných komplexů neprobíhá. Přidání R2 (pufr/polyhapten) a zahájení reakce: Polyhapteny reagují s nadbytkem protilátek proti HbA1c za tvorby nerozpustného komplexu protilátka-polyhapten, který může být stanoven turbidimetricky. Hemoglobin Uvolněný hemoglobin v hemolyzovaném vzorku je přeměněn na derivát s charakteristickým absorpčním spektrem, které je bichromaticky změřeno během preinkubační fáze (vzorek + R1) výše uvedené imunologické reakce. V důsledku toho není potřebná samostatná reagencie Hb. Konečný výsledek je vyjádřen jako mmol/mol HbA1c nebo HbA1c a je vypočítaný z poměru HbA1c/Hb: Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): HbA1c (mmol/mol) = (HbA1c/Hb) 1000 Protokol 2 ( HbA1c dle DCCT/NGSP): HbA1c () = (HbA1c/Hb) , V 6.0 Česky 1 / 8

2 Reagencie pracovní roztoky R1 R3 Reagencie s protilátkou MES pufr: mol/l; TRIS pufr: mol/l, ph 6.2; HbA1c protilátka (ovčí sérum): 0.5 mg/ml; detergent; stabilizátory; konzervans Reagencie s polyhaptenem MES pufr: mol/l; TRIS pufr: mol/l, ph 6.2; HbA1c polyhapten: 8 µg/ml; detergent; stabilizátory; konzervans R1 je v pozici A a R3 je v pozici C. Pozice B obsahuje z technických důvodů H 2 O. Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Zacházení s reagenciemi Připravena k použití Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 8 C: V analyzátoru při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: Hemolyzační reagencie Doba skladování při 2 8 C: Čtěte datum exspirace na štítku cobas c packu. 4 týdny Čtěte datum exspirace na štítku cobas c packu. Při skladování při teplotách pod 3 C může být reagencie zakalená. Zákal nemá vliv na funkci reagencie a zmizí při vyšších teplotách. Z tohoto důvodu se doporučuje vytemperovat reagencie při pokojové teplotě po dobu cca. 10 minut a před použitím řádně promíchat. V analyzátoru při použití a v chlazeném prostoru analyzátoru: 4 týdny Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné. Nesrážlivá venózní nebo kapilární krev nebo hemolyzát. Jedinými vhodnými antikoagulanty jsou Li heparinová, K 2 EDTA, K 3 EDTA, fluorid/na 2 EDTA, Na heparinová a fluorid/oxalát draselný. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn. že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Stabilita: 14 3 dny při C 7 dní při 2 8 C 6 měsíců při (-15) (-25) C Zmrazte pouze jednou. Před použitím vzorky důkladně promíchejte. Příprava hemolyzátu pro Aplikaci pro hemolyzát 1. Ponechte vzorek krve a Hemolyzing Reagent pro Tina quant HbA1c, aby před použitím vytemperovaly na pokojovou teplotu. 2. Mírně promíchejte vzorek ještě těsně před pipetováním, aby erytrocyty tvořily homogenní směs. Buďte opatrní, zabraňte vytvoření pěny. 3. nařeďte použitím Hemolyzing Reagent pro Tina quant HbA1c (Kat. č ) v poměru 1:101 (1+100) použitím jednoho z následujících pipetovacích schémat. Pipetujte do zkumavky: HbA1c Hemolyzing Reagent pro Tina quant HbA1c 500 µl 1000 µl 2000 µl (pacient nebo kontrola) 5 µl 10 µl 20 µl 4. Promíchejte třepačkou nebo opatrným mícháním. 5. Hemolyzát lze použít po změně barvy roztoku z červené na hnědozelenou (přibl. 1 2 min). Stabilita hemolyzátu: 14 4 hodiny při C 24 hodin při 2 8 C 6 měsíců při (-15) (-25) C Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Viz část "Informace pro objednání" Celkové vybavení laboratoře Stanovení Optimálního využití dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definováno uživatelem. Aplikace s plnou krví pro Hb (HB W3) a HbA1c (A1 W3) cobas c 311 definice testu Hb (HB-W3) 1-Point 10 / / 376 nm Běžný 5 μl 2 μl 180 μl Snížený 5 μl 2 μl 180 μl Zvýšený 5 μl 2 μl 180 μl cobas c 311 definice testu HbA1c (A1-W3) 2-Point End 10 / / 340 nm 2 / , V 6.0 Česky

