BACTEC NAP TB Differentiation Test Kit PP119JAA 2010/07 Èesky

Transkript

1 BACTEC NAP TB Differentiation Test Kit PP119JAA 2010/07 Èesky ÚÈEL POUŽITÍ Rozlišovací test BACTEC NAP TB slouží k rozlišení komplexu Mycobacterium tuberculosis od jiných mykobakterií. Hlavní použití je vázáno na použití pøístroje BACTEC 460TB. Rozlišovací test BACTEC NAP (ρ-nitro-α-aminoacetyl-β-hydroxy-propiofenon) TB doporuèujeme používat s médiem BACTEC 12B k rychlému rozlišení komplexu TB (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum a M. microti) od jiných mykobakterií než M. tuberculosis (MOTT). Tento test byste mìli používat v souvislosti s bakteriální morfologií na nátìru a vlastnostmi množení v médiu BACTEC 12B. SHRNUTÍ A VYSVÌTLENÍ Médium BACTEC 12B neumožòuje pozorování morfologie kolonie, hodnota indexu rùstu (GI) však mùže být pro nìkteré druhy mykobakterií charakteristickým rysem. M. tuberculosis a M. bovis napøíklad vykazují pomalý rùst (zvýšení hodnoty denního indexu rùstu je dvojnásobné až trojnásobné), jiné mykobakterie (bacily MOTT) mohou vykazovat denní nárùst až desetinásobný. Namnožení M. tuberculosis v médiu BACTEC 12B lze vizuálnì prokázat pøítomností skvrn nebo shlukù v prùzraèném médiu. Jiné mykobakterie se množí po velmi malých èástech a mohou zpùsobit, že médium bude mírnì zakalené. Nátìry vytvoøené z pozitivní lahvièky (GI = 100 nebo více) mohou prokázat typ mykobakterií, který se v médiu množí. Spirálovité øetìzce a shluky jsou charakteristickým rysem pro M. tuberculosis (M. bovis a M. kansasii mohou také tvoøit øetìzce). Ostatní mykobakterie mají odlišnou charakteristiku morfologie. Charakteristickým rysem pro M. avium/m. intracellulare je napøíklad vìtvení (dlouhé øetìzce bacilù). Test BACTEC NAP dále napomáhá rychlému rozlišení nejdùležitìjšího druhu mykobakterií M. tuberculosis. Test není závislý na testu s niacinem. Vzorek aktivnì se množící kultury inokulujte do lahvièky NAP, která obsahuje disk s 5 µg NAP. Lahvièku spolu s kontrolou inkubujte a rùst v ní v pøítomnosti NAP monitorujte na pøístroji systému BACTEC 460TB. Analýza denního odeètu indexu rùstu bìhem následujících 3 až 5 dní pomáhá rozlišit komplex TB od jiných mykobakterií. ZÁSADY POSTUPU NAP (ρ-nitro-α-aminoacetyl-β-hydroxy-propiofenon), pøechodná slouèenina v syntéze chloramfenikolu, témìø úplnì potlaèuje mykobakterie náležející do komplexu TB (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum a M. microti), avšak jiné mykobakterie vykazují nízký stupeò potlaèení nebo k potlaèení u nich nedochází. Pokud je množení mykobakterií v pøítomnosti NAP potlaèen, dojde také k potlaèení produkce 14 CO 2, což se projeví nulovým zvýšením nebo snížením GI. Tohoto ovlivnìní GI se využívá jako nástroje pro identifikaci. REAGENTY Lahvièky sady BACTEC NAP obsahují papírový disk s touto aktivní složkou: ρ-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiofenon 5 µg Varování a bezpeènostní opatøení Pro diagnostiku in vitro. Výrobek obsahuje suchou pøírodní pryž. V klinických vzorcích se mohou nacházet patogenní mikroorganismy vèetnì virù hepatitidy a HIV. Z toho dùvodu dodržujte pøi práci se vším, co je kontaminováno krví nebo jinými tìlními tekutinami, standardní bezpeènostní opatøení 1-4 a pøedpisy své instituce. Lahvièku rozlišovacího testu NAP NEPOUŽÍVEJTE, pokud jsou na ní viditelné známky kontaminace, ztráty zbarvení nebo pokud neobsahuje disk. Vlhkost, zejména pøi vyšších teplotách, zpùsobuje rychlé opotøebení NAP. Vždy dodržujte aseptické postupy a zavedená bezpeènostní opatøení, abyste zabránili vzniku mikrobiální infekce. 5 Vždy pracujte v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Nedotýkejte se disku. Po použití sterilizujte nádoby pro vzorky a další kontaminovaný materiál v autoklávu. Pøed použitím každou lahvièku prohlédnìte a zkontrolujte, zda není poškozená. Lahvièky, které vykazují poškození, pøed inokulací zlikvidujte. Ve výjimeèných pøípadech mùže pøi snímání zaklápìcího víèka nebo pøi manipulaci dojít k prasknutí sklenìné lahvièky nebo ke zlomení krèku. Ve výjimeèných pøípadech mùže také dojít k nedostateènému uzavøení lahvièky. V obou pøípadech mùže obsah lahvièek vytéci, zejména pøi pøevrácení lahvièky. Dojde-li po inokulaci lahvièky k úniku nebo rozlití jejího obsahu, postupujte opatrnì, protože se zde mohou nacházet patogenní organismy nebo látky. Pøed likvidací všechny inokulované lahvièky sterilizujte v autoklávu.

