POUŽITÍ ÚVOD PRINCIP BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ

Transkript

1 POUŽITÍ BioNexia Troponin I Test je rychlé kvalitativní imunochromatografické stanovení lidského srdečního troponinu I (ctroponin I - ctnl) z plné krve, ze séra nebo plasmy a má přispět k včasné diagnostice infarktu myokardu (MI). ÚVOD Srdeční troponin (ctnl) je protein srdečního svalu s molekulární váhou 22.5 kda 1.cTroponin I je součástí komplexní trimerní jednotky společně s troponinem C a troponinem T. Trimer troponinu a tropomyozin tvoří hlavní komponentu regulačních procesů vápník-dependentní ATPasy v kosterním a srdečním svalu 2. Při poškození srdečního svalu např. infarktem dochází po 4-6 hodinách od prvních příznaků k uvolnění ctnl do krevního oběhu (podobně jako CK-MB). Zatímco CK-MB je detekovatelná v krvi jen cca 72 hodin po vzniku příhody, ctnl se v krvi nachází 6-10 dní a poskytuje tak možnost odhalení lehkých IM i v pozdější době. Na vysokou specificitu měření ctni poukazují vzestupy hladin u stavů po kardiologických operacích, po maratónském běhu a u otevřených hrudních traumat 3. Zvýšený Troponin byl zaznamenán také v jiných případech než je akutní infarkt myokardu (AMI), jako je angina pectoris, selhání činnosti srdce a při poškození myokardu při implantaci bypassu 4. Díky jeho vysoké senzitivitě a specifitě v tkáni myokardu, se v poslední době stal ctnl nejvíce používaným biomarkerem pro IM 5. BioNexia Troponin I Test je jednoduchý test, který využívá konjugovaných anti- ctnl protilátek a reagencií k výběrové detekci ctnl v plné krvi, v séru nebo plasmě. Minimální detekovatelná hladina ctnl je 1.0 ng/ml. PRINCIP BioNexia Troponin I Test je kvalitativní, membránový, imunologický test pro detekci ctnl v plné krvi, séru nebo plasmě. Na membráně je navázána reagencie v testovací zóně testu. Během testování Troponinu I v plné krvi, séru nebo plazmě reagují vzorek s dvěma specifickými anti ctnl protilátkami. Jedna protilátka umožňuje navázání na reagencii, druhá je barevně označená. Směs vzlíná po membráně. V testovací linii je komplex ctnl protilátkami navázán na nanesený reagent, takže se vytvoří červená linie. Přítomnost červené linie v testovací zóně znamená pozitivní výsledek. Pokud však vzorek ctroponin I neobsahuje, žádná viditelná barevná linie se v testovací oblasti neobjeví. Kromě toho se musí objevit červená linie v kontrolní zóně (C), nezávisle na koncentraci ctnl ve vzorku. Kontrolní linie představuje kontrolu provedení testu a indikuje, že bylo přidáno dostatečné množství vzorku a došlo k membránovému vzlínání. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Pouze pro profesionální in-vitro diagnostiku Nepoužívejte testovací kit po exspirační době Otevřete obal kazety těsně před použitím Nejezte, nepijte a nekuřte v místě testování Pokud je obal kazety porušený, kazetu nepoužívejte Likvidujte kontaminovaný materiál dle platných bezpečnostních přepisů. Vlhkost a vysoká teplota může nepříznivě ovlivnit výsledky Noste ochranný oděv (např. plášť), rukavice na jedno použití a ochranné brýle. SKLADOVÁNÍ A STABILITA Skladujte kazetu v původním obalu v pokojové teplotě (2-30 C/36-86 F). BioNexia Troponin I Test je stabilní v původním obalu do doby použití. Soupravu nezmrazujte. Nepoužívejte po exspirační době. SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKU BioNexia Troponin I Test se provádí z plné krve (žilní i kapilární) nebo ze séra či plasmy. Plná krev kapilární: Umyjte ruku pacienta teplou vodou a mýdlem nebo důkladně očistěte místo vpichu dezinfekčním prostředkem Masírujeme ruku směrem ke konečku prstu prostředníčku nebo prsteníčku, aniž byste se dotkli připraveného místa vpichu. Napíchněte koneček prstu sterilní lancetou. Setřete první kapku krve. Mněte ruku od zápěstí k dlani a pak k prstu tak, aby se vytvořila kulatá kapka krve v místě vpichu.

