Berichrom Antithrombin III (A) Berichrom AT III

Transkript

1 Berichrom AT III Použití Kvantitativní stanovení funkční aktivity antitrombinu III (AT III) v plasmě na automatických analyzátorech pro diagnosu snížené syntézy AT III, zvýšené spotřeby a pro kontrolu substituční terapie. Shrnutí a vysvětlení Antitrombin III je plasmatický inhibitor trombinu a aktivovaného faktoru X a tvoří s těmito enzymy ireversibilně inaktivní komplex. Inaktivace aktivovaných koagulačních faktorů je silně zesilována heparinem. Berichrom Antitrombin III (A) slouží pro rychlé stanovení fyziologicky aktivního antitrombinu III a tím umožňuje diagnosu vrozeného nebo získaného deficitu antitrombinu III, který představuje zvýšené riziko trombosy. Získané deficity antitrombinu III se vyskytují často jako následek spotřeby po velkých operacích nebo diseminované intravaskulární koagulace (DIC), při sepsích, nefrozách, jaterních poškozeních (hepatitis, otravy, alkoholismus) a kontraceptiv obsahujících estrogeny 1. Test umožňuje včasné zjištění pacientů se zvýšeným rizikem trombosy. Princip metody Antitrombin III ve vzorku je převeden heparinem na okamžitý inhibitor a inaktivuje předložený trombin. Zbytek trombinu se stanoví kineticky jako nárůst extinkce při 405 nm dle následujícího reakčního: AT III vzor ek + Trombin přebytek Heparin > [AT III-Trombin] + Trombin zbytek Reagencie Obsah balení Tos-Gly-Pro-Arg-ANBA-IPA Trombinový zbytek > Tos-Gly-Pro-Arg-OH + ANBA-IPA Změna absorbance je nepřímo úměrná aktivitě antitrombinu III ve vzorku. Poznámka: Berichrom Antithrombin III (A) může být proveden manuálně nebo na automatických koagulačních analyzátorech. Siemens Healthcare Diagnostics dodává pro jednotlivé koagulační analyzátory referenční návody (aplikační listy). V nich naleznete informace specifické pro daný přístroj, které se mohou lišit od údajů uvedených v tomto návodu. Informace obsažené v referenčních návodech (aplikačních listech) mají přednost před informacemi v tomto návodu k použití. Kromě toho si také přečtěte návod k obsluze od výrobce přístroje. Berichrom Antrithrombin III (A), REF OWWR 15: 6 x 15 ml REAGENT THR, Thrombin - Reagent 6 x 3 ml SUBSTRATE, Substrát - Reagent 1 x 100 ml REAGENT THR DILUENT, Buffer OWWRG17E45 Rev. 03 CS /5

