BACTEC Lytic/10 Anaerobic /F Culture Vials

Transkript

1 ÚÈEL POUZ ITÍ Lytic/10 Anaerobic /F Culture Vials PP108JAA 2008/01 Èesky Kultivační lahvičky Lytic/10 Anaerobic/F (předem redukovaná obohacená živná půda s výtažkem sójového kaseinu a CO 2 ) se používají pro anaerobní krevní kultury. Hlavní použití je s fluorescenčními přístroji pro kvalitativní kultivaci a průkaz anaerobních mikroorganismů v krvi. SHRNUTÍ A VYSVÌTLENÍ Testovaný vzorek se inokuluje do jedné nebo nìkolika lahvièek, které se vloz í do fluorescenèního pøístroje za úèelem inkubace a pravidelného odeètu. Kaz dá lahvièka obsahuje chemické èidlo, které detekuje zvýšení mnoz ství CO 2 vyprodukovaného rùstem mikroorganismù. Pøístroj kaz dých deset minut monitoruje zvýšení fluorescence èidla, která je pøímo úmìrná mnoz ství pøítomného CO 2. Pozitivní odeèet znamená, z e se v lahvièce pravdìpodobnì nachází z ivotaschopné mikroorganismy. Detekce se týká pouze mikroorganismù, které se budou mnoz it v urèitém typu. ZÁSADY POSTUPU Pokud se v testovaném vzorku inokulovaném do lahvièky mikroorganismy nac hází, budou organismy pøi metabolizaci substrátù nacházejících se v lahvièce vytváøet CO 2. Fluorescenèní pøístroj bude monitorovat zvyšování fluorescence èidla v lahvièce zpùsobené zvýšením mnoz ství CO 2. Analýza rychlosti zvýšení CO 2 a zvýšení mnoz ství CO 2 umoz òuje fluorescenènímu pøístroji urèit, zda je lahvièka pozitivní, tj. zda testovaný vzorek obsahuje z ivotaschopné organismy. REAGENTY Kultivaèní lahvièky Lytic/10 Anaerobic/F obsahují pøed zpracováním následující aktivní sloz ky: Seznam složek Destilovaná voda ml Živná pùda s výtažkem sójového kaseinu ,75% w/v Kvasnièný výtažek ,2% w/v Natrávenina zvíøecí tkánì ,05% w/v Glukóza ,2% w/v Hemin ,0005% w/v Menadion ,00005% w/v Citrát sodný ,02% w/v Thioly ,1% w/v Pyruvát sodný ,1% w/v Saponin ,26% w/v Èinidlo proti zpìnìní ,01% w/v Polyanetholsulfonát sodný (SPS) ,035% w/v Všechna jsou zøedìna pøidaným CO 2. Anaerobní jsou pøedem redukována a sycena CO 2 a N 2. Sloz ení mohlo být upraveno tak, aby vyhovovalo urèitým provozním poz adavkùm. Varování a bezpečnostní opatření Pro diagnostiku in vitro. Výrobek obsahuje suchou pøírodní pryz. V klinických vzorcích se mohou nacházet patogenní mikroorganismy včetně virů hepatitidy a virů lidské imunodeficience (HIV). Dodržujte proto při práci s veškerým materiálem kontaminovaným krví a jinými tělními tekutinami Standardní bezpečnostní opatření 1-4 a předpisy své instituce. Pøed pouz itím kaz dou lahvièku prohlédnìte a zkontrolujte, zda není poškozená, kontaminovaná èi opotøebená. Lahvièky, které vykazují známky poškození nebo kontaminace, napø. netìsnost, zakalení, zmìnu zabarvení (ztmavnutí), vypoukliny nebo stlaèené víèko, nepouz ívejte. V kontaminované lahvièce by mohl být pøetlak. Pokud pro pøímý odbìr pouz ijete kontaminovanou lahvièku, mohlo by dojít ke zpìtnému prùtoku kontaminovaného kultivaèního do z íly pacienta. Kontaminace lahvièky nemusí být zøejmá na první pohled. Rozhodnete-li se pouz ít pøímý odbìr, pozornì jeho postup sledujte, abyste zabránili zpìtnému prùtoku látek do tìla pacienta. Ve výjimeèných pøípadech mùz e pøi snímání zaklápìcího víèka nebo pøi manipulaci dojít k prasknutí sklenìné lahvièky nebo ke zlomení krèku. Ve výjimeèných pøípadech mùz e také dojít k nedostateènému uzavøení lahvièky. V obou pøípadech mùz e obsah lahvièek vytéci. Dojde-li po inokulaci lahvièky k úniku nebo rozlití