SD BIOLINE HAV IgG/IgM Jednokrokový rychlotest pro stanovení protilátek IgG a IgM proti viru hepatitidy A Návod k použití soupravy Výrobce: STANDARD DIAGNOSTICS, INC. 65 Borahagal-ro, Giheung-gu, Yongin-si, Gyonggi-do, Korea. Tel: +82 31 899 2800, fax: +82 31 899 2840, www.standardia.com Distributor: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz Vysvětlení testu [Úvod] Hepatitida A je způsobena infekcí virem hepatitidy A (HAV). Tento virus je neobalený RNA virus, který je klasifikován jako pikornavirus. Hepatitida A je akutní infekční onemocnění jater, které může být závažné pro starší osoby a osoby, které už mají nějaké jaterní onemocnění. Smrtelné následky jsou možné, i když velice vzácné. Inkubační doba hepatitidy A je 15 50 dní, v průměru 28 dní. Onemocnění způsobené HAV infekcí má náhlý nástup příznaků a symptomů, které zahrnují horečku, malátnost, nechutenství, nevolnost a bolesti břicha, následovány o pár dní později tmavou močí a žloutenkou. Hepatitida A se přenáší stolicí. Lidé se můžou nakazit blízkým kontaktem s infikovanými osobami a požitím kontaminovaného jídla nebo vody. [Použití] SD BIOLINE HAV IgG/IgM je imunochromatografický test na pevné fázi, určený pro rychlou, kvalitativní detekci a rozlišení IgG a IgM protilátek proti viru hepatitidy A v lidském séru nebo plazmě. Tento test poskytuje jen předběžné výsledky, proto pro potvrzení infekce virem hepatitidy A by měly být použity další více specifické diagnostické metody jakou jsou izolace viru a RT-PCR. [Princip] SD BIOLINE HAV IgG/IgM test je určen pro současnou detekci a rozlišení IgG a IgM protilátek proti virus hepatitidy A v lidském séru a plazmě. SD BIOLINE HAV IgG/IgM test má na povrchu membrány 3 proužky - G (HAV IgG testovací linie), M (HAV IgM testovací linie) a C (kontrolní linie). Všechny tři proužky ve výsledkovém okénku nejsou viditelné před aplikací vzorku. Kontrolní linie slouží jako kontrola provedení testu. Kontrolní linie by se měla objevit vždy, pokud byl dodržen správný postup a reagencie a kontrolní linie jsou funkční. Purpurová G a M linie budou viditelné ve výsledkové zóně, pokud je ve vzorku dostatečné množství IgG a/nebo IgM protilátek proti virus hepatitidy A. Když ve vzorku nejsou přítomny IgG a/nebo IgM protilátky proti viru hepatitidy A, G a/nebo M linie se neobjeví. Obsah balení / Aktivní složky hlavních komponent 1. SD BIOLINE HAV IgG/IgM obsahuje následující položky k provedení testu. 25 samostatně balených testových kazet (balen vč. desikantu) Ředící roztok (1 x 5ml/zkumavku) 25 kapilárních pipet (5 μl) 1 návod k použití 2. Aktivní složky hlavních komponent Testovací strip; zlatý konjugát (hlavní složka): myší monoklonální anti-hepatitis A virus-koloidní zlato (1±0,2 μg), testovací linie G (jako hlavní složka): myší monoklonální anti-lidská IgG (4±0,8 μg), testovací linie M (jako hlavní složka): myší monoklonální anti-lidská IgM (4±0,8 μg), kontrolní linie (jako hlavní složka): kozí anti-myší IgG (8±1,6 μg), antigen: rekombinantní antigen viru hepatitdy A (1,5±0.3 μg) Ředící roztok : 100 mm fosfátový pufr (5ml), Tween 20 (0,1 v/v%), azid sodný (0.01 w/w%) 1
Varování / Skladování balení a stabilita 1. Testy skladujte při 1-30 C. Nemrazte soupravu ani komponenty! 2. Pro co nejlepší výsledky striktně dodržujte návod k použití. 3. Všechny vzorky považujte za potenciálně infekční. 4. Testovací aparát je citlivý na vlhkost a také na teplotu. 5. Proveďte testování neprodleně po vyjmutí z ochranného obalu. 6. Nepoužívejte po uplynutí doby expirace. Doba použitelnosti je uvedena na vnějším obalu. 7. Nepoužívejte, pokud je poškozena ochranná balící folie nebo je poškozena pečeť. 8. Zkontrolujte desikant pro změnu barvy, pokud indikuje nasycení vlhkostí, test nepoužívejte. 9. Komponenty (kazeta a ředící roztok) v soupravě byly testovány kontrolou kvality jako jedna standardní šarže. Nepoužívejte komponenty ze souprav různých šarží. 10. Ředící roztok obsahuje nízkou koncentraci azidu sodného jako konzervantu. Azid sodný je toxický, nakládejte s ním opatrně, tak aby jste se vyhnuli požití nebo kontaktu s kůží. Varování 1. Určeno pro in vitro diagnostiku. NEPOUŽÍVEJTE opakovaně jednotlivé části testu. 