EUROArray. laboratorní diagnostiku. Praha RNDr. Tereza Gürtlerová. Podtitul, název produktu

Transkript

1 EUROArray DNA Prezentace mikročipy titul pro rutinní laboratorní diagnostiku RNDr. Tereza Gürtlerová Praha

2 Přehled EUROArray System Princip provedení testu Přehled dostupných kitů EUROArray HLA-DQ2/DQ8 EUROArray HLA-B27 Direct Shrnutí

3 EUROIMMUN EUROArray System 3 nebo 5 čipů na sklíčko Nutná pouze 1 negativní kontrola na celý běh CE IVD certifikace Plně automatické, standardizované vyhodnocení Možnost připojení na LIS

4 EUROIMMUN EUROArray System Komplexní sada kontrol umožňuje ověření správnosti testu pro každý vzorek

5 Přehled EUROArray System Princip provedení testu Přehled dostupných kitů EUROArray HLA-DQ2/DQ8 EUROArray HLA-B27 Direct Shrnutí

6 Provedení testu workflow vzorek DNA 1. PCR 2. Hybridizace 3. Skenování, automatické vyhodnocení a interpretace výsledků výsledek

7 EUROArray Direct Analýza vzorku přímo z plné krve izolace DNA vzorek DNA EUROArray Direct QIAamp DSP DNA Podtitul, Blood název Mini produktu Kit (QIAGEN) DNA whole blood kit S CE IVD (Fujifilm) Extrakce pomocí reagentů 1 a 2, které jsou součástí direct kitů 80 min / 40 vzorků => 2 min / vzorek Kč / vzorek < 20 min / 40 vzorků => < 30 vteřin / vzorek žádné další výdaje

8 EUROArray Direct Analýza vzorku přímo z plné krve 5 µl krve Připraveno pro PCR

9 PCR ready to use PCR reagencie Validace na nejpoužívanější cyklery

10 Hybridizace Standardizovaná inkubace využívající prověřenou technologii TITERPLANE

11 Skenování, analýza dat, interpretace

12 Celková doba vzorek DNA? Pracovní čas (40 vzorků) Celkem (včetně inkubace) Podtitul, název < 10 produktu min 60 min PCR < 20 min 80 min Hybridizace < 10 min 10 min < 40 min 2 h 30 min < 1 min / vzorek (bez izolace) Skenování a vyhodnocení

13 Přehled EUROArray System Princip provedení testu Přehled dostupných kitů EUROArray HLA-DQ2/DQ8 EUROArray HLA-B27 Direct Shrnutí

14 asociované s HLA EUROArray - portfolio Produkt Indikace Katalogové číslo HLA-DQ2/DQ8 Celiakie MN 5310-#### HLA-B27 Direct Ankylózující spondylitida MN 5110-####-V HLA-B57:01 Direct Přecitlivělost na Abacavir MN 5210-####-V HLA-Cw6 Lupénka MN 5410-#### ostatní Produkt Indikace Katalogové číslo FII/FV/MTHFR Direct Trombózy MN 58##-####-V HFE Direct (2 nebo 4 SNP) Hemochromatóza MN 55##-####-V APOE Direct Alzheimerova choroba, hyperlipoproteinémie III. typu MN 5710-####-V HPV (30 HPV; low-, high risk) Lidský papilomavirus MN 2540-#### STD (až 11 patogenů na 1 čipu) Sexuálně přenosné choroby MN 2830-####-#

15 Přehled EUROArray System Princip provedení testu Přehled dostupných kitů EUROArray HLA-DQ2/DQ8 EUROArray HLA-B27 Direct Shrnutí

16 Celiakie EUROArray HLA-DQ2/DQ8 Chronické onemocnění sliznice tenkého střeva způsobené nesnášenlivostí lepku Asociováno s HLA molekulami II. třídy DQ2 a DQ8 Výskyt Parametr Populace Pacienti s celiakií HLA-DQ2/DQ8 ~20-40% ~99% Velmi vysoká negativní prediktivní hodnota ( 100%)

17 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 HLA-DQ2 a HLA-DQ8 - heterodimery skládající se z a podjednotek Detekce pomocí následujících genů: DQB1* 02 DQA1* 05 nebo DQA1* 02 DQ2.5 / DQ2.2

18 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 HLA-DQA1 alely HLA- DQB1 alely

19 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 Alelické a funkční skupiny alel HLA asociovaných s celiakií Alelická skupina Funkční skupina (P-group) Běžné alely DQA1*02 NEDEFINOVÁNO DQA1*02:01 DQA1*03 DQA1*05 DQA1*03:01P DQA1*05:01P DQA1*03:01 DQA1*03:02 DQA1*03:03 DQA1*05:01 DQA1*05:03 DQA1*05:05 DQA1*05:08 DQA1*05:09 Vzácné alely DQA1*05:07 DQA1*05:11 NEDEFINOVÁNO DQA1*05:02 DQA1*05:04 DQA1*05:10 ESPGHAN guidelines: DQB1*03:02 + DQA1*03:01 = DQ8 Dle řady studií zabývajících se asociací HLA DQ molekul s celiakií se ukazuje, že alfa podjednotka haplotypu DQ8 může být tvořena jakoukoliv alelou patřící do funkční skupiny DQA1*03:01P

