Čeleď: Pasteurellaceae. Rod: Pasteurella

Transkript

1 Praktikum č. 12: Mikrobiologická diagnostika veterinárně významných zástupců čeledí Pasteurellaceae (r. Pasteurella, Mannheimia, Actinobacillus, Haemophilus, Taylorella), Vibrionaceae (r. Vibrio, Plesiomonas) a Aeromonadaceae (Aeromonas) Cíle: 1. Seznámit se s morfologií a kultivačními vlastnostmi veterinárně významných zástupců uvedených čeledí. 2. Naučit se obecné postupy bakteriologické diagnosticky infekcí vyvolaných pasteurelami, aktinobacily, hemofily a aeromonádami. 3. Naučit se postup diagnostiky infekční metritídy klisen. Čeleď: Pasteurellaceae Rod: Pasteurella P. multocida - subsp. gallicida - subsp. multocida - subsp. septica Tento druh se vyskytuje téměř u všech teplokrevných zvířat kde vedle častých latentních infekcí sliznic dýchacích cest vyvolává různé klinické formy onemocnění. Tabulka č. 14: Nejvýznamnější onemocnění vyvolávané typy Pasteurella multocida P. multocida/typ Hostitel klinický obraz onemocnění Skot plicní pasterelóza (shipping fever), jeden z původců enzootické pneumonie telat, ojediněle mastitis Typ A Ovce Pneumonie, mastitis Prase Pneumonie Drůbež Cholera Králíci Infekční rýma Další druhy Pneumonie po stresu Typ B Skot, buvoli Hemoragická septikémie (Asie) Typ D Prase Pneumonie, atrofická rinitis Typ E Skot, buvoli Hemoragická septikémie (Afrika) Vyšetřovaný materiál - stěry sliznic, výtoky, orgány, krev. Mikroskopické vyšetření - roztěr nebo otisk barvíme metylénovou modří (pasteurely z vyšetřovaného materiálu se barví výrazněji na koncích tyčinek jedná se o tzv. bipolární tinkci. Kultivační vyšetření: přímá kultivace na MPKA, inkubace při 37 o C po dobu h. Pasáž kontaminovaného materiálu: Suspenzi vyšetřovaného materiálu pasážujeme přes laboratorní myš (i.p. 0,5 ml) a z orgánů provedeme reizolaci pasteurel. Biochemické vyšetření: viz. tabulka č. 77

2 Tabulka č. 15: Přehled zástupců rodu Pasteurella s menším významem Druh Hostitel Význam P. aerogenes Prase Komenzál střeva, sporadický podíl na abortech P. anatis Kachny Komenzál střeva P. avium, Drůbež Komenzál horních dýchacích cest P. volatium, P. caballi Koně Komenzál horních dýchacích cest, příležitostně respiratorní infekce a peritonitídy P. canis Psi Komenzál dutiny ústní, příležitostně infikuje rány P. dagmatis Psi, kočky Komenzál dutiny ústní a nasofarynxu, příležitostně infikuje rány P. gallinarum Drůbež Komenzál horních dýchacích cest, příležitostně respiratorní infekce P. lymphangitidis Skot Ojediněle lymfangitídy P. mairii Prase Ojediněle aborty P. pneumotropica Hlodavci Komenzál horních dýchacích cest, ojediněle pneumonie, abscesy poranění z pokousání P. stomatis Psi, kočky Komenzál horních dýchacích cest P. testudinis Želvy Sporadicky abscesy Rod: Mannheimia Mannheimia haemolytica pneumonie skotu a ovcí (telata, jehňata) septikémie jehňat (i starších) latentní infekce sliznice nasofaryngu skotu a ovcí Tabulka č. 16: Diferenciace biotypů Mannheimia haemolytica Vlastnost biotyp A biotyp T arabinóza + - xylóza + - trehalóza - + citlivost k PNC + - patogenita pneumonie skotu a ovcí, septikémie novorozených jehňat septikémie starších jehňat (více než 3 měsíce) latentní infekce + - Tabulka 16a: Diferenciace P. multocida a M. haemolytica Znak M. haemolytica P. multocida Hemolýza na MPKA + - Růst na MacConkey agaru + - Tvorba katalázy + + Tvorba indolu - + Tvorba ureázy - - Ornitíndekarboxyláza - + Laktóza + - Maltóza + - Glukóza + +