3 Běžný 5 μl 2 μl 180 μl Snížený 5 μl 2 μl 180 μl Zvýšený 5 μl 2 μl 180 μl cobas c 501/502 definice testu Hb (HB-W3) 1-Point 10 / / 376 nm Běžný 5 μl 2 μl 180 μl Snížený 5 μl 2 μl 180 μl Zvýšený 5 μl 2 μl 180 μl cobas c 501/502 definice testu HbA1c (A1-W3) 2-Point End 10 / / 340 nm Běžný 5 μl 2 μl 180 μl Snížený 5 μl 2 μl 180 μl Zvýšený 5 μl 2 μl 180 μl Definice poměru pro mmol/mol HbA1c a výpočet HbA1c Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): Zkrácený název RWI3 Rovnice (A1-W3/HB-W3) 1000 Protokol 2 ( HbA1c dle DCCT/NGSP): mmol/mol Zkrácený název RWD3 (891) Rovnice (A1-W3/HB-W3) Protokol 2 je v aplikaci již implementován (ACN 891). Hodnoty mmol/mol HbA1c musí být dle Protokolu 1 (IFCC) vypočteno manuálně podle výše uvedené rovnice. V případě potřeby lze v Utility > calculated test na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 311 a na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 501/502 naprogramovat vypočítaný test se vzorcem v protokolu 1. Použijte prosím následující nastavení: Typ vzorku měření Název záznamu Položka Supernt. mm/m HbA1c Gen.3 IFCC RWI3 Rovnice (A1-W3/HB-W3) x 1000 Poměr pro HbA1c (mmol/mol HbA1c dle IFCC a HbA1c dle DCCT/NGSP) se vypočítává automaticky po dohotovení obou testů. Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) je doporučeno vykazovat do jednoho desetinného místa a hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) bez desetinných míst, které lze zadat do editovatelného políčka "očekávané hodnoty". Aplikace s hemolyzátem pro Hb (HB H3) a HbA1c (A1 H3) cobas c 311 definice testu Hb (HB-H3) 1-Point 10 / / 376 nm Běžný 5 μl - - Snížený 5 μl - - Zvýšený 5 μl - - cobas c 311 definice testu HbA1c (A1-H3) 2-Point End 10 / / 340 nm Běžný 5 μl - - Snížený 5 μl , V 6.0 Česky 3 / 8

4 Zvýšený 5 μl - - cobas c 501/502 definice testu Hb (HB-H3) 1-Point 10 / / 376 nm Běžný 5 μl - - Snížený 5 μl - - Zvýšený 5 μl - - cobas c 501/502 definice testu HbA1c (A1-H3) 2-Point End 10 / / 340 nm Běžný 5 μl - - Snížený 5 μl - - Zvýšený 5 μl - - Definice poměru pro HbA1c (mmol/mol (IFCC) nebo výpočet (DCCT/NGSP)) Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): Zkrácený název RHI3 Rovnice (A1-H3/HB-H3) x 1000 Protokol 2 ( HbA1c dle DCCT/NGSP): mmol/mol Zkrácený název RHD3 (861) Rovnice (A1-H3/HB-H3) x Protokol 2 je v aplikaci již implementován (ACN 861). Hodnoty mmol/mol HbA1c musí být dle Protokolu 1 (IFCC) vypočteno manuálně podle výše uvedené rovnice. V případě potřeby lze v Utility > calculated test na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 311 a na analyzátoru Roche/Hitachi cobas c 501/502 naprogramovat vypočítaný test se vzorcem v protokolu 1. Použijte prosím následující nastavení: Typ vzorku měření Název záznamu Položka Supernt. mm/m HbA1c Gen.3 IFCC RHI3 Rovnice (A1-H3/HB-H3) x 1000 Poměr pro HbA1c (mmol/mol HbA1c dle IFCC a HbA1c dle DCCT/NGSP) se vypočítává automaticky po dohotovení obou testů. Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) je doporučeno vykazovat do jednoho desetinného místa a hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) bez desetinných míst, které lze zadat do editovatelného políčka "očekávané hodnoty". Kalibrace pro Aplikaci s plnou krví a pro hemolyzát. Hb Kalibrátory Typ kalibrace HbA1c Kalibrátory Typ kalibrace Frekvence kalibrace S1-S2: C.f.a.s. HbA1c Lineární S1-S6: C.f.a.s. HbA1c Spline Hb a HbA1c: doporučuje se plná kalibrace - po 29 dnech během doby skladování - po změně šarže reagencií - jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Obě (Hb a HbA1c) kalibrujte souběžně. Automatická kalibrace by při selhání kontroly kvality měla být deaktivována. Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle schválené IFCC referenční metody pro měření HbA1c v lidské krvi 15,16 a může být převedena na výsledky s návazností na výpočet podle DCCT/NGSP. Upozornění pro Aplikaci s plnou krví a pro hemolyzát Pro tyto aplikace odpovídají hodnoty kalibrátoru C.f.a.s. HbA1c šarži reagencií. Pro každou aplikaci a každou kombinaci šarže kalibrátoru C.f.a.s. HbA1c a šarže reagencií Tina quant HbA1c Gen. 3 jsou v příslušném elektronicky dostupném letáku hodnot uvedeny přesné hodnoty kalibrátoru. Zadejte cílové hodnoty kalibrátoru, závislé na šarži a na aplikaci. Používejte pouze příslušné C.f.a.s. HbA1c kalibrátory. cobas c Hemolyzing Reagent Gen. 2 pack, 51 ml, Kat. č , musí být dostupný v analyzátoru, jinak nelze kalibraci provést. Kontrola kvality