2 Složení Berichrom Antrithrombin III (A), REF OWWR 17: 6 x 5 ml REAGENT THR, Thrombin - Reagent 3 x 3 ml SUBSTRATE, Substrát - Reagent 1 x 30 ml REAGENT THR DILUENT, Buffer Thrombin - Reagent: hovězí trombin, lyofilizovaný, s přídavkem heparinu a aprotininu Substrát - Reagent, lyofilizovaný; koncentrace v pracovním roztoku: Tosylglycyl-L-prolyl-Larginyl-5-amino-2-nitrobenzoová kyselina-isopropylamid (Tos-Gly-Pro-Arg-ANBA-IPA) 4 mmol/l Roztok pufru: Tris(hydroxymethyl)-aminomethan (100 mmol/l), NaCl (8,7 g/l), ph 8,2 Konzervační prostředek: Varování a bezpečnostní opatření Jen pro použití jako in vitro diagnostikum. azid sodný (< 1 g/l) Obsahuje jako konzervační prostředek azid sodný (< 1 g/l). Azid sodný může reagovat s měděnými nebo olověnými kanalizačními trubkami a tvořit výbušné sloučeniny. Likvidujte řádně podle místních předpisů. Příprava reagencí REAGENT THR : SUBSTRATE : POZNÁMKA: Obsah lahvičky se rozpustí v množství REAGENT THR DILUENT uvedeném na etiketě a před použitím se inkubuje 30 min při +15 až +25 C. Pro zajištění homogenity reagencie: po rekonstituci a před použitím se rozpuštěná reagencie znovu lehce promíchá. Obsah lahvičky se rozpustí v množství destilované vody uvedeném na etiketě. Ubezpečte se, že rovněž SUBSTRATE je zcela rozpuštěn. Stabilita a podmínky skladování Uzavřená testovací souprava skladovaná při teplotě +2 až +8 C může být použita až do data uvedeného na etiketě. Stabilita po rekonstituci: Teplota REAGENT THR SUBSTRATE +2 až +8 C 2 týdny 6 týdnů -20 C 3 měsíce 6 měsíců Rekonstituovaný REAGENT THR lze v originální lahvičce opakovaně zamrazit a rozmrazit až 5 x a SUBSTRATE až 10 x. Přitom nesmí být překročen údaj o maximální stabilitě uvedený v tabulce. REAGENT THR DILUENT je po prvním otevření stabilní 6 měsíců při +2 až +8 C. Údaje o stabilitě pro jednotlivé koagulometry jsou uvedeny v aplikačních listech pro tyto koagulometry. Další potřebný materiál (není součástí balení) Standard-Human-Plasma, REF ORKL Control Plasma N, REF ORKE Control Plasma P, REF OUPZ Imidazole buffer solution, REF OQAA, nebo Dade Owren's Veronal Buffer, REF B4234, nebo 2/ OWWRG17E45 Rev. 03 CS

3 Vzorky Dade CA System Buffer, REF B4265, nebo Fyzilologický roztok Destilovaná nebo deionizovaná voda Pro získání plasmy se opatrně smíchá 1 díl roztoku citrátu sodného (0,11 mol/l) s 9 díly venozní krve tak, aby se zamezilo napěnění. Měl by být použit uzavřený odběrový systém nebo stříkačka. Prosím dbejte přitom na doporučení dle dokumetu CLSI, H21 A5 2. Ihned se cetrifuguje minimálně 15 min při nejméně 1500 x g. Stabilita vzorků: Postup -20 C 1 měsíc +2 až +8 C 2 dny +15 až +25 C 6 hodin Vzorky skladované při -20 C je nutno rozmrazit při +37 C v průběhu 10 min a analyzovat do 2 hodin. Opakované zamražení není možné. Plasma se analyzuje neředěná. Schéma pipetování (příklad) Citrátová plasma REAGENT THR 10 μl 600 μl Smíchat a inkubovat 3 min při +37 C SUBSTRATE 100 μl Stanovit A 405 nm /min Vyhodnocení Vyhodnocení je provedeno koagulometrem automaticky. Sestrojení kalibrační křivky Kalibrační křivku lze sestrojit automatickým stanovením různých ředění Standard Human Plasmy. V případě změny přístroje, šarže použitého Berichrom Antithrombin III (A) nebo experimentálních podmínek je třeba sestrojit novou kalibrační křivku. Interní kontrola kvality Normální rozsah: Patologický rozsah: Control Plasma N Control Plasma P Na začátku testování, po každé kalibraci, při výměně lahviček s reagenciemi a minimálně každých 8 hodin v průběhu pracovního dne je třeba změřit kontrolu kvality na dvou hladinách (normální a patologické rozmezí). Každá laboratoř by měla stanovit povolené rozmezí kontrol na základě údajů výrobce nebo na základě vlastních předpisů. Pokud naměřená hodnota kontroly leží mimo předem stanovený rozsah, měly by být zkontrolovány reagencie, koagulometr a kalibrační křivka. Výsledky pacientů je možno vydávat teprve poté, co byl problém idetifikován, korigován a dokumentován. Omezení metody Terapeutické dávky hirudinu nebo jiných přímých inhibitorů mají za následek stanovení falešně zvýšené hodnoty aktivity antitrombinu III. OWWRG17E45 Rev. 03 CS /5