jejího obsahu, postupujte opatrnì, protoz e se zde mohou nacházet patogenní organismy nebo látky. Pøed likvidací všechny inokulované lahvièky sterilizujte v autoklávu. Pozitivní kultivaèní lahvièky urèené k subkultivaci, histologickému barvení atd.: Pøed odebráním vzorkù je nezbytné odstranit plynné metabolity mikroorganismù. Odbìr vzorkù provádìjte pokud moz no v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Pøed odbìrem si obleète odpovídající ochranný odìv, rukavice a masku. Další informace o subkultivaci naleznete v èásti Postup. Moz ný únik bìhem inokulace vzorkù do kultivaèních lahvièek lze minimalizovat pomocí injekèních støíkaèek s trvale nasazenými jehlami nebo hroty typu Luer-Lok. Pokyny ke skladování Lahvièky jsou po dodání pøipraveny k pouz ití; nevyz adují z ádnou rekonstituci ani zøedìní obsahu. Skladujte pøi teplotì 2 25 C na suchém místì mimo dosah pøímého sluneèního záøení. ODBÌR VZORKÙ Odbìr vzorkù provádìjte sterilními postupy, abyste sníz ili riziko kontaminace. Obvyklý objem vzorkù je 8 10 ml. Doporuèujeme inokulovat vzorky do lahvièek v blízkosti lùžka pacienta. Vìtšinou se vzorky odebírají 10 ml nebo 20 ml injekèní støíkaèkou s hrotem Luer-Lok. Podle potøeby lze pouz ít drz ák na jehly Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer Safety-Lok nebo jinou soupravu hadièek s kanylou typu butterfly. Rozhodnete-li se pro pøímý odbìr pouz ít jehlu se soupravou hadièek, pozornì pøi zahájení odbìru vzorku sledujte smìr prùtoku krve. Vakuum v lahvièce obvykle pøesáhne hodnotu 10 ml, takz e je dùlez ité, aby uz ivatel sledoval odebraný objem prostøednictvím znaèek v rozestupu 5 ml na štítku lahvièky. Po nataz ení poz adovaných 8 10 ml zastavte prùtok ohnutím hadièky a odstranìním soupravy hadièek z lahvièky. Vzorky o objemu 3 ml lze také pouz ít, ale jejich prokázání nebude tak výrazné jako u vzorkù s vìtším objemem. Inokulovanou lahvièku co nejrychleji pøepravte do laboratoøe. POSTUP Odstraòte z lahvièky zaklápìcí víèko a zkontro-lujte, zda není lahvièka popraskaná, kontaminovaná, pøíliš zakalená, vypouklá nebo zda nemá stlaèenou zátku. Jestliz e si všimnete jakéhokoli defektu, lahvièku NEPOUZ ÍVEJTE. Pøed inokulací oèistìte víèko alkoholem (pouz ití jódu NEDOPORUÈUJEME). Aseptickým postupem vstøíknìte nebo proveïte pøímý odbìr 8 10 ml vzorku na kaz dou lahvièku. Pokud se rozhodnete pouz ít vzorky o objemu 3 4 ml,

2 nebude jejich prùkaznost tak výrazná jako u vzorkù s vìtším objemem (viz Omezení postupu). Inokulované anaerobní lahvièky umístìte co nejrychleji do fluorescenèního pøístroje za úèelem inkubace a monitorování. Pokud inokulovanou lahvièku neumístíte do pøístroje ihned a shledáte v ní viditelný rùst, netestujte ji ve fluorescenèním pøístroji, ale radìji proveïte subkultivaci a Gramovo barvení a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. Lahvièky vloz ené do pøístroje budou automaticky testovány kaz dých deset minut po dobu uvedenou v testovacím protokolu. Fluorescenèní pøístroj øady urèí pozitivní lahvièky (viz příslušná Uživatelská příručka fluorescenčního přístroje ). Èidlo uvnitø pozitivních lahvièek se nebude na první pohled lišit od èidla v negativních lahvièkách, fluorescenèní pøístroj však zjistí rozdíl ve fluorescenci. Po pøidání LYTIC/10 Lytic/10 Anaerobic/F dojde ihned k k hemolýze krve. Zbarvení krve bude zpoèátku èokoládové nebo velmi tmavé. Pokud na na konci testování zjistíte, z e víèko lahvièky LYTIC/10 