PREVENTIVNÍ OPATŘENÍ A UPOZORNĚNÍ:

Transkript

1 HemosIL AcuStar Von Willebrand Factor Collagen Binding Activity Revize příbalového letáku 05/2016 (Aktivita navázání VWF na kolagen) Použití Stanovení HemosIL AcuStar von Willebrand Factor Collagen Binding Activity (HemosIL AcuStar VWF:CB) je plně automatický chemiluminiscenční imunologický test na ACL AcuStar TM pro kvantitativní stanovení aktivity navázání von Willebrandova faktoru na kolagen v lidské citrátové plazmě. Test HemosIL AcuStar VWF:CB je určen k použití u pacientů s podezřením na von Willebrandovu chorobu (VWD). Souhrn a princip Stanovení VWF:CB se používá jako doplňkový test k testům aktivity FVIII, VWF:Ag a VWF:RCo při stanovení typu VWD 1. VWF:CB je stupeň interakce VWF se subendoteliálním kolagenem. Optimalizované stanovení VWF:CB se vyznačuje vysokou citlivostí na multimery o vysoké molekulární hmotnosti (HMWM) a může pomoci při rozlišení typu 2A a 2B od typu 2M 2. Stanovení HemosIL AcuStar VWF:CB je dvou krokový imunologický test pro určení množství VWF:CB v lidské citrátové plazmě, za použití magnetických částic jako pevné fáze a chemiluminiscenčního systému detekce. V prvním kroku je vzorek smíchán s Pufrem ze soupravy a magnetickými částicemi potaženými peptidem s trojitou šroubovicí kolagenu typu III 3. VWF přítomný ve vzorku se naváže na magnetické částice úměrně své aktivitě navázání na kolagen. Po magnetické separaci a promytí následuje druhý krok, kdy jsou magnetické částice inkubovány s anti-vwf polyklonální protilátkou označenou isoluminolem. Po dalším kroku magnetické separace a promytí jsou přidány dva aktivátory. Výsledná chemiluminiscenční reakce je měřena optickým systémem ACL AcuStar jako relativní světelné jednotky (RLU). RLU jsou přímo úměrné aktivitě VWF:CB ve vzorku. Pro vytvoření hlavní křivky využívá test ACL AcuStar VWF:CB vhodnou metodu redukce dat, tzv. 4 parametrovou logistickou křivku (4PLC). Hlavní křivka je předem definovaná v závislosti na šarži a je do analyzátoru vložena prostřednictvím čárového kódu kazety. S měřením kalibrátorů je předem definovaná hlavní křivka přeměněna v novou 4PLC pracovní křivku, která je specifická pro daný analyzátor. Hodnoty koncentrací kalibrátorů jsou obsaženy v čárových kódech plastových zkumavek kalibrátorů. Složení Souprava VWF:CB obsahuje: R VWF:CB kazeta pro 25 stanovení (Kat. č ): obsah 1 kazety: 1 lahvička suspenze s magnetickými částicemi potaženými peptidem s trojitou šroubovicí kolagenu typu III; 1 lahvička Pufru (Assay Buffer); 1 lahvička Stopovací látky (Tracer) složené z polyklonální anti-vwf králičí protilátky označené isoluminolem; 1 lahvička Roztoku k ředění vzorku (Sample Diluent) určená k běžnému předředění vzorku a k automatickému ředění vzorku při opakovaném měření (rerun). Reagencie jsou v HEPES pufru s hovězím sérovým albuminem, stabilizátory a konzervační látkou. C1 VWF:CB Kalibrátor 1 (Kat. č ): 1 x 1 ml fyziologického roztoku s konzervačními látkami ve zkumavce s čárovým kódem. C2 VWF:CB Kalibrátor 2 (Kat. č ): 2 lahvičky: 1 x 1 ml lyofilizované lidské plazmy obsahující pufr, stabilizátory a konzervační látky; 1 plastová zkumavka s čárovým kódem VWF:CB Kalibrátor 2. Kalibrátory jsou závislé na šarži a nemohou být používány s jinými šaržemi reagencií. PREVENTIVNÍ OPATŘENÍ A UPOZORNĚNÍ: Kazeta AcuStar VWF:CB obsahuje materiál živočišného původu, proto by s ní mělo být nakládáno jako s potenciálně infekční 4. Všechna dárcovská zvířata byla vybrána ze stád, v nichž nebyla prokázána přítomnost nemoci BSE. U skotu byla provedena náležitá veterinární vyšetření před i po