pro Aplikaci s plnou krví a pro hemolyzát Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontrolní intervaly a limity by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet pro Aplikaci s plnou krví a pro hemolyzát Hb, HbA1c Systémy Roche/Hitachi cobas c automaticky vypočítají koncentraci analytu každého vzorku. Výpočet poměru HbA1c : Pro výpočet hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) čtěte, prosím, části Princip testu a Definice poměru pro mmol/mol HbA1c a výpočet HbA1c v tomto metodickém listu. Omezení - interference pro Aplikaci s plnou krví a pro hemolyzát Odkazy 12,13,17,18,19,20,21,22,23,24 4 / , V 6.0 Česky

5 1. Pro diagnostické účely by měly být hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) používány ve spojení s informacemi z dalších diagnostických postupů a klinických nálezů. 2. Test slouží pouze pro precizní a správné mmol/mol HbA1c (IFCC) a HbA1c ( Individuální výsledky pro koncentrace celkového Hb a HbA1c by neměly být vykazovány. 3. Ze zásady je nezbytné při interpretaci jakýchkoliv výsledků HbA1c od pacientů s variantami Hb dbát opatrnosti. Abnormální hemoglobiny mohou ovlivnit poločas červených krvinek nebo in vivo hodnoty glykace. V těchto případech nereflektují ani analyticky správné výsledky stejnou hladinu glykemické kontroly, která by byla očekávána u pacientů s normálním hemoglobinem. 22 HbA1c nesmí být použito pro diagnózu diabetu mellitus, existuje-li jakékoliv podezření na přítomnost varianty Hb (např. HbSS, HbCC nebo HbSC), které ovlivňuje korelaci mezi hodnotou HbA1c a glykemickou kontrolou. 4. Každá příčina zkrácení životnosti erytrocytů nebo pokles průměrného stáří erytrocytů snižuje dobu, po kterou je erytrocyt vystaven působení glukózy s následným poklesem hodnot mmol/mol HbA1c (IFCC) a HbA1c (DCCT/NGSP), ačkoliv může dojít ke zvýšení průměrné hladiny glukózy v daném období. Příčinou zkrácení životnosti erytrocytů může být hemolytická anemie nebo jiné hemolytické onemocnění, homozygotní srpkovitá anemie, těhotenství, nedávná výrazná nebo chronická ztráta krve atd. Obdobně mohou nedávné transfuze krve změnit hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a HbA1c (Tyto okolnosti musí být vzaty v úvahu při posuzování výsledků HbA1c těchto pacientů. Za těchto okolností nesmí být HbA1c použito při diagnostice diabetu mellitus. 5. Glykosylovaný HbF není m detekován, jelikož neobsahuje glykosylovaný β řetězec, typický pro HbA1c. HbF se však měří ve total Hb, a jako důsledek mohou vzorky obsahující větší množství HbF (> 10 ) mít nižší než očekávané hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a HbA1c ( 13,24 6. Hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a HbA1c (DCCT/NGSP) nejsou vhodné pro diagnostiku gestačního diabetu Ve velmi vzácných případech rychle se rozvíjejícího diabetu 1. typu mohou být hodnoty HbA1c opožděné ve srovnání s akutním nárůstem v koncentraci glukózy. Za těchto okolností musí být diabetes mellitus diagnostikován na základě koncentrace glukózy v plazmě a/nebo typických klinických symptomů. 25 Kritérium: Výtěžnost v rámci ± 10 počáteční hodnoty. Ikterus: 21 Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 pro konjugovaný a nekonjugovaný bilirubin (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 1000 µmol/l nebo 60 mg/dl). Lipémie (Intralipid): 21 Bez významných interferencí do koncentrace Intralipidu 600 mg/dl. Mezi koncentrací triglyceridů a zákalem je slabá korelace. Glykemie: Bez významných interferencí do hladiny glukózy 55.5 mmol/l (1000 mg/dl). Odběr nalačno není nutný. Revmatoidní faktory: Žádná interference revmatoidních faktorů do hladiny 750 IU/mL. Léčiva: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference. 26,27 Ostatní: Pro protilátky proti HbA1c použité v této soupravě nebyly zaznamenány křížové reakce s HbA0, HbA1a, HbA1b, acetyl hemoglobinem, karbamyl hemoglobinem, glykovaným albuminem a labilním HbA1c. