DEN LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY LYMESKÉ BORRELIÓZY Brno, seminář f. Dynex 1.4.2009
Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě Centrum klinických laboratoří Hana Bílková Fránková á Oddělení parazitologie a lékařské zoologie
SOP 4011 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia afzelii metodou EIA SOP 4012Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia garinii metodou EIA SOP 4013 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia burgdorferi metodou EIA SOP 4014 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia afzelii metodou Western blot SOP 4015 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia garinii metodou Western blot
Stanovení IgG a IgM protilátek Borrelia burgdorferi sensu lato metodou EIA Stanovení IgG a IgM protilátek Borrelia burgdorferi sensu lato metodou Western blot Stanovení intratekální syntézy protilátek proti boréliím
Western blot V roce 2008 jsme vyšetřili celkem 3783 (600) pacientů na přítomnost IgG a IgM protilátek proti Borrelia afzelii...719 (300) pacientů na přítomnost IgG a IgM protilátek proti Borrelia garinii...191 likvorů na přítomnost protilátek proti Borrelia garinii 2 x týdně ě 45 pacientů ů
EX YN.D W W W Z.C
použito z www.dynex.cz WWW.DYNEX.CZ
Způsob hodnocení reakce western Manuálně Scanner Kamera! blot použito z www.dynex.cz
EUROBLOT kamerový systém v provozu karvinské laboratoře od listopadu 2006 Za toto období zpracováno celkem 9 356 vzorků 325 neshod (11/06 3/09) 1,7%
přínos pro laboratoř + - standardizace odečítání nečistot, bublin... eliminace subjektivní chyby v IgM přeceňování, převod dat do LISu nadhodnocování pozitivity na eliminace chyby při vkládání úrovni p41 archivace VŠ provádí pouze kontrolu upozornění na atypické - neshodné výsledky
NEUROBORRELIÓZA Na základě mezinárodního doporučení č European Union Concerted Action on Lyme Borreliosis je pro diagnostiku časné i pozdní neuroboreliózy je nezbytně nutný průkaz intratekální produkce protilátek tedy detekce specifických antiborreliových protilátek syntetizovaných v likvoru.
Principem metody je stanovení specifického protilátkového indexu, který vyjadřuje poměr hladiny protilátek v mozkomíšním moku k výši hladiny protilátek v krevním séru a to ve vztahu ke stavu hematolikvorové bariéry a koncentraci celkových imunoglobulinů li ů vmozkomíšním í moku a séru.
Hladina prolilátek v likvoru závisí na: Hladině ě protilátek v krevním séru Permeabilitě HE bariéry Intratekální produkci Ab
Specifické protilátky stanovujeme imunoenzymaticky Celkové IgG a IgM protilátky a hladinu albuminu stanovujeme nefelometricky Absolutní hodnoty absorbancí sér a likvorů jsou převedeny na tzv. arbitrární jednotky (AU) a poté je vypočtena hodnota protilátkového indexu dle Reibera
AU = arbitrární jednotky odpovídajícím absorbancím b likvoru a séra jsou odečteny z kalibrační křivky AI index je počítán dle Reiberovy metodiky. Z hodnot koncentrací albuminu a celkových Ig v séru a likvoru je vypočítán: QAlb = konc.al v likvoru/ konc. Al v séru QIgG, IgM = konc.celk.igg,igm v likvoru/ konc.celk.igg,igm v séru WWW.DYNEX.CZ
Qspec IgG, IgM = AU v likvoru/ AU v séru Horní hranici rozsahu QAlb statisticky definuje rovnice pro QLim: QLim( IgG) 2 6 = 0,93x QAlb + (6x10 ) 1,7 x 10 3 QLim( IgM ) 2 6 = 0,67x QAlb + (120x10 ) 7,1x 10 3
AI vyjadřuje poměr koncentrací specifických protilátek v likvoru a séru ve vztahu ke stavu hematoencefalické bariéry a koncentraci celkových imunoglobulinů li ů v likvoru a séru výpočet AI pro IgG (stejně IgM): Je-li: QLim(IgG) > QIgG, pak AI(IgG) = Qspec (IgG) / QIgG QLim(IgG) < QIgG, pak AI(IgG) = Qspec (IgG) / QLim(IgG) WWW.DYNEX.CZ
Hodnota QAlb udává stav hematoencefalické bariéry: Normální Střední porucha Těžká porucha
Produkce Ig v CNS, intaktní bariéra Dysfunkce bariéry, přídatná produkce Ig Dysfunkce bariéry bez produkce Ig Intaktní bariéra, normální rozmezí Chyba v analytickém kroku
Podmínky stanovení: Párový odběr likvoru a séra Stanovení hodnot koncentrace albuminu, imunoglobulinů IgM a IgG v likvoru i séru Použití standard IgG a IgM Pozn. mok nesmí být kontaminovaný erytrocyty (>100 ery v 1μl) Albumin je protein syntetizovaný v játrech, přítomnost v CSF je krevního původu. Zvýšení permeability hematoencefalické a hematolikvorové bariéry při neuroinfekcích avizující patologické změny v CNS. Změna je dána úsilím organismu poskytnout CNS látky s neuroprotektivním účinkem, umožňující efektivní a plnohodnotný průběh zánětlivého procesu.
191 požadavků na vyšetření protilátek v likvoru. 31 stanovení s pozitivním signálem tvorby protilátek v mozkomíšním moku (nebo těsně pod hranicí cut-off), u 12 (7%) prokázali intratekální tvorbu protilátek 6 žen a 6 mužů. 5 s dg. G 51 Obrna lícního nervu 3 s dg. G 03 Meningitis 2 s dg. A 69.2 Lymeská nemoc 1 s dg. I 63 Mozkový infarkt 1 s dg. G 62 Polyneuropatie Ženy (2003 1935) převažují ř mladší Muži (1975 1926) převažují starší
Stanovení protilátek metodou EIA Negativní Pozitivní Stanovení protilátek metodou Westernblot Stanovení antibody indexu Stanovení protilátek metodou Westernblot
Děkuji za pozornost hana.frankova@zuova.cz www.zuova.cz 596 200 111