3 Rod: Actinobacillus A.equuli, A.capsulatus, A.hominis, A.lignieresii, A.pleuropneumonie, A.muris, A.rossii, A.seminis, A.suis, A.ureae A. lignieresii Je to komenzál dutiny ústní a původce aktinomykózy měkkých tkání (jazyk, mízní uzliny) skotu a ovcí, jen zřídka u koní, psů a koček, ojediněle onemocní i člověk. A. equuli komenzál střeva zdravých koní izolován při ochromě hříbat (early paresis) aborty klisen enteritídy prasat, telat artritídy prasat septikémie selat A. suis septikémie a pneumonie (sající selata) subakutní infekce starších selat - odstávčat (arthritis, periarthritis, endocarditis, abscesy) u ostatních druhů dom. zvířat se zřídka zjišťují infekce koní (pneumonie) A.pleuropneumoniae původce infekční pleuropneumónie prasat A. capsulatus vyvolává arthritídy králíků A. seminis vyvolává v Austrálii, na Novém Zélandě a Jižní Africe infekční epididimitídy beranů Vyšetřovaný materiál - punktáty, tkáně uhynulých zvířat, bioptáty a pod. Mikroskopické vyšetření - průkaz drůz (granul) při podezření na aktinomykózu. Kultivační průkaz - přímá izolace na MPKA, u A. pleuropneumoniae se půdy obohacují o růstové látky a antibiotický suplement. U některých druhů je vhodné v atmosféře zvýšit obsah oxidu uhličitého Tabulka č. 17: Diferenciace významných zástupců rodu Actinobacillus Druh hemolýza CAMP růst na test MCA oxidáza ureáza laktóza manit trehalóza A.lignieresii A.equuli v - + v A.suis v A.pleuropneumoniae v A.capsulatus Vysvětlivky: v - variabilní znak, MCA - Mc Conkeyův agar (upraveno pro výuku) 79

4 Rod: Haemophilus Tabulka č. 18: Význam jednotlivých druhů hemofilů Hostitel Haemophilus Onemocnění Prase parasuis Glässerova choroba, polyserositídy a artritídy, sekundární pneumonie součást mikroflóry nosní dutiny Drůbež (+bažanti, krůty) paragallinarum Infekční rýma drůbeže, sinusitída, konjuktivitída Pes haemoglobinophilus Součást mikroflóry prepucia, vaginitídy a respiratorní infekce aphrophilus Komenzál farynxu Kočka felis Komenzál nazofarynxu, příležitostně respirační infekce Skot somnus 1. ISTME infekční septikemická trombotizující meningoencefalitída (syndróm ospalosti) 2. respiratorní infekce - pneumónie, laryngitídy a tracheitídy (smíšené infekce s jinými bakteriémi) 3. arthritis, tendovaginitis 4. infekce reprodukčních orgánů, endometritídy, aborty, výskyt v semeni býků a na sliznicích reprodukčních orgánů Ovce ovis Bronchopneumónie agni Septikémie, pneumónie, artritídy jehňat somnus Obdobné infekce jako u skotu Ryby piscium Vředovitá choroba pstruhů (vředovitý zánět tlamy a ploutví) HEMOFILŮ (obecně) Vyšetřovaný materiál. K vyšetření odebíráme stěry sliznic, změněné tkáně. Odebraný materiál chráníme zejména před vysýcháním v transportním médiu (Amiesova půda) a dopravíme ho co nejdříve k vyšetření (do 24 hodin). Přímé mikroskopické vyšetření. V obarvených otiskových preparátech a roztěrech hledáme drobné gramnegativní kokobacily, někdy i vlákna. Kultivační vyšetření. Hemofily s vyjímkou druhu H.somnus vyžadují v kultivačních médiích přítomnost růstových faktorů X (hemin) a V (NAD). Faktor X je termostabilní a je přítomný v dostatečném množství v 5% MPKA. Faktor V je koncentrován uvnitř červených krvinek a je citlivý NADázám, které se v krvi běžně vyskytují. Při přípravě čokoládového krevního agaru se V faktor uvolní z krvinek do média, NADázy se zahřátím média inaktivují a termostabilní X faktor zůstává zachován. Vedle čokoládového krevního agaru lze ke kultivaci využít satelitního typu růstu hemofilů na MPKA v blízkosti stafylokokové kultury (Staphylococcus epidermidis). Naočkovaná média inkubujeme při 37 o C za aerobních nebo mikroaerofilních podmínek ( v 10% CO 2 ) po dobu 2-4 dnů. U některých druhů může být růst patrný již po 24 hodinové inkubaci. Rod: Taylorella Taylorella equigenitalis Je původcem infekční metritídy klisen (CEM- contagius equine metritis). Průvodními příznaky infekce jsou endometritídy, vaginitídy, cervicitídy. U klisen a zejména hřebců jsou zjišťovány časté latentní infekce. 80