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testů na systémech Roche/Hitachi cobas c je použití speciálních mycích cyklů povinné. Nejnovější verzi seznamu zamezení přenosu mezi vzorky (carry over) lze rovněž nalézt v metodickém listu NaOHD/SMS/Multiclean/SCCS nebo NaOHD/SMS/SmpCln1+2/SCCS. Pro další pokyny čtěte uživatelskou příručku. Analyzátor cobas c 502: Veškeré programování speciálního mytí nezbytné pro zamezení carry over je dostupné přes cobas link, ruční zadávání není potřebné. Tam, kde se to vyžaduje, musí být před vykazováním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry over). Limity a rozmezí Měřící rozsah Hemoglobin: mmol/l (4 40 g/dl). HbA1c: mmol/l 1) ( g/dl) 1) Měřící rozsah pro HbA1c leží mezi mmol/l (0.3 g/dl) a hodnotou koncentrace nejvyššího standardu. Uvedené rozmezí testu je založeno na typické hodnotě kalibrátoru 1.61 mmol/l. Toto odpovídá měřícímu rozsahu mmol/mol HbA1c (IFCC) a HbA1c (DCCT/NGSP) při typické koncentraci hemoglobinu 8.2 mmol/l (13.2 g/dl). Koncentrace nejvyššího standardu je závislá na šarži a její hodnota by se měla promítnout do nastavení horní hranice rozsahu měření analyzátoru. Ve vzácných případech označení >Test, které může nastat při použití aplikace s plnou krví, znovu promíchejte vzorek plné krve a analýzu zopakujte se stejným nastavením. Doporučujeme vypnout funkci auto rerun. Dolní meze měření Mez blanku (LoB) a mez detekce (LoD) Hemoglobin: LoB = 0.31 mmol/l (0.50 g/dl) LoD = 0.62 mmol/l (1.00 g/dl) HbA1c: LoB = 0.12 mmol/l (0.19 g/dl) LoD = 0.18 mmol/l (0.29 g/dl) Limit blanku i detekční limit byly stanoveny v souladu s požadavky CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) EP17 A. Limit blanku je hodnotou 95. percentilu z n 60 měření vzorku bez analytu v průběhu několika nezávislých sérií. Limit blanku odpovídá koncentraci, pod kterou jsou vzorky bez analytu zjištěny s pravděpodobností 95. Detekční limit je stanoven na základě limitu blanku a standardní odchylky vzorků s nízkou koncentrací. Mez detekce odpovídá koncentraci vzorků, která s 95 pravděpodobností vede k výsledku měření nad mez blanku. Očekávané hodnoty Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): mmol/mol HbA1c 28 Protokol 2 ( HbA1c dle DCCT/NGSP): HbA1c 28 Toto referenční rozmezí bylo získáno měřením 474 dobře popsaných zdravých jedinců bez diabetu mellitus. Hladiny HbA1c vyšší než horní hranice referenčního rozmezí indikují hyperglykémii v průběhu uplynulých 2 až 3 měsíců nebo déle. Podle doporučení American Diabetes Association jsou pro diagnostiku diabetu mellitus vhodné hodnoty nad 48 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 6.5 HbA1c ( 25,29 U pacientů s hodnotami HbA1c v rozmezí mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo HbA1c (DCCT/NGSP) existuje riziko rozvoje diabetu. 25,29 Hladiny HbA1c mohou u špatně kontrolovaných diabetiků dosáhnout 195 mmol/mol (IFCC) nebo 20 (DCCT/NGSP) nebo vyšší. Terapeutický zásah se doporučuje u hladin nad 64 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 8 HbA1c ( Diabetický pacient s hladinou pod 53 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 7 (DCCT/NGSP) splňuje cíle American Diabetes Association. 20,19 Hladiny HbA1c nižší než stanovené referenční rozmezí mohou značit dřívější epizody hypoglykémie, přítomnost variantních Hb nebo zkrácení životnosti erytrocytů. Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla měřena použitím lidských vzorků a kontrol v souladu s požadavky CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) EP5 s opakovatelností a mezilehlou precizností (2 alikvoty na sérii, 2 série na den, 21 dní). Získány byly následující výsledky (údaje dle hodnot DCCT/NGSP): , V 6.0 Česky 5 / 8

