PCR DIAGNOSTIKA INFEKČNÍCH AGENS V LIKVORU MUDr. Zuzana Bílková MUDr. Ondřej Sobek, CSc.
ZÁKLADNÍ DG ALGORITMUS Základní dg algoritmus vychází: klinický obraz, epikrízaě odbĝr biologického materiálu cytologický obraz (kvantitativní + kvalitativní) základní biochemická vyšetįení (CB,glu+lak=energetika/KEB) imunologické parametry (cytokiny, TNF) Dg. floridního zánětlivého procesu přímý průkaz patogenu (kultivační vyšetření, PCR) nepřímý průkaz stanovení specifických protilátek
KULTIVACE Výhody Široké spektrum zachycených mikrorg. na dg pķdách (selektivní dg pķdy) Možnost další práce s vykultivovaným kmenem (identifikace, aglutinace, sérotypizace, citlivost k atb) Nevýhody problémy s rķstem bc na kult. pķdách (po ATB) časová náročnost nemožnost kultivace nĝkterých agens (rutinnĝ se neprovádí u virķě leptospiryě borelie (spirochety), toxoplasma, chlamydie, mykoplazmy)
PCR Výhody rychláě citliváě prķkaz nekultivovatelných a obtížnĝ kultivovatelných patogenķ u kritických pacientķě riziko prodleníě empirická th, eskalační - deeskalační th MOŽNOST PRĶKAZU I VIRĶ (resp. libovolného mikrobiálního agens) Nevýhody nelze dále pracovat s kmenem dg spektrum (možnost multiplexķ) vyšší cena Vhodné obĝ možnosti diagnostiky kombinovat.
KAZUISTIKA Č. 1 83-letá pacientka pįijatá na neurol. JIP 8.1.2015 (čt); likvor zaslán TOPELEX + OKM ÚVN epikríza: meningeální syě porucha vĝdomíě TT 38 st.c, susp. neuroinfekce cytologie: Elementy: 680; Barvení: M-G: granulocytární pleocytóza s aktivací lymfocytķ; ůram: drobné gě tyčkyě kokovité formy KEB: -101,68 v záporných hodnotách oxidační vzplanutí profesionálních fagocytķ (granulocytķ) - susp. bakteriální infekce PCR: LIMO pozitivní prķkaz 9.1.2015 (pátek dopoledne) empirická léčba AMP kultivačnĝ prķkaz LIMO 10.1.2015 a nasazeny testy citlivosti (so+ne) Th: AMP lék volby, dop. doplnit Gen
KAZUISTIKA Č. 2 39-letá pacientka, hosp. na neurochirurgii, likvor zaslán 2.6.2015 epikríza: 4 mĝsíce po resekci kraniofaryngeomu, opakovaná likvorea,hydrocefalus, zavedený shuntě mok kultivačnĝ negativníě susp. neuroinfekce cytologie: 2.6. Elementy: 200 ; Barvení: M-ů: pįevaha neutrof. granulocytķě pįítomny známky aktivace v lymfocytární įadĝě v monocytární įadĝ bez substrátu fagocytózy; ůram: bez prķkazu bakteriálních a mykotických partikulí. KEB : -125,13 oxidační vzplanutí profesion. fagocytķ
KAZUISTIKA Č. 2 POKRAČ. PCR: Candida albicans kultivačnĝ bez nálezu (sonifikace) 8.6.: ELE: 206; trvající pįevaha granulocytķě plazmocyty;v monocyt. įadĝ ojed. pĝnité buňky; KEB: 4,86; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 14.6.: ELE: 115; granulocytátní pleocytóza, lymfocytární reakce; KEB: -14,35; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn
KAZUISTIKA Č. 2 POKRAČ. 17.6.: ELE 275; granulocytární pleocytózaě zhoršení nálezu KEB: 3,38, PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 23.6.: ELE: 180; trvající granulocytární pleiocytóza s plazmocytární reakcíě trvající obraz hnisavého zánĝtu KEB: 2,12; PCR: CAAL pozitivní; kultivace: bbn 30.6.: ELE: 11; KEB: 22,37; PCR: CAAL- NEGATIVNÍ Th: Diflucan
KAZUISTIKA Č. 3 6-ti mĝsíční holčičkaě indikovaný pįedčasný porod s.c., v dobĝ porodu matka nemocnáě užívala atbě otec pįenašeč m. Wilson epikríza: pįetrvává výrazná elevace zánĝtlivých parametrķě v HK E.coli cytologie: ELE: 7253; M-ů: pįevaha neutrof.granulocytķě četná vakuolizace v monocyt. įadĝěreaktivní lymfoplasmocytyě masivní nálož bakterií; ůram: gpolymorfní tyče KEB: -1516 PCR: Enterobacteriaceae POZITIVNÍ Th: cef.3. gen +Gen, Meronem
KAZUISTIKA Č. 3 (TABULKA) 172 ELE 2259 215 487 152 57 (KP, plazmocyt 0) 10 KEB -1948-158 -31,87-6,1 15,74 15,95 15,63 PCR pozit. pozit. pozit. pozit. NEG. NEG. NEG. Tab.: Vývoj infekce v laboratorních parametrech
KAZUISTIKA Č. 4 EPIKRÍZA: 40-ti letá ženaě 4 dny trvající cefalea, nauzea, vomitusě klin. vyjádįený meningeální sy, susp. serózní neuroinfekce Cytologie: Kvantitativní: elementy: 357/mikroliltr Kvalitativní: pįevaha aktivovaných lymfocytķě pįítomny nečetné plazmocyty; Ré: obraz serózního zánĝtu KEB: 22,79 v mezích serózního zánĝtu
KAZUISTIKA Č. 4 POKRAČ. Zánětl. markery: elevace: IL6, IL8, IL10, CXCL13, BMG, AAG Destrukční markery: elevace S-100- známky bunĝčné léze Serologie: Anti- HSV1+2,-VZV,-CMV,-EBV zvýšená hladina ve tįídĝ IgG, IgM bez nálezu, v.s. anamnestické protilátky PCR: POZITIVNÍ PRŮKAZ PĮÍTOMNOSTI DNA VIRU HSV2!
ZÁVěR Vhodné je metody přímého průkazu kombinovat Případně se rozhodnout pro tu, která je pro konkrétní případ: vhodnĝjší (napį. PCR pro obtížnĝ kultivovatelné agens) má vĝtší pįínos (mám podezįení na určitý patogeně potįebuji co nejrychleji informaciě potvrdím nebo vyloučím PCR) www.likvor.cz