Lytic/10 Anaerobic/F je je vypouklé, proveïte subkultivaci a a Gramovo barvení a a zacházejte s s ní ní jako s s pozitivní lahvièkou. Pozitivní lahvièky subkultivujte a na podloz ním sklíèku proveïte Gramovo barvení. Ve velké vìtšinì pøípadù budou organismy viditelné a laboratoø bude moci lékaøi oznámit pøedbìz né výsledky. Subkultivace na selektivních médiích a pøedbìz ný pøímý antimikrobiální test na citlivost lze pøipravit z tekutiny obsaz ené v lahvièkách. Subkultivace: Pøed zahájením subkultivace umístìte lahvièku do svislé polohy a na víèko umístìte alkoholem napuštìné krytí. Abyste z lahvièky uvolnili tlak, zaveïte pøes alkoholem napuštìné krytí a pøes víèko sterilní jehlu s odpovídajícím filtrem nebo tampónem. Po uvolnìní tlaku a pøed odbìrem vzorku lahvièky za úèelem provedení subkultivace jehlu vyjmìte. Pøi zavádìní a vyjímání udrz ujte jehlu v pøímé poloze, nezavádìjte ji ani ji nevyjímejte otáèivými pohyby. Abyste získali maximální mnoz ství izolátù, mùz ete negativní kultury nejprve zkontrolovat barvením a/nebo subkultivací a teprve poté je zlikvidovat jako negativní. KONTROLA KVALITY Požadavky na kontrolu kvality musí být splněny v souladu s platnými místními, státními a federálními předpisy a požadavky na akreditaci, a se standardními postupy kontroly kvality vaší laboratoře. Doporučujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provádění kontroly jakosti v příslušných směrnicích CLSI (dříve NCCLS) a předpisech CLIA. Po uplynutí data expirace kultivaèní lahvièky NEPOUZ ÍVEJTE. Lahvièky, které vykazují známky popraskání nebo jiného poškození, NEPOUZ ÍVEJTE a odpovídajícím zpùsobem je zlikvidujte. Souèástí kaz dého balení médií jsou certifikáty kontroly jakosti. Certifikáty kontroly jakosti uvádìjí seznam testovacích organismù vèetnì kultur ATCC urèených normou CLSI, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media (Zajištìní jakosti u kultivaèních médiích pro komerèní úèely). 5 Èasové rozmezí pøed detekcí v hodinách pro kaz dý z organismù uvedený v certifikátu kontroly jakosti pro toto médium je 72 h: Clostridium perfringens ATCC fragilis* ATCC vulgatus ATCC 8482 Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Clostridium histolyticum ATCC *Kmen CLSI Doporuèujeme Informace o kontrole kaz dou kvality zásilku pro médií fluorescenční z hlediska přístroj výkonu otestovat naleznete testem na v příslušné urèení pozitivních uživatelské a negativních příručce fluorescenčního lahvièek. Pozitivní přístroje lahvièku. inokulujte druhem Escherichia coli nebo Staphylococcus aureus o objemu 1,0 ml tak, aby to odpovídalo McFarlandovì normì è. 0,5. Tuto lahvièku a neinokulovanou lahvièku poté OMEZENÍ zaloz te POSTUPU do pøístroje a otestujte. Bìhem 72 hodin by mìl pøístroj urèit inokulovanou lahvièku jako pozitivní. Neinokulovaná lahvièka by mìla zùstat negativní. Tímto testem lze pøed pouz itím médií v laboratoøi ovìøit, z e nebyla vystavena nesprávnému uskladnìní nebo nesprávným pøepravním Kontaminace podmínkám. Pokud některá z těchto lahviček neposkytuje očekávané výsledky, médium nepoužívejte a obraťte se na svého místního zástupce společnosti BD. Informace Bìhem odbìru o kontrole a inokulace kvality do pro lahvièky fluorescenční přístroj nesmí dojít ke kontaminaci naleznete v příslušné vzorku. Výsledkem uživatelské kontaminovaného příručce fluorescenčního vzorku bude přístroje pozitivní. odeèet, který však nebude relevantním klinickým