20 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 HLA-DQ2.2 negativní HLA-DQ2.5 pozitivní HLA-DQ8 negativní 3 ³The beta-subunit of DQ8 (HLA-DQB1*03:02) could not be clearly detected in this case due to the positive result for DQB1*02. HLA-DQA1*03:01, which solely represents the alpha-subunit of DQ8 according to the ESPGHAN guidelines (Husby et al., J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr Jan;54(1): ), was not detected in the sample. The presence of DQ8 according to this definition can be ruled out. HLA-DQA1*03:02 and/or HLA-DQA1*03:03, however, were detected in the sample. In many studies that investigated the connection between the presence of HLA-DQ characteristics and coeliac disease, the alleles HLA-DQA1*03:01/02/03 were not differentiated and therefore all evaluated as alpha-subunit of DQ8. The presence of DQ8 according to this extended definition cannot entirely be ruled out in this case.

21 EUROArray HLA-DQ2/DQ8 Nový EUROArray HLA-DQ2/DQ8-h Direct EUROArray HLA-DQ2/DQ8 Direct system (izolace DNA nebo přímo z krve) Detekce homozygotního genotypu pro DQ2.2 a DQ2.5 heterodimery Detekce alel: - DQA1*02, DQA1*03:01, DQA1*03:02/03, DQA1*05, - DQB1*02, DQB1*03:02 Doplňující detekce non-cd alel: - DQA1*01/04/06 - DQB1*02/03/04/05/06 Pouze izolace DNA Neumí rozlišit mezi homozygotním a heterozygotním genotypem pro DQ2.2 a DQ2.5 heterodimery Vždy přímá detekce DQ8 beta podjednotky, nevyužívá se vazebné nerovnováhy => Zvýšení specificity/senzitivity pro DQ8 Ve vzácných případech není možná jednoznačná detekce DQ8 (využívá vazebné nerovnováhy )

22 EUROArray HLA-DQ2/DQ8-h Direct Detekce alel, které nejsou asociované s celiakií umožňuje rozlišit mezi homozygotním a heterozygotním genotypem pro DQ2.2 a DQ2.5 heterodimery Zvýšená prediktivní hodnota rozvoje celiakie: u homozygotů je 2-5x vyšší riziko rozvoje onemocnění ve srovnání s heterozygoty

23 EUROArray HLA-DQ2/DQ8-h Direct Alely detekující DQ α-podjednotky Nové:Non-CD asociované alely DQ α-podjednotek Alely detekující DQ β-podjednotky Nové:Non-CD asociované alely DQ β-podjednotek

24 EUROArray HLA-DQ2/DQ8-h Direct

25 Přehled EUROArray System Princip provedení testu Přehled dostupných kitů EUROArray HLA-DQ2/DQ8 EUROArray HLA-B27 Direct Shrnutí

26 EUROArray HLA-B27 HLA-B*27 Součást MHC komplexu - HLA I. třídy (chromozom 6) Nalezeno zatím 132 alel od HLA-B*27:01 po HLA-B*27:106, kde HLA-B*27:22 je sekvenační chyba (= HLA-B*27:06) Asociace s ankylozující spondylitidou a dalšími spondyloartritidami Nemoc postihuje cca 0,5-1% populace Relativní frekvence Parametr Populace Pacienti s ankylózující spondylitidou Pacienti s jinými spondyloartritidami HLA-B27 ~ 10 % ~ 90 % %

27 EUROArray HLA-B27 Vlastnosti EUROArray HLA-B27 kitu: Detekuje všechny HLA-B*27 alely (exon 2, exon 3, nebo obojí) Upozorní na možný výskyt HLA-B*27:06 a -B*27:09 subtypů, které nejsou asociované s ankylozující spondylitidou (běžné subtypy v jihovýchodní Asii a Itálii (Sardinie)) (žádný PCR produkt v exonu 3 s HLA-B*27:06 a -B*27:09 ) zvýšená specificita diagnózy: ankylózující spondylitida

28 EUROArray HLA-B27 pozitivní negativní Exon 2 Exon 3 pozitivní pozitivní, ale s možným výskytem HLA-B*27:06 nebo HLA-B*27:09 Exon 2 Exon 3

29 Přehled EUROArray System Princip provedení testu Přehled dostupných kitů EUROArray HLA-DQ2/DQ8 EUROArray HLA-B27 Direct Shrnutí

30 Shrnutí Produkt Indikace Katalogové číslo HLA-DQ2/DQ8 Celiakie MN 5310-#### HLA-B27 Direct Ankylózující spondylitida MN 5110-####-V HLA-B57:01 Direct Přecitlivělost na Abacavir MN 5210-####-V HLA-Cw6 Podtitul, Lupénka název produktu MN 5410-#### ready to use PCR komponenty CE-IVD certifikace Plně automatické, standardizované vyhodnocení a interpretace výsledků Možnost elektronické archivace dat Připojení na LIS Žádné další náklady na izolaci s direct kity Množství integrovaných kontrol zajišťujících správnost výsledku Doposud 100% úspěšnost v EHK (DQ2/DQ8, HLAB27, FII/FV) Pružná komunikace se společností EUROIMMUN

31 DEMO lab

32 Děkuji za pozornost!