2 Pozitivní kultivaèní lahvièky pro subkultivaci nebo barvení: Pøed odebráním vzorkù je nezbytné odstranit plynné metabolity mikroorganismù. Vždy dodržujte aseptické postupy a zavedená bezpeènostní opatøení, abyste zabránili vzniku mikrobiální infekce. Testy provádìjte v odpovídajících, biologicky bezpeèných podmínkách v místnosti s dostateènou ventilací podle doporuèení CDC. 5 Pøi manipulaci se vzorky a kulturami potenciálních patogenù použijte vhodný ochranný plášt, masku a rukavice. Dodržujte doporuèení CDC a OSHA. Možný únik organismù bìhem inokulace lze minimalizovat pomocí injekèních støíkaèek s trvale nasazenými jehlami nebo bezpeènì pøipevnìnými hroty Luer-Lok. Toxicita této slouèeniny nebyla studována. Pokud ji používáte, dodržuje odpovídající pøedpisy, abyste zabránili pùsobení okolního prostøedí. Pokyny ke skladování Lahvièky BACTEC NAP skladujte v chladicím zaøízení pøi teplotì 2 8 C mimo dosah sluneèního záøení. Chraòte pøed horkem nebo vysokými teplotami, jelikož NAP je termolabilní. Datum expirace se vztahuje na neotevøenou lahvièku uskladnìnou podle uvedených pokynù. ODBÌR VZORKÙ Aktivnì se množící kultury v médiu BACTEC 12B lze použít pro test NAP. Testovací kultury by mìly být èisté a nemìly by být kontaminované nemykobakteriálními látkami. POSTUPY Dodané materiály: deset lahvièek s diskem NAP. Potøebný materiál, který není souèástí dodávky: pøístroj BACTEC 460TB, médium BACTEC 12B, tuberkulinová støíkaèka s trvale nasazenou jehlou, dezinfekèní roztok, alkoholem napuštìné krytí a øedící roztok BACTEC. Podrobné informace naleznete v pøíruèce pro systémové produkty a postupy BACTEC 460TB (MA-0029). Pokud lahvièka s médiem BACTEC 12B vykazuje GI o hodnotì 10 nebo více, provádìjte test lahvièky dennì, dokud GI nedosáhne hodnoty Ujistìte se, že provedením Gramova barvení nebo subkultivace nedošlo ke kontaminaci kultury. Homogenizujte kulturu tuberkulinovou støíkaèkou (s trvale nasazenou jehlou) a pomocí stejné støíkaèky aseptickým postupem pøeneste 1 ml do lahvièky s NAP. Okraj lahvièky s NAP a kontrolní lahvièky (s pùvodní kulturou) otøete odpovídajícím dezinfekèním prostøedkem a poté je oèistìte tampónem napuštìným alkoholem. Ihned proveïte v pøístroji BACTEC test obou lahvièek za úèelem vypuštìní 5 10 % CO 2. Výsledku odeètu si nevšímejte. Inkubujte pøi teplotì 37 C ± 1 C nebo pøi optimální teplotì a testujte každý den po dobu následujících 2 až 6 dnù. Zaznamenejte si hodnotu denního indexu rùstu u lahvièky s NAP a pùvodní lahvièky, která slouží jako kontrola. Pokud bude hodnota GI vyšší než 100, naøeïte kulturu pøed inokulací lahvièky s NAP takto: GI žádné øedìní GI ,8 ml do nové lahvièky s médiem BACTEC 12B GI ,6 ml do nové lahvièky s médiem BACTEC 12B GI ,4 ml do nové lahvièky s médiem BACTEC 12B GI ,3 ml do nové lahvièky s médiem BACTEC 12B GI ,2 ml do nové lahvièky s médiem BACTEC 12B GI 999 déle než 0,1 ml do nové lahvièky s médiem BACTEC 12B 1 den Rùst kultury nesmí pøesáhnout hranièní hodnotu GI (999). Pokud rùst kultury tuto hodnotu pøekroèí, provádìjte subkultivaci v lahvièce s médiem BACTEC 12B, inkubaci a test dennì, dokud nedosáhnete požadované hodnoty GI. Pokud testujete rùst na pevném médiu, vytvoøte suspenzi setøením nìkolika reprezentativních kolonií a emulgací tìchto kolonií ve zkumavce se sterilní vodou nebo øedícím roztokem BACTEC. Upravte zakalení suspenze tak, aby vyhovovalo McFarlandovì normì è. 1. Inokulujte 0,1 ml této suspenze do lahvièky s médiem BACTEC 12B. Inkubujte a testujte dennì za použití pøístroje systému BACTEC 460TB. Jakmile dosáhne GI hodnoty , postupujte podle níže uvedených pokynù. KONTROLA KVALITY Do každého testu byste pro zajištìní pøesnosti postupu testu mìli zaøadit následující pozitivní a negativní kontroly. M. tuberculosis, H37Rv ATCC è M. kansasii ATCC è M. intracellulare ATCC è M. avium ATCC è *Podrobné informace naleznete v pøíruèce pro systémové produkty a postupy BACTEC 460TB (MA-0029). Po uplynutí data expirace lahvièky NEPOUŽÍVEJTE. Lahvièky, které vykazují známky popraskání nebo jiného poškození, NEPOUŽÍVEJTE a odpovídajícím zpùsobem je zlikvidujte. Souèástí každé sady NAP jsou certifikáty kontroly jakosti. Certifikáty kontroly jakosti uvádìjí testovací organismy používané pro tento typ výrobku. Souèástí rozpisu pro denní režim by mìly být testy testovacích lahvièek (BACTEC Performance Test Kit) na pøístroji BACTEC. Pokud odeètete nízkou hodnotu, pøestože test testovacích lahvièek probìhl správnì, došlo pravdìpodobnì k chybì na pøístroji (viz pøíbalový leták BACTEC PTK, PP-046JAA). 2