2 porážce a zjevně nebyla prokázána přítomnost infekčního a přenosného materiálu. AcuStar VWF:CB Kalibrátor 2 obsahuje materiál lidského původu, jehož dárci byli testování metodami schválenými FDA a byli shledáni nereaktivní v testech na protilátky proti viru HIV 1/2 a HCV a proti povrchovému antigenu viru HBV. S tímto produktem, stejně jako se všemi vzorky lidského původu, by mělo být nakládáno podle správné bezpečnostní laboratorní praxe, s cílem minimalizovat riziko přenosu infekčních chorob. Všechny reagencie, kromě Kalibrátoru 2, obsahují azid sodný, který může vytvářet v kovovém vodovodním potrubí explozivní azidy. Pro likvidaci použijte vhodné postupy. Přibližně 1,0% této směsi se skládá z látky (látek) s neznámou toxicitou pro zdraví a vodní životní prostředí. AcuStar VWF:CB kazeta s reagenciemi, VWF:CB Kalibrátor 1 a VWF:CB Kalibrátor 2 nejsou klasifikovány jako nebezpečné. Riziková třída: žádná Rizikové fráze: žádné Bezpečnostní fráze: žádné Tento produkt je určen pro in vitro diagnostiku. Příprava VWF:CB kazeta: Během přepravy a skladování se mikročástice usazují u dna a je třeba je promíchat, aby se znovu rozptýlily. Při prvním použití kazetu 30 krát promíchejte opatrným převracením a současně zabraňte tvorbě pěny. Zkontrolujte, zda byl obsah lahvičky s mikročásticemi dobře promíchán. Pokud nejsou mikročástice zcela rozptýleny, pokračujte v převracení kazety do jejich úplného rozptýlení. Pokud není možné docílit rozptýlení mikročástic, KAZETU NEPOUŽÍVEJTE. Jakmile jsou mikročástice rozptýleny, položte kazetu na pevný povrch a z kazety opatrně odstraňte červený bezpečnostní přepravní štítek. S kazetou položenou na pevném povrchu, stiskněte proti sobě dvě klapky umístěné po stranách propichovacího uzávěru (šedá část) a zatlačte na horní část kazety tak, až zapadne do uzamčené pozice. V uzamčené pozici by klapky neměly být viditelné. Otevřenou kazetu nepřevracejte. Po umístění kazety do analyzátoru je další pravidelné míchání prováděno v analyzátoru. VWF:CB Kalibrátor 1: Je tekutý a před použitím musí být promíchán několikerým opatrným převracením tak, aby byla zaručena homogenita kalibrátoru. Zabraňte napěnění. VWF:CB Kalibrátor 2: Rozpusťte obsah lahvičky 1 ml vody typu CLR, nebo jejím ekvivalentem 5. Lahvičku opět uzavřete a kroužením jemně promíchejte. Zkontrolujte, zda je produkt zcela rozpuštěn. Nechte kalibrátory stát 30 minut při C a před použitím je jemně promíchejte převracením lahvičky. Netřepejte. Po rekonstituci přelijte obsah lahvičky kalibrátoru do náležitě označené prázdné plastové zkumavky AcuStar, která je určena k použití v systému ACL AcuStar. Poznámka: Zabraňte tvorbě pěny při homogenizaci reagencií. Bubliny na povrchu kapalin mohou narušovat funkci senzorů kapalin v analyzátoru. Upozornění: Reagencii nepoužívejte, pokud zaznamenáte jakoukoli změnu vzhledu složek obsažených v soupravě nebo pokud zaznamenáte jakékoliv poškození obalů. Uchování a stabilita reagencie Neotevřené reagencie a kalibrátory jsou stabilní do data exspirace uvedeného na kazetě a etiketách zkumavek, pokud jsou skladovány při 2 8 o C. VWF:CB kazeta Stabilita po otevření při 2-8 C v systému ACL AcuStar: 35 dnů. VWF:CB Kalibrátor 1 & 2 Stabilita po otevření a/nebo rekonstituci v systému ACL AcuStar: 3 hodiny. Pro dosažení optimální stability vyjměte kalibrátory ze systému a skladujte je při 2-8 C v uzavřených plastových zkumavkách s čárovým kódem. Poznámka: Otevřená kazeta by měla zůstat v systému AcuStar. Další informace jsou uvedeny v Návodu k použití ACL AcuStar.

