Rapid-VIDITEST H. pylori (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Helicobacter pylori ve stolici ) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST H. pylori je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Helicobacter pylori ve stolici. ÚVOD: Helicobacter pylori (H. pylori) je spirálovitá bakterie, která bývá nalézána na žaludeční sliznici nebo adheruje k epitelu žaludku. H. pylori je příčinou více než 90% vředů duodena a více než 80% žaludečních vředů. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST H. pylori je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Helicobacter pylori ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky proti antigenům H. pylori. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-h. pylori myší monoklonální protilátky červená mikrosféra). Směs barevného konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru přes testovací zóny kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního výsledku budou specifické protilátky imobilizované na testovací zóně membrány vázat barevné částice. Objeví se různé barevné linky v závislosti na přítomnosti viru ve vzorku. Pomocí těchto linek se interpretuje výsledek. Směs se pohybuje dále směrem nahoru do kontrolní zóny, kde jsou imobilizované protilátky pro kontrolní zónu. V té by se měla vždy objevit červená linka. Přítomnost červené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky (ne vodnaté nebo odebrané při průjmu) odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při 2-4 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Před použitím vzorky nechte vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4). 2. Po vytemperování kazety otevřete obalovou folii v označeném místě. 3. Těsně před použitím vyjměte Rapid-VIDITEST H. pylori z obalové folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. 4. Použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu pro každý vzorek a kontrolu zvlášť. Přidejte přesně 5 kapek nebo 150 l naředěného vzorku z odběrové zkumavky do oválného okénka označeného šipkou a písmenem S (5). Vyvarujte se aplikace pevných částic z odběrové zkumavky na membránu. 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). 3
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S, výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). NEGATIVNÍ: Objeví se pouze ČERVENÁ linka (kontrolní) v místě označené C. POZITIVNÍ: Kromě kontrolní ČERVENÉ linky se objeví ČERVENÁ linka v místě označeném T. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví červená linka bez ohledu na to, zda se v zóně výsledku objeví linka. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku nebo nesprávné provedení testu. V tomto případě opakujte přípravu vzorku a proveďte test na nové kazetě. Pokud se problém opakuje, kontaktujte distributora. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví červená linka. V testu je použit interní standard. Červená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat přípravu vzorku a test. 3. Některé vzorky můžou způsobit snížení intenzity červené kontrolní linky. 4. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost infekce Helicobacter pylori. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 5. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. ÚČINNOST TESTU: Citlivost: Detekční limit: Kultura bakterií H. pylori byla sonikována, centrifugována a stanovena koncentrace proteinů v kultuře. Takto připravený referenční antigen H. pylori byl ředěn ve fosfátovém pufru s přídavkem BSA a testován podle návodu k soupravě. Detekční limit této soupravy byl stanoven 4 8 ng/ml. Specificita: Hodnocení účinnosti tohoto testu bylo provedené tak, že výsledky získané Rapid-VIDITEST H. pylori d testem byly porovnány s výsledky na jiném komerčně dostupném membránovém testu. Z tohoto porovnání byla stanovena citlivost a specificita testu. Detekce H. pylori vykazovala 95 % shodu výsledků s komerčními testy. Protilátky použité v testu Rapid-VIDITEST H. pylori rozpoznávají epitopy přítomné u antigenů ve stolici, stejně tak i antigeny připravené in vitro z bakteriální kultury. Sonikovaný extrakt H. pylori z různých komerčně dostupných vzorků reaguje v testu Rapid-VIDITEST. Interference protilátkami HAMA ani vysokou hladinou revmatoidního faktoru ve vzorcích stolice není významná. Některé vzorky stolice mohou vytvářet kontrolní linku světle červené barvy. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2-30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku. - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5
REFERENCE: 1. Bruce E. Dunn, Hartley Cohen, Martin J. Blaser. Helicobacter pylori. Clin.Microbiol.Rev.10(4), 720-741, Oct.(1997). 2. Martin J. Blaser. Helicobacter pylori and gastric diseases. BMJ; 316;, 1507-1510 (1998). 3. John L. Telford, Antonello Covacci, Rino Rappuoli, Paolo Ghiara. Immunobiology of Helicobacter pylori infections. Current Opinion in Immunology, 9, 498-503 (1997). POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6