3 Požadavky na kontrolu kvality musí být splnìny v souladu s platnými místními, státními a federálními zákony a požadavky na akreditaci a se standardními postupy kontroly kvality vaší laboratoøe. Doporuèujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provádìní kontroly kvality v pøíslušných smìrnicích NCCLS a pøedpisech CLIA. INTERPRETACE VÝSLEDKÙ Denní hodnota GI u kontrolní lahvièky (lahvièky s pùvodní kulturou) se bude zvyšovat. U testovací lahvièky NAP závisí snížení èi zvýšení na druzích pøítomných mykobakterií. Snížení nebo nulová zmìna hodnoty GI udává pøítomnost komplexu TB; zvýšení hodnoty GI udává pøítomnost bacilù MOTT. Níže uvedená kritéria se vztahují na témìø všechny mykobakterie v lahvièce NAP: Komplex TB (M. tuberculosis, M. bovis, M. microti, M. africanum) dvì po sobì jdoucí významná snížení hodnoty GI po inokulaci, mírné nevýznamné zvýšení hodnoty GI v prvních dvou dnech a poté snížení nebo nulové zvýšení hodnoty GI. Bacily MOTT denní odeèet hodnoty GI se zvýší na více než 400 bìhem ètyø dní, mírné snížení nebo nulové zvýšení bìhem prvního, druhého nebo tøetího dne po inokulaci a poté dvì po sobì jdoucí denní významná zvýšení po druhém dni, Významným zvýšením nebo snížením se myslí 20% nebo vìtší zmìna z jednoho dne na druhý. OMEZENÍ POSTUPU Oddìlení komplexu TB od bacilù MOTT pomocí rozlišovacího testu BACTEC NAP TB je možné pouze u izolovaných, èistých kultur. Smíšená kultura komplexu TB a bacilù MOTT zpùsobí zvýšení hodnoty GI a oznaèení pouze pøítomnosti bacilù MOTT. Kontaminace jinými nemykobakteriálními organismy mùže mít také za následek falešné zvýšení hodnoty GI, pokud kontaminant utilizuje substrát. Pohledem zkontrolujte, zda nejsou lahvièky NAP viditelnì kontaminovány a/nebo zakaleny. Nátìr pro AFB z lahvièky NAP v pøípadì zvyšující se hodnoty GI napomáhá pøi potvrzování pøítomnosti bacilù MOTT a TB nebo kontaminujících bakterií. Mùže se stát, že kmeny M. kansasii budou potlaèeny NAP do takové míry, že dojde k nesprávnému odeètu výsledkù. Bude nutné provést další rozlišení na základì dalších metod. Vzhledem k povaze biologického materiálu v médiích a nutné variabilitì organismù by se mìl uživatel seznámit s možnými variabilními výsledky pøi prokazování urèitých organismù. OÈEKÁVANÉ HODNOTY Doba možného zaznamenání výsledkù mùže být 2 až 6 dní v závislosti na druhu mykobakterií. Výsledky zaznamenejte pouze v pøípadì, že dosažený výsledek je jednoznaèný. Pokud se hodnota GI nezmìní, identifikace komplexu TB by mìla probìhnout minimálnì za 4 dny. Prùmìrná doba dokonèení testu NAP je 4 dny. 6,7-11 Výsledky testu NAP je nutné podpoøit charakteristickými rysy a morfologií AFB na základì barvení na