3 Analyzátor/postupy stanovení Kompletní instrukce pro postup stanovení najdete v Návodu k použití ACL AcuStar. Odběr a příprava vzorku Informace o odběru vzorku, nakládání s ním a skladování jsou uvedeny v Dokumentu CLSI H21-A5 6. Před centrifugací zkontrolujte prohlédnutím a jemným převrácením, zda vzorek plné krve neobsahuje větší sraženiny. Pro získání vzorku plazmy proveďte centrifugaci uzavřené zkumavky se vzorkem pomocí nastavení potřebné rychlosti a času pro získání plazmy chudé na destičky, za použití výkyvného rotoru pro snížení kontaminace plazmy krevními destičkami a jinými krevními buňkami. Pro získání vzorku chudého na krevní destičky lze provést jeho dvojí centrifugaci 7,8. Zamrazené vzorky rozmrazujte rychle při 37 C a dle potřeby proveďte jejich centrifugaci. Před použitím vzorky jemně promíchejte. Po rozmrazení musí být vzorky zpracovány do dvou hodin. Před měřením proveďte též centrifugaci vzorků obsahujících viditelné pevné částice. Další reagencie Následující reagencie nejsou součástí soupravy a je třeba je zakoupit samostatně. AcuStar VWF Controls* Kat. č * Nejsou dostupné ve všech zemích. Kontrola kvality Pro kompletní program kontroly kvality je doporučeno používat dvě hladiny kontrol 9. Pro tento program jsou navrženy kontroly AcuStar VWF Controls, nízká a normální. Každá laboratoř by si měla stanovit vlastní střední hodnotu a směrodatnou odchylku a měla by si navrhnout vlastní program kontroly kvality pro monitorování laboratorních metod. V souladu se správnou laboratorní praxí by kontroly měly být prováděny nejméně jednou za osmihodinovou směnu. Další infomace jsou uvedeny v Návodu k použití analyzátoru. Informace o postupech pro zjišťování a řešení situací, kdy jsou kontroly mimo povolené rozmezí, najdete v práci Westgarda a kol. 10 Návaznost kontrolních materiálů Uvedené hodnoty byly stanoveny v průběhu několikanásobných měření na systému ACL AcuStar, za použití specifických šarží reagencií a oproti vnitřnímu firemnímu standardu, jehož hodnota byla přiřazena na základě aktuálního Mezinárodního referenčního materiálu pro VWF a FVIII 11. Výsledky Výsledky VWF:CB jsou uváděny v % normálu, což odpovídá IU/dl. Pro stanovení diagnózy by měly být výsledky použity v kontextu dalších informací, včetně klinické anamnézy. Další informace jsou uvedeny v Návodu k použití ACL AcuStar. Omezení/interferující látky Výsledky VWF:CB na ACL AcuStar nejsou ovlivněny hemoglobinem až do 500 mg/dl, bilirubinem až do 18 mg/dl, triglyceridy až do 1250 mg/dl a revmatoidním faktorem až do 800 IU/ml. Doporučené hodnoty V souladu s CLSI C28-A3 byla provedena interní studie normálního rozmezí (261 vzorků), za použití soupravy HemosIL AcuStar VWF:CB 12. Krevní skupina AB0 13 Počet HemosIL AcuStar VWF:CB Všechny ,5% - 181,2% A + B + AB ,1% - 193,3% O ,0% - 170,7% Vzhledem k mnoha faktorům, které mohou ovlivnit výsledky, by si každá laboratoř měla stanovit své vlastní normální rozmezí VWF:CB. Charakteristiky stanovení Přesnost: Přesnost byla stanovena na 1 analyzátoru AcuStar, za použití 3 šarží reagencie. Přesnost byla stanovována ve shodě s CLSI EP5-A3 14, během 20 dní, po 2 cyklech každý den a vždy ve dvou replikách pro každou hladinu vzorku (n=80/analyzátor/šarže). Výsledky měření typické šarže jsou uvedeny níže.