2 Odběr plné kapilární krve při použití kapátka: Odeberte vzorek krve naplněním kapátka (120 µl), vyvarujte se vzduchových bublin Zmáčknutím kapátka aplikujte krev do testovací jamky (S) Aplikace krve pacienta přímo z prstu Umístěte prst pacienta přímo nad testovací jamku (S) na testovací kazetě Nakapejte 2-3 celé visící kapky krve z vpichu na prstu přesně do testovací jamky (S). Prst pacienta může být umístěn nad testovací jamkou (S) tak, že se kapka dotýká testovací jamky. Zabraňte přímému kontaktu prstu s testovací jamkou OBECNÁ DOPORUČENÍ u stanovení séra a plasmy je nutné co nejdříve krev zpracovat, aby nedošlo k hemolýze Citrátová krev nebo krev s heparinem či EDTA může být použita pro extrakci plazmy Ke stanovení používejte jen čiré vzorky bez hemolýzy. Test provádějte co nejdříve po získání vzorku. Nenechávejte vzorky po delší dobu při pokojové teplotě. Vzorky séra a plasmy se mohou skladovat před testováním v chladu 2-8 C až 3 dny. Pro dlouhodobější skladování je možné vzorky zmrazit a uchovávat při - 20 C. Žilní krev může být skladována při 2-8 C, pokud bude test proveden do 2 dnů od odebrání vzorku. Vzorky plné krve nezmrazujte. Vzorky kapilární krve testujte ihned po odběru. Před testováním musí mít vzorky pokojovou teplotu. Mražené vzorky musí být před testováním dobře rozmrzlé a promíchané. Vzorky pro testování nezamrazujte vícekrát než jednou! Pokud je nutné vzorky transportovat, provádějte tak dle platných bezpečnostních předpisů, aby nedošlo k ohrožení biologickým materiálem. POSKYTOVANÝ MATERIÁL BioNexia Troponin I Test Kapátko (uvnitř sterilního balení) Lanceta (pouze pro plnou krev z prstu) Návod k použití POŽADOVANÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ SOUČÁSTÍ BALENÍ Zkumavky pro odebrání vzorků krve Centrifuga (plasma/sérum) Stopky PROVEDENÍ TESTU 1. Pokud je třeba ponechte testovací kazetu i vzorek určitou dobu při pokojové teplotě (15-30 C36-86 F), aby došlo k vyrovnání teplot s okolím. 2. Vyndejte testovací kazetu z obalu a poté použijte co nejdříve (nejlepších výsledků dosáhnete při použití do jedné hodiny). Testování provádějte na rovném a čistém povrchu. 3A Sérum/plasma ze žilní krve Držte dodávané kapátko svisle a kápněte 3 (120 µl) kapky séra nebo plasmy do aplikační jamky (S) BioNexia Troponin I Test. 3B Plná krev Držte dodávané kapátko svisle a kápněte 3 (120 µl) kapky plné krve do aplikační jamky (S) BioNexia Troponin I Test. 3C Kapilární krev Nakapejte do aplikační jamky (S) BioNexia Troponin I Test 2-3 kapky (120 µl) kapilární krve přímo z prstu pacienta nebo 120 µl z kapiláry. 4. Zapněte stopky a čekejte, až se objeví červená linie, výsledek odečtěte během 10 minut. Neodečítejte výsledky po více jak 20 minutách. Za negativní kontrolu jakosti je považováno jasné a čisté pozadí bez zabarvení. Podle správné laboratorní praxe by měly být společně se vzorky testovány i pozitivní a negativní kontrola.

3 INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Pozitivní výsledek*: Objeví se dvě zřetelné červené barevné linie. Jedna se objeví v kontrolní zóně - C a druhá v zóně testovací T. Negativní výsledek: Objeví se jen jedna červená linie v kontrolní zóně (C). Žádná zjevná ani slabá červená linie v testovací zóně (T). Chybný test: Kontrolní linie se neobjeví. V tomto případě je test neplatný, i když se objeví červená linie v testovací zóně (T). Nejčastějším důvodem je nedostatečné množství vzorku či nesprávné provedení testu. Opakujte test znovu s jinou testovací kazetou. Pokud by problém přetrvával, přestaňte soupravu používat a kontaktujte distributora. * Poznámka: Intenzita červené linie v testovací zóně (T) je závislá na koncentraci ctni ve vzorku. Proto je třeba jakýkoli odstín červené linie v testovací zóně (T) hodnotit jako pozitivní výsledek. KONTROLA JAKOSTI Jako vnitřní kontrolu provedení testu Bionexia Troponin I obsahuje kontrolní linii. Ta se objeví pouze v případě, že bylo přidáno odpovídající množství vzorku a chromatografie proběhla úspěšně. Kontrolní vzorky nejsou dodávány se soupravou, nicméně doporučujeme provádět pozitivní a negativní kontrolu pro ověření správného postupu a provedení testu. OMEZENÍ 1. BioNexia Troponin I je určen pouze k profesionální diagnostice in-vitro, ke stanovení ctroponinu I v plné krvi, séru nebo plasmě. Test umožňuje pouze kvalitativní detekci, určení kvantity nemůže být provedeno tímto testem. 2. BioNexia Troponin I pouze indikuje přítomnost ctnl ve vzorku a neměl by být považován za jediné kritérium diagnózy IM. 3. Z důvodu heterogenity komerčně dostupných materiálů může senzitivita testů mírně kolísat spolu s různými standartami přípravy. Nicméně vždy je dosažena citlivost 1.0 ng/ml Koncentrace pod 0,5 ng ctnl/ml nemohou být testem BioNexia Troponin I detekovány. 4. Stejně jako u všech diagnostických testů všechny výsledky musí být interpretovány společně s ostatními klinickými informacemi, které má lékař k dispozici. Negativní výsledek nikdy nevylučuje možnost IM. 5. Některé vzorky obsahují vysoké titry heterofylních protilátek nebo rheumatoidního faktoru mohou ovlivnit výsledky. Jestliže je výsledek pozitivní, další klinické hodnoty by měly být porovnány s ostatními klinickými informacemi. 6. Je možné, že test neukáže žádný výsledek u vzorků plné krve vysoce viskózních nebo u vzorků skladovaných delší dobu než 2 dny. V tomto případě doporučujeme opakovat test se vzorky plazmy či séra stejného pacienta.

