Rapid-VIDITEST Campylobacter (Jednokrokový kazetový test pro detekci Campylobacter spp.) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Campylobacter je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci rodu Campylobacter ve vzorcích stolice, který může být užitečný pro diagnózu kampylobakterióz. ÚVOD: Kampylobakterióza je infekční onemocnění způsobené bakterií rodu Campylobacter. Do rodu Camplobacter se řadí 16 druhů a 6 poddruhů, z nichž nejčastěji bývá nalézán C. jejuni (poddruh jejuni) a C. coli. C. laridis a C. upsaliensis jsou také považovány za primární patogeny, ale jejich výskyt u lidí je méně častý. Nejčastější formou přenosu je fekálně-orální přenos, přenos sexuálním stykem, kontaminovanou potravou nebo nápoji, konzumace tepelně neupraveného masa. Počátek symptomů je obyčejně 2 až 5 dnů po infekci, ale může nastat během 1 nebo až po 10 dnech po infekci. Nejběžnějším klinickým symptomem kampylobakterové infekce je průjem (často krvavý), bolest břicha, křeče, bolesti hlavy, nevolnost a/nebo zvracení. Symptomy obvykle trvají 3 až 6 dní. U některých nemocných osob se nemusí projevit žádné symptomy. U osob s poruchou imunitního systému se někdy Campylobacter šíří do krevního řečiště a způsobuje závažné, život-ohrožující infekce. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Campylobacter je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Campylobacter ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány monoklonální protilátky proti antigenům Campylobacter. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-campylobacter monoklonální protilátky červená mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - testovací kazety - odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervačních látek nebo transportního média). Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při +2 až +10 C. V případě delšího skladování se musí vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Cyklus zmrazení a rozmrazení se nedoporučuje opakovat více než třikrát. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte. Příprava vzorků a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (cca 150mg) (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte konec špičky zkumavky (obr. 4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Campylobacter z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 μl) naředěného vzorku (obr. 5). Vyvarujte se aplikace pevných částic stolice. V případě, že test neproběhl kvůli přítomnosti pevných částic v aplikačním okénku, promíchejte vzorek v okénku anebo přidejte kapku extrakčního pufru a vyčkejte až uvidíte vzlínání kapaliny do testovací zóny. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Červená Červená Negativní Pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. To může znamenat infekci způsobenou bakterií Campylobacter. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Campylobacter spp. jsou bakterie, které jsou hlavní příčinou průjmových onemocnění u lidí a jsou celosvětově považovány za hlavní příčinu bakteriálních gastroenteritid. V rozvojových zemích je průjmové onemocnění častěji způsobeno právě těmito bakteriemi než například bakteriemi rodu Salmonella. V rozvojových zemích jsou u dětí do dvou let infekce bakterií Campylobacter hodně frekventované, někdy končí až smrtí. Téměř ve všech rozvojových zemích již několik let neustále roste výskyt lidské kampylobakteriální infekce. Důvody toho jsou neznámé. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). Vzorek více zřeďte ředicím roztokem a opakujte test. 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Opakované zmrazení a rozmrazení vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku. 5. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu kampylobakteriózy. Potvrzení diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu. ÚČINNOST TESTU: Citlivost a Specifita: Byly otestovány vzorky stolice od pacientů se stejnými kampylobakteriálními symptomy. Všechny pozitivní vzorky byly testovány Rapid-VIDITEST Campylobacter a porovnány s výsledky získanými při kultivaci. Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě. Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST Cympylobacter zaručuje vysoký stupeň specificity pro detekci těchto bakterií. Protilátky použité k vyhodnocení tohoto testu rozpoznají epitopy přítomné v antigenu, který se nalézá ve vzorku stolice pacienta, stejně dobře jako z bakteriálních kultur in vitro. Křížová reaktivita: Ke stanovení křížové reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST Campylobacter. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a někdy přítomnými látkami ve stolici (H. pylori, Rotavirus, Adenovirus, Escherichia coli). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte. 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití - test nepoužívejte jestliže je obal poškozen - během testu nejezte, nepijte a nekuřte, dodržujte Správnou laboratorní praxi, používejte ochranný oděv a jednorázové rukavice - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy - test musí být proveden do dvou hodin od otevření obalu REFERENCE: 1. Fernández, H. and Farace, M.I.: Manual de Procedimientos Campylobacter. INEI. 2003. 2. Kawatsu, K. et. Al.: Development and Evalution of Immunochromatographic Assay for Simple and Rapid Detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in Human Stool Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Apr. 2008 Vol. 46, No. 4, p. 1226-1231. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6