2. Při zacházení se vzorky nejezte ani nekuřte. 3. Noste ochranné rukavice při manipulaci se vzorky. Důkladně si omyjte ruce po skončení testu. 4. Vyvarujte se vylití nebo tvorbě aerosolů. 5. Rozlité vzorky, či roztoky pečlivě odstraňte za použití patřičných desinfekčních prostředků. 6. Dekontaminujte použité vzorky a použité části soupravy před vyhozením, se všemi vzorky a součástmi testu nakládejte jako s potenciálně infekčními. Použijte příslušný odpadový kontejner pro infekční materiál. Sběr vzorků, skladování a upozornění Test je určen pro testování plazmy nebo séra. [Sérum] Plnou krev odebírejte žilní punkcí do zkumavek NEOBSAHUJÍCÍ antikoagulanty (heparin, EDTA, citrát sodný), nechte 30 minut srazit a poté pro získání supernatantu (séra) centrifugujte. [Plazma] Plnou krev odebírejte do zkumavek obsahující antikoagulanty (heparin, EDTA, citrát sodný) a pro získání vzorku plazmy centrifugujte. Pokud není vzorek plazmy či séra ihned otestován skladujte při 2-8 C. Pro skladování delší než 2 týdny je doporučeno zmrazení, před testováním vytemperujte na teplotu 15-30 C. Plazma nebo sérum obsahující precipitát může dávat nekonzistentní výsledky, vzorky musí být před testováním přečištěny. Upozornění Antikoagulancia (heparin, EDTA, citrát sodný) nemají vliv na výsledek testu Je známo, že relevantní interference, hemolytické vzorky, vzorky s revmatoidním faktorem, lipemické a ikterické vzorky mohou způsobovat horší výsledky testu. Pro každý vzorek používejte jednorázovou kapilární pipetu nebo špičky mikropipety, aby se zabránilo křížové kontaminaci vzorků, což by mohlo vést k chybným výsledkům. Testovací procedura (Viz testovací schéma) 1. Vytemperujte všechny složky soupravy a vzorky před testem na teplotu 15-30 C. 2. Vyjměte kazetu z ochranného obalu a položte ji na rovný a suchý povrch. 3. [Užití kapilární pipety] Přidejte 5 μl vzorku séra nebo plazmy dodávanou 5 μl kapilární pipetou, odebranou po černou linku, do jamky pro vzorek označené S. NEBO, [Užití mikropipety] Přidejte 5 μl vzorku plazmy nebo séra do jamky pro vzorek označené jako S. 2
4. Přidejte 4 kapky ředícího roztoku do oválné jamky. 5. Výsledky interpretujte za 20 minut. Upozornění: Neodečítejte výsledek po více než 20 minutách. Pozdější odečtení může dávat falešně pozitivní výsledky. Interpretace výsledku (Viz testovací schéma) 1. Negativní výsledek Přítomnost pouze kontrolní linky (C) ve výsledkovém okénku. Nebyly detekovány IgG ani IgM protilátky. 2. IgM pozitivní výsledek Přítomnost dvou linek kontrolní (C) a IgM testovací linky (M) ve výsledkovém okénku. Výsledek značí pozitivitu na IgM protilátky proti HAV. 3. IgG pozitivní výsledek Přítomnost dvou linek kontrolní (C) a IgG testovací linky (G) ve výsledkovém okénku. Výsledek značí pozitivitu na IgG protilátky proti HAV. 4. IgG a IgM pozitivní výsledek Přítomnost tří linek kontrolní (C), IgM testovací linky (M) a IgG testovací linky (G) ve výsledkovém okénku. Výsledek značí pozitivitu na IgG i IgM protilátky proti HAV. 5. Neplatný výsledek Pokud se neobjeví kontrolní linka (C) ve výsledkovém okénku, je nutné pokládat výsledek testu za neplatný. Nejčastější příčinou je nedostatečný objem vzorku nebo nesprávný postup testu. Doporučujeme přetestování. Omezení použitelnosti testu 1. Tento test odhalí pouze přítomnost protilátek proti HAV ve vzorku a neměl by být použit jako jediné kritérium pro diagnózu infekce virem hepatitidy A. 2. Diagnóza akutní infekce HAV je potvrzena v průběhu akutní nebo časné rekonvalescentní fáze infekce přítomností IgM anti-hav protilátek v séru nebo plazmě. IgM anti-hav protilátky většinou vymizí v průběhu 6 měsíců po nástupu symptomů. IgG anti-hav protilátky se objevují v rekonvalescentní fázi infekce. Protilátky zůstávají přítomny po zbytek života a zajišťují přetrvávající ochranu proti nemoci. 3 Přítomnost celkových anti-hav protilátek nebo nepřítomnost IgM anti-hav protilátek indukuje imunitu odpovídající s infekcí v minulosti nebo po vakcinaci. 