vzorkem. Rozhodnutí musí uèinit uz ivatel v závislosti na takových faktorech, jako je typ prokázaných organismù, pøítomnost stejných organismù ve více kulturách, záznamy pacienta atd. Prokázání OÈEKÁVANÉ organismù VÝSLEDKY citlivých na SPS ze vzorkù krve Studie Jelikoz týkající krev mùz e se inokulace vùèi organismùm kultur na citlivým pùdu byly na SPS provedeny (napø. P. za anaerobius) pouz ití inokula neutralizovat v rozmezí toxicitu od 10 do SPS, 50 je CFU pøítomnost na jednu optimálního kultivaèní lahvièku objemu v krve kombinaci (5 10 s ml) ATCC pøi prokazování i nekultivovanými tìchto mikrobiálními organismù výhodou. kmeny. V následujícím seznamu jsou uvedeny organismy, které systém pro kultivaci krve øady 9000 zjistil v médiu Nìkteré nároèné LYTIC/10 organismy, Anaerobic/F napø. bìhem nìkteré pìti (5) druhy dní Haemophilus, jako pozitivní. vyz adují faktory rùstu, napø. NAD nebo faktor V, které lze získat ze vzorkù krve. Je-li objem vzorku krve 3,0 asaccharolyticus ml nebo ménì, Clostridium bude zøejmì perfringens nutné pro prokázání tìchto organismù anaerobius pøidat odpovídající Staphylococcus mnoz ství. Přídavek epidermidis pro náročné organismy FOS může být fragilis použit jako vyživovací Enterobacter přídavek. cloacae asaccharolyticus Streptococcus pneumoniae Organismy, které ovatus nejsou z ivotaschopné Enterococcus faecalis magnus Streptococcus spp. (skup. A) Nátìr s Gramovým thetaiotaomicron barvením z kultivaèního Escherichia mùz e coli obsahovat malé mnoz ství organismù, prevotil které nejsou Veillonella z ivotaschopné. parvula Zdrojem tìchto organismù jsou Clostridium sloz ky médií, histolyticum chemikálie pro barvení, Fusobacterium imerzní nucleatum olej, podloz ní Propionibacterium sklíèka a vzorky pouz ívané acnes pro inokulaci. Také pacientovy vzorky mohou obsahovat organismy, které se v kultivaèním médiu nebo médiu urèeném k subkultivaci nerozmnoz í. Takové vzorky podle potøeby subkultivujte na speciálních médiích. 6 Clostridium novyi Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus Všeobecné informace ÚÈINNOST Optimálního prokázání izolátù bude dosaz eno pøidáním 8 10 ml krve. Pouz ití menšího èi vìtšího mnoz ství mùz e nepøíznivì ovlivnit prokazování a/nebo èasová V externí rozmezí klinické detekce. studii na Krev dvou mùz e místech, obsahovat v níz se antimikrobiální srovnávala úèinnost látky nebo kultivaèního jiné inhibitory, které mohou LYTIC/10 zpomalit Anaerobic/F mnoz ení s úèinností mikroorganismù kultivaèního nebo tomuto mnoz ení Standard úplnì zabránit. Anaerobic/F, Pokud bylo jsou otestováno pøítomny organismy, celkem 2092 které párù neprodukují vzorkù. Procento dostateèné falešné mnoz ství pozitivity CO 2 pro na to, kultivaèní aby je pøístroj médium detekoval, LYTIC/10 nebo pokud Anaerobic/F došlo pøed bylo 0,1 umístìním %. Procento lahvièky falešné do pøístroje negativity k výraznému bylo 0,4 %. rùstu, mùz e dojít k falešnì negativnímu odeètu. K nesprávnému urèení pozitivity mùz e dojít v pøípadì, z e je poèet bílých krvinek vysoký. Bylo prokázáno celkem 207 organismù. V tabulce 1 jsou uvedeny prokázané izoláty dle typu. Z tìchto izolátù bylo 122 (58,9 %) oznaèeno jako OÈEKÁVANÉ klinicky signifikantní. VÝSLEDKY Z tìchto klinicky signifikantních izolátù bylo 79 (64,8 %) prokázáno v obou médiích, 36 (29,5 %) pouze v kultivaèním médiu LYTIC/10 Anaerobic/F a 7 izolátù (5,7 %) pouze v kultivaèním médiu Standard Anaerobic/F. Prùmìrná