4 OČEKÁVANÉ HODNOTY Výsledky BioNexia Troponin I byly porovnávány s dostupnými komerčními testy akreditovanými pro prodej v EU ostatních výrobců. Výsledky vykazovaly celkovou přesnost >99% testovaných vzorků. Vzorky bez ctnl konzistentně ukazovaly negativní výsledky s oběma testy. Vzorky s koncentrací ctnl většími než detekční limit ukazovaly pozitivní výsledek s oběma testy. Srovnání v rámci šarže a mezi šaržemi Srovnání v rámci šarže a mezi šaržemi bylo provedeno na třech různých šaržích. ctnl vzorky v koncentracích 0 ng/ml, 5 ng/ml, 10 ng/ml, 20 ng/ml a 40 ng/ml byly testovány na deseti testovacích kazetách z každé ze tří šarží. Vzorky byly správně identifikovány ve více jak 99 % testů. Reprodukovatelnost testů Reprodukovatelnost byla určována třemi nezávislými zkouškami na stejných 5 vzorcích: 0 ng/ml, 5 ng/ml, 10 ng/ml, 20 ng/ml a 40 ng/ml ctnl. Tři různé šarže BioNexia Troponin I testů byly testovány v průběhu 3 měsíců s použitím těchto vzorků. Vzorky byly správně identifikovány ve více jak 99%. Zkřížená reaktivita Séra obsahující známé objemy ctnl antigenu byla testována s 10,000 ng/ml kosterním Troponinem I, 2,000 ng/ml Troponin T, a 20,000 ng/ml srdečního Myosinu. Nebyla pozorována žádná zkřížená reaktivita, což ukazuje na vysoký stupeň specificity testů BioNexia Troponin I na Troponin I (ctnl). Test BioNexia Troponin I byl testován a nevykazoval žádné interference ve vzorcích obsahujících 110 µg/ml lidského albuminu, 6 mg/ml bilirubinu, 1 mg/ml hemoglobinu, 100 µg/ml cholesterolu a 10 µg/ml triglyceridů. Následující léky byly také testovány s použitím testů BioNexia Troponin I. Při koncentraci 50 µg/ml se také neobjevila žádná interference. Acetaminophen Chlordiazepoxid Metoprolol Tartrat Kyselina acetylsalycilová Cilazapril Moracizin Anisodamin Diclofenac Nifedipin Kyselina askorbová Digoxin Oxazepam Atenolol Erythromycin Pentoxifylin Atorvastatin Felodipin Phenobarbital Kalcium Flunarizin Chinin Bisoprolol Furosemid Ramipril Kofein Hydrochlorothiazid DL-Tyrosin Captopril Isosorbid Mononitrat Trimethoprim Chloramphenicol Labetalol Verapamil BIBLIOGRAPHIE 1. Adams, et al. Biochemical markers of myocardial injury, Immunoassay Circulation 88: (1993). 2. Mehegan JP, Tobacman LS, Cooperative interaction between troponin molecules bound to the cardiac thin filament. J. Biol. Chem. 266:966 (1991) 3. Adams, et al. Diagnosis of Perioperative myocardial infarction with measurements of cardiac Troponin I. N.Eng.J. Med 330:670 (1994). 4. Hossein-Nia M, et al. Cardiac troponin / release in heart transplantation. Ann.Thorac. Surg. 61 : 227 (1996). 5. Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology: J.Am. Coll. Cardio., 36(3), Myocardnial Infarction Redefined, 2000.

5 SYMBOLY Výrobce Pouze na jedno použití Pro použití in-vitro Datum exspirace Čtěte pozorně příbalovou informaci +30 C +2 C Skladujte při teplotě 2-30 C Číslo šarže Rev.: 13/07/2006 (MV) Máte nějaké otázky týkající se použití testu nebo jeho vyhodnocení? Kontaktujte svého dodavatele nebo výrobce.