4 ACL AcuStar Střední hodnota CV% CV% (% VWF:CB) (jeden cyklus) (celkový) Vzorek s velmi nízkou hodnotou 0,6 8,9 9,3 VWF nízká kontrola 22,8 4,3 5,0 Vzorek s nízkou hodnotou 28,3 3,3 5,3 Vzorek na úrovni cut-off 47,8 4,2 4,8 VWF normální kontrola 83,9 5,7 6,2 Vzorek s normální hodnotou 104,7 3,9 5,2 Vzorek s vysokou hodnotou 136,0 4,1 7,8 Vzorek s vysokou hodnotou a přeměřením ( re-run) 253,1 4,4 4,6 Korelace: Ve shodě s EP09-A2 15 bylo provedeno interní porovnání metod, v němž byla srovnávána reagencie HemosIL AcuStar VWF:CB s komerční metodou ELISA, s následujícími výsledky: Systém počet směrnice úsek r srovnávací metoda ACL AcuStar 119 1,059-0,7924 0,922 ELISA Výsledků přesnosti a korelace bylo dosaženo se specifickými šaržemi reagencií a kontrol. V praktické studii byla za použití specifických šarží reagencie HemosIL AcuStar VWF:CB získána následující data: Systém počet směrnice úsek r srovnávací metoda ACL AcuStar 139 0,9438-0,5449 0,967 ELISA Detekční limit: Systém ACL AcuStar 0,2% Linearita: Systém ACL AcuStar 0,5% - 200,0% Pokud je v analyzátoru aktivovaná možnost rerun (přeměření), analyzátor provede automatické ředění a úpravu konečného výsledku tak, aby byl zohledněn faktor ředění (20x), čímž dojde k rozšíření rozsahu testu (test range) až do %. Test není ovlivněn efektem prozóny. Po inkubaci vzorku obsahuje aplikační protokol promývací krok, jenž zabraňuje efektu prozóny. Efekt prozóny nebyl zaznamenán až do 2753,0%, což byla nejvyšší testovaná koncentrace. Bibliografie: 1. Favaloro EJ. An update on the von Willebrand factor collagen binding assay: 21 years of age and beyond adolescence but not yet a mature adult. Semin Thromb Hemost. 2007; 33(8): Flood VH, Cox Gill J, Friedman KD, Christopherson PA, Jacobi PM, Hoffmann RG, Montgomery RR, Haberichter SL and the Zimmerman Program Investigators. Collagen Binding provides a Sensitive Screen for Variant von Willebrand Disease. Clin Chem 2013; 59(4): Lisman T, Raynal N, Groeneveld D, Maddox B, Peachey AR, Huizinga EG, de Groot PG and Farndale RW. A single high-affinity binding site for von Willebrand factor in collagen III, identified using synthetic triple-helical peptides. Blood 2006; 108(12): Centers for Disease Control and Prevention (CDC), National Academic of Clinical Biochemistry (NACB), National Institutes of Health (NIH). Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories [Internet]. 5th ed. Wilson DE, Chosewood LC, editors. Washington, DC: USGPO; p. HHS Publication No. (CDC) [cited 2016 Mar 9]. K dispozici na: 5. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Fourth Edition. Wayne, PA: The Institute; (CLSI Doc; 26, 22). 56 p. GP40-A4-AMD. 6. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-Fifth Edition. Wayne, PA: The Institute; (CLSI Doc; 28, 5). 33 p. H21-A5. 7. CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Assays of von Willebrand Factor antigen and ristocetin cofactor activity. Wayne, PA: The Institute; (NCCLS Doc; 22, 20). 36 p. Approved guideline. H51-A. 8. Favaloro EJ, Soltani S, McDonald J. Potential laboratory misdiagnosis of hemophilia and von Willebrand disorder owing to cold activation of blood samples for testing. Am J Clin Pathol. 2004; 122(5): Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of quality control specimens for coagulation. Am J Clin Pathol. 1970;53(6): Westgard JO, Barry PL. Cost-effective Quality Control: managing the quality and productivity of analytical process. Washington, DC: AACC Press; p.

5 11. NIBSC (National Institute for Biological Standards and Control), WHO International Laboratory for Biological Standards, UK Official Medicines Control Laboratory. WHO International Standard. 6th International Standard Factor VIII and von Willebrand factor in plasma. Instructions for use Version 3.0 [Internet]. Hertfordshire: NIBSC; 30/11/ p. NIBSC code: 07/316. [cited 2016 Jan 13]. K dispozici na: CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Defining, establishing and verifying reference intervals in the clinical laboratory. 3th ed. Wayne, PA: The Institute; (CLSI Doc; 28, 30). 76 p. EP28-A3c. 13. Gill JC, Endres-Brooks J, Bauer PJ, Marks WJ, Montgomery RR. The effect of ABO blood group on the diagnosis of von Willebrand disease. Blood. 1987; 69(6): CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Procedures; Approved guideline. Third edition. Wayne, PA: The Institute; (CLSI Doc; 34, 12). 120 p. EP5-A NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards). Method comparison and bias estimation using patient samples. 2nd ed. Wayne, PA: The Committee; (CLSI Doc; 22, 19). 35 p. EP9-A2. ACL a AcuStar jsou obchodní značky Instrumentation Laboratory Instrumentation Laboratory. Vydáno v dubnu 2016.