doba do detekce u kultivaèního Studie týkající se LYTIC/10 inokulace Anaerobic/F kultur na pùdu byla 13 byly hodin; provedeny prùmìrná za pouz ití doba do inokula detekce v rozmezí u kultivaèního od 10 do 50 CFU na jednu Standard kultivaèní Anaerobic/F lahvièku byla v kombinaci 18,4 hodiny. s ATCC i nekultivovanými mikrobiálními kmeny. Dále je uveden seznam organismů, které byly zjištěny v médiu Lytic/10 Anaerobic/F během pěti (5) dnů. Bylo prokázáno celkem 207 organismù. V tabulce 1 jsou uvedeny prokázané izoláty dle typu. Z tìchto izolátù bylo 122 (58,9 %) oznaèeno jako klinicky signifikantní. asaccharolyticus Z tìchto klinicky signifikantních Clostridium perfringens izolátù bylo 79 (64,8 %) prokázáno v obou médiích, anaerobius 36 (29,5 %) pouze Staphylococcus v kultivaèním epidermidis médiu LYTIC/10 fragilis Anaerobic/F a 7 izolátù Enterobacter (5,7 %) pouze cloacae v kultivaèním médiu Standard Anaerobic/F. asaccharolyticus Prùmìrná doba Streptococcus do detekce u pneumoniae kultivaèního ovatus LYTIC/10 Anaerobic/F byla Enterococcus 13 hodin; prùmìrná faecalis doba do detekce u kultivaèního magnus Standard Anaerobic/F Streptococcus byla spp. 18,4 (skup. hodiny. A) thetaiotaomicron Escherichia coli prevotil Veillonella parvula Clostridium histolyticum Fusobacterium nucleatum Propionibacterium acnes Clostridium novyi Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus ÚÈINNOST V externí klinické studii na dvou místech, v níz se srovnávala úèinnost kultivaèního Lytic/10 Anaerobic/F s úèinností kultivaèního Standard Anaerobic/F, bylo otestováno celkem párù vzorkù. Procento falešné pozitivity pro kultivaèní médium Lytic/10 Anaerobic/F bylo 0,1 %. Procento falešné negativity bylo 0,4 %. Bylo prokázáno celkem 207 organismù. V tabulce 1 jsou uvedeny prokázané izoláty dle typu. Z tìchto izolátù bylo 122 (58,9 %) oznaèeno jako klinicky signifikantní. Z tìchto klinicky signifikantních izolátù bylo 79 (64,8 %) prokázáno v obou médiích, 36 (29,5 %) pouze v kultivaèním médiu Lytic10 Anaerobic/F a 7 izolátù (5,7 %) pouze v kultivaèním médiu Standard Anaerobic/F. Prùmìrná doba do detekce u kultivaèního Lytic/10 Anaerobic/F byla 13 hodin; prùmìrná doba do detekce u kultivaèního Standard Anaerobic/F byla 18,4 hodiny. 2

3 TABULKA 1: Prokázání izolátù v klinické studii dle typu Organismus Prokázán pouze v médiu Lytic/10 Prokázán pouze v médiu Standard Prokázán v OBOU médiích Anaerobní organismy Negativní po Gramovì barvení Pozitivní po Gramovì barvení Kvasnice Seznam organismù prokázaných v médiích Lytic/10 Anaerobic/F: Acinetobacter baumanii Druhy Fusobacterium Staphylococcus koag. negativ. caccae Klebsiella pneumoniae Streptococcus alpha (ne D nebo pneumoniae) fragilis micros Streptococcus enterococcus Candida glabrata Druhy Prevotella Streptococcus skupiny B Clostridium hastiforme Proteus mirabilis Streptococcus skupiny C Druhy Clostridium Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Enterobacter cloacae Salmonella skupiny B Druhy Streptococcus Enterococcus faecalis Serratia marcescens Escherichia coli Staphylococcus aureus DOSTUPNOST Kat. číslo Popis Lytic/10 Anaerobic/F Culture Vials (kultivační lahvičky), krabice s 50 lahvičkami ODKAZY 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.) Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3

4 4

5 B Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo,, FOS, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.