4 Některé velmi vzácné genetické varianty s omezenou funkční aktivitou, jako například antithrombin III Basel, mohou vést k výsledkům v referenčním rozmezí. Firma Siemens validovala použití těchto reagencií na různých analyzátorech pro optimalizaci vlastností produktu a soulad s jejich specifikací. Uživatelské modifikace nejsou firmou Siemens podporovány a mohou ovlivnit vlastnosti systému a výsledky testu. Je proto na zodpovědnosti uživatele validovat modifikace těchto optimalizovaných předpisů nebo užití reagencií jinak než je uvedeno v Siemens aplikačních listech a příbalových letácích k reagenciím. Výsledky tohoto testu musí být vždy interpretovány s ohledem na diagnostickou historii pacienta, klinické příznaky a další nálezy. Referenční rozsah Vzorky plazmy získané od zjevně zdravých dárců (n = 309) byly testovány pomocí soupravy Berichrom Antithrombin III (A) na systému BCS /BCS XP s následujícími výsledky (2,5. až 97,5. percentil): 79,4 až 112 % normy (pro dospělé). Další výsledky specifické pro příslušný systém jsou uvedeny v jednotlivých v referenčních návodech (aplikačních listech). Referenční intervaly se mohou lišit laboratoř od laboratoře v závislosti na populaci a použité technice, metodě, zařízení a šarži reagencie. Proto každá laboratoř musí stanovit vlastní referenční intervaly, nebo je ověřit, kdykoli se jedna nebo více z výše uvedených proměnných změní. Specifické vlastnosti testu Měřící rozsah Specifita Citlivost Přesnost Měřicí rozsah je % normy. Aprotinin v Thrombin Reagentu blokuje aktivitu plasminu, pokud je obsažen ve vzorku 3. Rušení heparin-kofaktorem II je zanedbatelné, jelikož je v testu použit hovězí trombin 4. Hranice detekce je 3,7 % normy. Přesnost Berichrom AT III (A) byla stanovena pomocí Control Plasma N a Control Plasma P na systému Sysmex CA-1500 během 5 dní při osminásobném stanovení. Variační koeficient v jedné sérii byl 1,3 % pro Control Plasma N a 2,7 % pro Control Plasma P. Ze dne na den pak odpovídal 4,6 % a 7,6 %. Porovnání metod Literatura Při srovnání Berichrom AT III (A) s Berichrom AT III (s manuálním předředěním) na Hitachi 717 bylo stanoveno 111 vzorků v rozsahu od 25 do 150 % normy. Korelační koeficient činil 0,99 (úsek na ose y: -3,7 % normy; směrnice: 0,98). 1. Hathaway WE. Clinical aspects of antithrombin III deficiency. Semin Hematol. 1991; 28: CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline Fifth Edition. CLSI document H21-A5 (ISBN ). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania USA, / OWWRG17E45 Rev. 03 CS

5 3. Wendel HP, Heller W, Gallimore MJ. Aprotinin in therapeutic doses inhibits chromogenic peptide substrate assays for protein C. Thromb Res. 1994; 74: Friberger P, Egberg N, Holmer E, et al. Antithrombin assay - the use of human or bovine thrombin and the observation of a second heparin cofactor. Thromb Res. 1982; 25: Definice symbolů Pro jednorázové použití Použitelné do LOT Číslo šarže REF Katalogové číslo Upozornění viz přiložená dokumentace Výrobce EC REP Zplnomocněný zástupce Lze použít pro <n> testů Biologické riziko Teplotní rozmezí od do IVD In Vitro diagnostický zdravotnický prostředek Viz návod k použití Nesterilní CE značka CONTENTS Obsah balení Obsah po rekonstituci LEVEL Hladina Berichrom, Dade a BCS jsou ochranné známky společnosti Siemens Healthcare Diagnostics. SYSMEX je ochranná známka společnosti SYSMEX CORPORATION Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. Všechna práva vyhrazena Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Emil-von-Behring-Str Marburg/Germany OWWRG17E45 Rev. 03 CS /5