4. U osob, u kterých byl zaznamenán pozitivní výsledek na IgM anti-hav protilátky více než jeden rok po infekci mají pravděpodobně falešně pozitivní výsledek tak jako osoby bez známky probíhající infekce HAV. 5. Negativní výsledek může nastat, pokud množství IgG a /nebo IgM anti-hav protilátek ve vzorku je nižší než detekční limit testu nebo detekované protilátky nejsou přítomny ve stadiu nemoci, ve kterém je vzorek odebrán. 6. Stejně jako s ostatními diagnostickými testy, všechny výsledky musejí být interpretovány v souladu s ostatními klinickými informacemi dostupnými ošetřujícímu lékaři. 7. V průběhu testování důsledně dodržujte pracovní postup, upozornění a interpretaci výsledků. Interní kontrola kvality Kazeta SD BIOLINE HAV IgG/IgM má na povrchu natištěna písmena G, M a C označující Testovací linky G a M a Kontrolní linku. Obě testovací linky i kontrolní linka nejsou před zahájením testu viditelné. Kontrolní linka je určena pro kontrolu průběhu testu a pouze indikuje, že roztok byl aplikován správně a aktivní složky hlavní komponenty na stripu jsou funkční. Kontrolní linka ale NEOVĚŘUJE, zda se vzorkem bylo správně manipulováno při odběru a při testu a NEPŘEDSTAVUJE pozitivní kontrolu vzorku. 3
Charakteristiky testu SD BIOLINE HAV IgG/IgM byl testován s jiným komerčním HAV IgM rapid testem. Bylo testováno 125 pozitivních a 150 negativních vzorků. Byla zjištěna relativní citlivost 97,6 % (122/125) a relativní specifita 98,0 % (147/150). Výsledky jsou v následující tabulce: SD BIOLINE HAV Komerční HAV IgM Suma IgG/IgM rapid test Pozitivní Negativní Pozitivní Negativní Potvrzeno ELISA Pozitivní vzorky Negativní 122 3 3 147 104 19 21 133 125 150 vzorky Citlivost 97,6% (122/125) 83,2% (104/125) Specifita 98,0% (147/150) 87,3% (131/150) Vyloučení odpovědnosti: Přestože byla uplatněna všechna opatření pro zabezpečení diagnostické spolehlivosti a přesnosti tohoto produktu, produkt je používán mimo dosahu výrobce a distributora, a výsledky proto mohou být ovlivněny vnějšími faktory a /nebo chybou uživatele. Osoba, která je subjektem diagnózy, by měla kontaktovat lékaře pro potvrzení výsledku testu. Upozornění: Výrobce a distributor tohoto produktu není zodpovědný za případné ztráty, odpovědnost, nároky, náklady nebo ztrátu, jestli přímé nebo nepřímé nebo následné, vycházející z podobné nebo nesprávné diagnózy pozitivní nebo negativní, při použití tohoto produktu. Reference 1. Nainan OV, Xia G, Vaughan G, Margolis HS. Diagnosis of hepatitis a virus infection: a molecular approach.clin Microbiol Rev. 2006 Jan;19(1):63-79. 2. Abd el-galil KH, el-sokkary MA, Kheira SM, Salazar AM, Yates MV, Chen W, Mulchandani A. Real-time nucleic acid sequencebased amplification assay for detection of hepatitis A virus. Appl Environ Microbiol. 2005 Nov;71(11):7113-6. 3. Zoni R, Zanelli R, Riboldi E, Bigliardi L, Sansebastiano G. Investigation on virucidal activity of chlorine dioxide. experimental data on feline calicivirus, HAV and Coxsackie B5.J Prev Med Hyg. 2007 Sep;48(3):91-5. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Skladujte při 2-30 C Návod k použití Číslo šarže (LOT) Na jedno použití. Nepoužívejte znovu Katalogové číslo Poslední revize tohoto návodu: 06/2014 4
Testovací schéma Přidejte 5 µl séra nebo plazmy do okénka pro vzorek S Dodanou kapilární pipetou přidejte 5µl séra nebo plazmy do okénka pro vzorek S nebo Přidejte 4 kapky ředícího roztoku do oválného okénka Výsledky interpretujte za 20 minut 4 kapky Upozornění: Neodečítejte výsledky po více než 20 minutách. Pozdější odečtení může dát falešně pozitivní výsledky. Interpretace výsledků Pozitivní IgM pozitivní Ve výsledkovém okénku jsou 2 linky C a M Výsledek je pozitivní i v případě slabé M linky IgG pozitivní Ve výsledkovém okénku jsou 2 linky C a G Výsledek je pozitivní i v případě slabé G linky 5
IgG a IgM pozitivní Ve výsledkovém okénku jsou 3 linky C, M a G Negativní [Hepatitida A neprokázána] Ve výsledkovém okénku je 1 linka C Neplatný Ve výsledkovém okénku se neobjeví linka C Doporučujeme vzorek přetestovat Poslední revize tohoto návodu: 06/2014 6