Rapid-VIDITEST Adenovirus Resp. (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Adenoviru z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Adenovirus Resp. je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenů adenoviru. Je určen ke stanovení antigenu z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů. ÚVOD: Adenoviry způsobují obvykle respirační onemocnění. V závislosti na infikujícím serotypu však mohou způsobovat i další onemocnění, jako je gastroenteritida, zánět spojivek, cystitida a vyrážkové onemocnění. Symptomy respiračního onemocnění způsobeného adenovirem mohou být různé; od běžných příznaků chřipky po pneumonii, záškrt a bronchitidu. Zvláště u pacientů s oslabeným imunitním systémem se mohou při adenovirové nákaze očekávat vážné komplikace. Adenovirus se přenáší přímým kontaktem, fekálně-orální cestou a příležitostně také kontaminovanou vodou. Některé typy adenoviru mohou způsobovat persistující asymptomatické infekce na krčních i nosních mandlích. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Adenovirus Resp. Card je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenů adenoviru z nosních vzorků. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky proti virovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-adenovirus myší monoklonální protilátky modrá mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety (obsahují jednorázové plastové pipety) - Sterilní odběrové tampony - Roztok B (ředicí roztok pro vzorky) - Testovací zkumavky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky nosních výtěrů: Vzorky odebírejte sterilním vatovým tamponem z jedné nosní dírky. Zasuňte vatový tampon asi 3 cm hluboko a rotačním pohybem tamponu otřete stěnu nosní dírky. Test by měl být proveden co nejdříve po výtěru. Vzorky nosních výplachů a aspirátů: Dospělí pacienti: Do nosu vložte irigátor a celou dutinu důkladně propláchněte fyziologickým roztokem (2,5ml). Irigátorem otáčejte tak, aby se tekutina dostala skutečně do všech míst. Předkloňte hlavu pacienta, aby mohl mukózní roztok z dírky dobře vytékat. Vzorek zachyťte do čisté odběrové nádoby. Totéž opakujte i pro druhou nosní dírku. Děti: Fyziologický roztok vleže nakapejte do nosu, odsajte vzorek výplachu a přeneste do čisté odběrové nádoby. Stejný postup opakujte pro obě nosní dírky. Vzorky by měly být zpracovány co nejdříve po odběru. Před testováním mohou být skladovány v lednici při 2-4 C po dobu 8 hodin. PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorky nosního výtěru nebo výplachu a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 2
Postup A: pro vzorky nosních výtěrů 1. Do testovací zkumavky aplikujte 15 kapek roztoku B (1). Vložte do ní odběrový tampon. 2. Krouživým pohybem tamponu důkladně roztok promíchejte. Třete tampon o stěnu zkumavky a nakonec z něj stlačením plastové zkumavky vytlačte co nejvíce tekutiny (2). Kvalita testu závisí na tom, jak dobře bude vzorek z tamponu extrahován. Tampon likvidujte jako infekční odpad. 3. Vyjměte testovací kazetu ze sáčku a položte ji na vodorovnou podložku. 4. Do oválného okénka, které je označeno šipkami, aplikujte 4 kapky roztoku z testovací zkumavky (3). Na každý vzorek použijte novou pipetu. 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). Přidejte 4 kapky směsi S (1) Přidejte 15 kapek reagencie B (2) Vložte tampon a extrahujte z něj maximum tekutiny Kontrolní zóna C Výsledková zóna T (3) Vyčkejte 10 minut Postup B: pro vzorky nosních výplachů a aspirátů: 1. Do testovací zkumavky aplikujte 6 kapek nosního výplachu (1) nebo aspirátu. 2. Přidejte do zkumavky 3 kapky roztoku B (2). Opakovaným nasáváním roztoku do pipety směs důkladně promíchejte (3). 4. Vyjměte testovací kazetu ze sáčku a položte ji na vodorovnou podložku. 5. Do oválného okénka, které je označeno šipkami, aplikujte 4 kapky roztoku z testovací zkumavky (4). Na každý vzorek použijte novou pipetu. 6. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). S Přidejte 4 kapky (1) Přidejte 6 kapek nosního aspirátu (2) Přidejte 3 kapky reagencie B (3) Pomocí pipety promíchejte vzorek (alespoň 10x) Kontrolní zóna C Výsledková zóna T (4) Vyčkejte 10 minut 3
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném písmenem C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Modrá Modrá Negativní Adenovirus pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Adenovirus pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také modrá linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost modré linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita modré barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: - Test musí proběhnout do 2 hodin od otevření zataveného obalu. - Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze adenovirové infekce. Potvrzení infekce musí být provedeno lékařem poté, co byly vyhodnoceny všechny klinické a laboratorní nálezy. - Rapid-VIDITEST Adenovirus Resp. může být použit pouze pro nosní výtěry, výplachy a aspiráty. Výsledky při použití výtěrů z jiných částí těla nebo při použití jiných vzorků, jako jsou sliny, hlen nebo moč, nemohou být uznány platnými. Kvalita testu záleží na kvalitě odebraného vzorku. Vzorky proto odebírejte s náležitou přesností. - Při použití nekvalitních vzorků, nebo vzorků s příliš nízkou koncentrací antigenu může dojít k falešné negativitě výsledku. ÚČINNOST TESTU: Citlivost Podle instrukcí k použití tří různých testovacích souprav k detekci adenoviru byly testovány různé pozitivní i negativní nosní vzorky. Detekce adenoviru vykazovala >99% citlivost ve srovnání s jinými rychlými komerčními testy (CorisBioConcept) a s imunofluorescenčními testy PathoDx Adenovirus (Remel). Specifita Použití myších monoklonálních protilátek v Rapid-VIDITEST Adenovirus Resp. testu zaručuje při detekci antigenů adenoviru vysoký stupeň specifity. Detekce adenoviru vykazovala >99% specifitu ve srovnání s jinými rychlými komerčními testy (CorisBioConcept) a s imunofluorescenčními testy PathoDx Adenovirus (Remel). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2-30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. Na každý vzorek musí být použit nový odběrový tampon - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5
REFERENCE: 1. MARCELA ECHAVARRIA, JOSE L. SANCHEZ, et al. Rapid Detection of Adenovirus in Throat Swab Specimens by PCR during Respiratory Disease Outbreaks among Military Recruits, Journal of Clinical Microbiology, Feb. 2003, Vol. 41, No. 2, p. 810 812. 2. MARILYN J. AUGUST' AND ANN L. WARFORD; Evaluation of a Commercial Monoclonal Antibody for Detection of Adenovirus Antigen Journal of Clinical Microbiology, Nov. 1987, Vol. 25, No. 11; p. 2233-2235. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2014 6