5 Vyšetřovaný materiál. Od klisen pro vyšetření získáváme tamponové stěry z fossa glandis a krčku děložního. Od hřebců získáváme výtěry uretry, fossa glandis penis, prepucia a vzorek preejakulační tekutiny. Po odběru se provádí okamžitá kultivace médií nebo se vzorek vkládá do transportního média (Amiesova půda). Vzorky kultivujeme na čokoládový agar s antibiotickým suplementem (streptomycin nebo amphotericin B). Půdy inkubujeme za mikroaerofilních podmínek (95% N 2, 5% CO 2 ) při 37 o C, po dobu 4 dnů. Identifikace. Šedobílé drobné kolonie mají průměr 1-1,5 mm, po obarvení podle Grama zjišťujeme přítomnost gramnegativních pleomorfních kokobacilů. Biochemické vlastnosti: oxidáza +, kataláza +, fosfatáza + Tabulka č. 19: Diferenciace vybraných druhů hemofilů a T.equigenitali Vlastnost H.somnus H.parasuis H.paragallinarum H.hemoglobinophilus Taylorella equigenitalis závislost na X faktoru závislost na V faktoru kataláza oxidáza růst při CO 2 + V hemolýza V indol V ureáza glukóza redukce NO sacharóza Poznámky: 81

6 Čeleď: VIBRIONACEAE Rod: Vibrio V. cholerae původce cholery člověka V. metschnikovi vyvolává akutní gastroenteritídy kura domácího roste aerobně na základních médiích (MPA) v průhledných koloniích, 2-4 mm v průměru, v S a R fázi biochemické vlastnosti: růst v bujónu s 3,5 % Na Cl + manit + indol + sacharóza + arabinóza - sorbitol - glukóza + xylóza - V. parahaemolyticus vyskytuje se v mořské vodě u pobřeží jihovýchodní Asie (brakické vody) je původcem alimentárních toxikoinfekcí lidí (po požití kontaminovaných syrových a polosyrových ryb), dovozem potravin se může dostávat toto onemocnění i do jiných oblastí Vyšetřovaný materiál - střevní obsah ryb, orgány, vzorky rybích výrobků Izolační postup : 4selektivní pomnožení ve slaném vizmut-sulfitovém bujonu (ph 9) při 42 o C po dobu 24h 4 selektivní izolace na thiosulfát - citrátovém agaru se žlučovými solemi (ph 8,4) nebo na vizmut-sulfitovém agaru s fenolovou červení Rod : Plesiomonas Plesiomonas shigeloides 4 je izolován z povrchových vod, střeva ryb a jiných vodních živočichů 4 je prokazován i ve výkalech různých druhů savců např. koček, psů a opic (patogenita není zcela jasná) 4 u člověka byl zaznamenán jako příčina průjmů

7 Čeleď: Aeromonadaceae Rod: Aeromonas POHYBLIVÉ AEROMONÁDY: A. hydrophila, A. caviae, A. sobria, A. media, A. allosacharophila, A. encheleia, A. trota, A. jandaei, A. veronii, A. schubertii Pohyblivé aeromonády jsou ubikvitární mikroflórou vody a ryb, patogenní kmeny druhu např. A.hydrophila vyvolávají choroby především u chladnokrevných zvířat: 4 infekční vodnatelnost kaprovitých po primární virové infekci 4 erytrodermatóza kaprů včetně okrasných koi kaprů 4 hemoragická septikémie ryb, žab ( red leg disease ) 4 ulcerativní stomatitídy hadů 4 ojedinělé celkové infekce teplokrevných zvířat (štěňata), aborty skotu 4 alimentární toxikoinfekce člověka NEPOHYBLIVÉ AEROMONÁDY: A. salmonicida A. salmonicida subsp. achromogenes, subsp. masoucida a subsp. smithia jsou atypické kmeny izolované z lososovitých ryb. A. salmonicida subsp. salmonicida Vyvolává furunkulózu lososovitých. Onemocnění se projevuje kožní ulcerací, katarální až hemoragickou enteritídou. Vyšetřovaný materiál - změněné tkáně, orgány, obsah střeva. Mikroskopické vyšetření imunofluorescence. Kultivační průkaz - MPKA (7% ovčí krve), Columbia agar, Furunculosis agar (Difco). Biochemické vlastnosti: optimální teplota růstu o C, oxidáza +, OF test +/+, rezistence k vibriostatikům, kataláza +, nitráty + Tabulka č. 20: Rozlišení A.hydrophila a A.salmonicida subsp. salmonicida Vlastnost A. hydrophila A. salmonicida subsp. salmonicida pohyb + - růst při 37 o C + - hydrolýza eskulinu