6 Aplikace s plnou krví: Opakovatelnost Průměr HbA1c PreciControl HbA1c norm PreciControl HbA1c path Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Mezilehlá preciznost Průměr HbA1c PreciControl HbA1c norm PreciControl HbA1c path Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Aplikace pro hemolyzát: Opakovatelnost Průměr HbA1c PreciControl HbA1c norm PreciControl HbA1c path Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Mezilehlá preciznost Průměr HbA1c PreciControl HbA1c norm PreciControl HbA1c path Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Lidský vzorek Porovnání metod Hodnocení údajů o srovnání metod probíhá podle kritérií certifikace NGSP. mezi 2 metodami a 95 intervaly spolehlivosti v rozmezí 4 10 (DCCT/NGSP) jsou dány. 95 mezi hodnotami získanými pro individuální vzorky s oběma metodami spadá do rozmezí definovaného spodním a horním 95 intervalem spolehlivosti. Aplikace s plnou krví: Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací s plnou krví (y), byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím stejné reagencie s aplikací pro hemolyzát na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Počet vzorků (n) = 80 SD SD SD SD 0.07 HbA1c HbA1c VK VK VK VK Horní 95 interval spolehlivosti 0.42 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 4.7 až 9.8 (hodnoty Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací s plnou krví (y), byly porovnány Gen. 2 s aplikací s plnou krví (x). Počet vzorků (n) = 82 Horní 95 interval spolehlivosti 0.07 HbA1c HbA1c 0.65 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 5.0 až 9.9 (hodnoty Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací s plnou krví (y), byly porovnány Gen. 2 s aplikací pro hemolyzát na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Počet vzorků (n) = 80 Horní 95 interval spolehlivosti HbA1c HbA1c 0.28 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 4.7 až 9.8 (hodnoty Aplikace pro hemolyzát: Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací s plnou krví (y), byly porovnány Gen. 2 s aplikací pro hemolyzát na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Počet vzorků (n) = 111 Horní 95 interval spolehlivosti HbA1c HbA1c 0.14 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 4.6 až 9.9 (hodnoty Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací pro hemolyzát (y), byly porovnány Gen. 2 s aplikací s plnou krví (x). Počet vzorků (n) = 84 Horní 95 interval spolehlivosti HbA1c HbA1c 0.41 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 5.5 až 9.9 (hodnoty 6 / , V 6.0 Česky

7 Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací pro hemolyzát (y), byly porovnány Gen. 2 s aplikací pro hemolyzát na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Počet vzorků (n) = 111 Horní 95 interval spolehlivosti HbA1c HbA1c 0.02 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 4.7 až 9.9 (hodnoty Hodnoty HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve, získané na Hemoglobin A1c Gen. 3 s aplikací pro hemolyzát (y), byly porovnány Gen. 2 s aplikací pro hemolyzát x). Počet vzorků (n) = 113 Horní 95 interval spolehlivosti HbA1c HbA1c 0.31 HbA1c Koncentrace vzorků byly v rozmezí 4.8 až 9.7 (hodnoty Analytická specifičnost pro Aplikaci s plnou krví a pro hemolyzát Deriváty Hb Varianty Hb Labilní HbA1c (pre-hba1c), acetyl Hb a karbamyl Hb nemají vliv na výsledky. Vzorky s větším obsahem HbF (> 10 ) mohou poskytovat menší než očekávané výsledky HbA1c. Upozornění Podle souhlasného stanoviska organizací American Diabetes Association (ADA), European Association for the Study of Diabetes (EASD), International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) a International Diabetes Federation (IDF) HbA1c by mely být výsledky hlášeny souběžně, jak v mmol/mol (IFCC) a ( 30 Navíc může být vykazována HbA1c odvozená odhadovaná průměrná koncentrace glukózy, která může být vypočítána dle rovnic daných v části "Souhrn" tohoto letáku metod. Dřívější hodnoty HbA1c (IFCC) nesmí být použity kvůli riziku záměny / nesprávné interpretace s hodnotami HbA1c ( Odkazy 1 Goldstein DE, Little RR, Lorenz RA, et al. Tests of glycemia in diabetes. Diabetes Care 1995;18: Goldstein DE, Little RR. More than you ever wanted to know (but need to know) about glycohemoglobin testing. Diabetes Care 1994;17: The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The effect of intensive treatment of diabetes on the developmentand progression of long-term complications in insulin-dependent diabetes mellitus. N Engl J Med 1993;329: UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) group. Intensive blood glucose control with sulfonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes (UKPDS 33). Lancet 1998;352: Finke A, Kobold U, Hoelzel W, et al. Preparation of a candidate primary reference material for the international standardization of HbA1c determinations. Clin Chem Lab Med 1998;36(5): Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM, et al. Glycated hemoglobin: methodologies and clinical applications. Clin Chem 1986;32:B64-B70. 