acidorezistenci. Nátìr mùže také oznaèovat pøítomnost smíšených kultur nebo kontaminaci. ÚÈINNOST Aèkoliv lze výsledky vìtšiny testù NAP snadno interpretovat, vyžadují nìkteré testy pro prokázání jednoznaèného výsledku další inkubaci. To je zvláštì dùležité u mykobakterií, které jsou èásteènì potlaèeny NAP a které v pøítomnosti NAP vykazují pomalé nebo zpoždìné zvýšení hodnoty GI nebo delší dobu prodlevy (napø. nìkteré kmeny m. kansasii, m. gastri, m. szulgai, m. terrae a m. triviale). Všechny bacily MOTT studované bìhem vyhodnocení NAP prokázaly zvýšení hodnoty GI bìhem 5 až 6 dnù. 5,7 Nìkteré kmeny m. kansasii však mohou být potlaèeny NAP více než obvykle a mùže se stát, že test je nesprávnì identifikuje. Pro získání správných výsledkù je nezbytná inkubace pøi optimální teplotì. Mykobakterie jako jsou napø. m. chelonae a m. marinum, které se množí pøi teplotì nižší než 37 C, a m. xenopi, které se množí pøi vyšší teplotì, mohou vykazovat nesprávné výsledky, pokud test provedete pøi teplotì 37 C. V pøípadech, kdy si nejste optimální teplotou inkubace jisti, proveïte test pøi rùzných teplotách. V pøedchozích studiích byla celková citlivost a specifiènost testu vyhodnocena 98 99%. 7,10 DOSTUPNOST Kat. èíslo Popis Rozlišovací sada BACTEC NAP TB, 5 µg NAP na lahvièku, 10 lahvièek v balení Médium BACTEC 12B, 4 ml, 100 kusù v balení. ODKAZY 1. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA,

4 6. Gross, W.M. et al. Radiometric selective inhibition tests for differentiation of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, and other mycobacteria. J. Clin. Microbiol., 21: , Laszlo, A. et al. Evaluation of a rapid radiometric differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with ρ-nitro- α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenone. J. Clin. Microbiol., 19: , Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Meeting, St. Louis, MO Morgan, M.A. et al. Evaluation of the ρ-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenone differential test for identification of Mycobacterium tuberculosis complex. J. Clin. Microbiol., 21: , Siddiqi, S.H. et al. Rapid radiometric methods to detect and differentiate Mycobacterium tuberculosis / M. bovis from other mycobacterial species. Amer. Rev. Respir. Dis., 130: , Stager, C.E. et al. Identification of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens by direct inoculation of the BACTEC NAP Test. Abstract C267, A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, NV,

5 5

6 B Becton, Dickinson and Company Benex Limited 7 Loveton Circle Rineanna House Sparks, MD USA Shannon Free Zone Shannon, County Clare, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.