7 Nathan DM, Kuenen J, Borg R, et al. Translating the A1C assay into estimated average glucose values. Diabetes Care 2008;31: Bunn HF, Gabbay KH, Gallop PM. The glycosylation of hemoglobin: relevance to diabetes mellitus. Science 1978;200: Zander R, Lang W, Wolf HU. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemiglobin method. I. Description of the method. Clin Chim Acta 1984;136: Wolf HU, Lang W, Zander R. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemiglobin method. II. Standardization of the method using pure chlorohaemin. Clin Chim Acta 1984;136: Little RR, Wiedmeyer HM, England JD, et al. Interlaboratory standardization of measurements of glycohemoglobins. Clin Chem 1992;38: Frank EL, Moulton L, Little RR, et al. Effects of hemoglobin C and S traits on seven glycated hemoglobin methods. Clin Chem 2000;46(6): Chang J, Hoke C, Ettinger B, et al. Evaluation and Interference Study of Hemoglobin A1c Measured by Turbidimetric Inhibition Immunoassay. Am J Clin Pathol 1998;109(3): Data on file at Roche Diagnostics. 15 Kobold U, Jeppsson JO, Duelffer T, et al. Candidate reference methods for hemoglobin A1c based on peptide mapping. Clin Chem 1997;43: Jeppsson JO, Kobold U, Finke A, et al. Approved IFCC reference method for the measurement of HbA1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002;40: Martina WV, Martijn EG, van der Molen M, et al. β-n-terminal glycohemoglobins in subjects with common hemoglobinopathies: relation with fructosamine and mean erythrocyte age. Clin Chem 1993;39: Weykamp CW, Penders TJ, Muskiet FAJ, et al. Influence of hemoglobin variants and derivatives on glycohemoglobin determinations, as investigated by 102 laboratories using 16 methods. Clin Chem 1993;39: American Diabetes Association. Standards of Medical Care for patients with diabetes mellitus. Diabetes Care [Suppl.] 1995;18(1): Sacks BW, Bruns DE, Goldstein DE, et al. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002;48: Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Miedema K. Influence of hemoglobin variants on the determination of glycated hemoglobin. Klin Lab 1993;39: Niederau C, Coe A, Katayama Y. Interference of Non-glucose Adducts on the Determination of Glycated Hemoglobins. Klin Lab 1993;39: Rohlfing C, Connolly J, England J, et al. Effect of Elevated Fetal Hemoglobin on HbA1c Measurements: Four Common Assay Methods compared to the IFCC Reference Method. Poster Abstract AACC Annual Meeting 2006, Chicago. Clin Chem 2006;52(6) Suppl A International Expert Committee Report on the Role of the A1C Assay in the Diagnosis of Diabetes. Diabetes Care 2009;32(7): Breuer J. Report on the Symposium Drug effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Junge,W, Wilke B, Halabi A, et al. Determination of reference levels in adults for hemoglobin A1c (HbA1c). Poster presentation EUROMEDLAB, Barcelona Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care 2010;33(1): , V 6.0 Česky 7 / 8

8 30 Consensus statement on the worldwide standardization of the hemoglobin A1c measurement. American Diabetes Association, European Association for the Study of Diabetes, International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine and International Diabetes Federation Consensus Committee. Diabetes Care 2007;30: Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá následující symboly a znaky, včetně uvedených v normě ISO GTIN Obsah soupravy Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 2014, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 8 / , V 6.0 Česky