Rapid-VIDITEST FOB+Tf (Jednokrokový kazetový test pro detekci hemoglobinu a transferrinu ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST FOB+Tf je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení lidského hemoglobinu (Hb) a lidského transferrinu (Tf) ve stolici k detekci gastrointestinálního krvácení. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Kolorektální karcinom je nejčastější příčinou onemocnění a úmrtí v hospodářsky vyspělých zemích. Screening pomocí vyšetřování okultního krvácení je postaven na předpokladu, že nádory tlustého střeva krvácejí (např. časné stádium kolorektálního karcinomu nebo adenomatózní polypy střeva) a mohou být proto zachyceny testem na okultní krvácení. Jestliže dochází ke krvácení do gastrointestinálního traktu, obsahuje stolice směs neporušeného anebo téměř neporušeného hemoglobinu, neporušeného hemu a metabolitů hemu (porphyrinů) v množstvích, která závisí na místě krvácení, na velikosti krvácení a na rychlosti průchodu gastrointestinálním traktem. Imunochemické testy, které detekují neporušený anebo téměř neporušený hemoglobin, jsou specifické pro krvácení do dolních částí gastrointestinálního traktu, protože krev pocházející z nižších etáží traktu je průchodem méně degradovaná. Hemoglobin není ve stolici stabilní, což vede k falešně negativním výsledkům. Náhradním řešením je detekce transferrinu, jež je stabilnější, a dává možnost detekce onemocnění vyšších úseků gastrointestinálního traktu. Transferrin je složka krve, která se může dostávat do střeva při onemocněních provázených gatsrointestinálním krvácením a je vylučován stolicí. Transferrin je stabilní ve stolici a je dobrým markerem krvácení z vyšších i nižších úseků střeva (gastrointestinálního krvácení). Tento imunochromatografický test detekuje současně lidský hemoglobin a lidský transferrin ve vzorcích stolice, a tím dává přesnější informace o původu krvácení. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST FOB+Tf je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení lidského hemoglobinu a transferrinu ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky proti lidskému hemoglobinu a lidskému transferrinu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl předem vysušen v aplikačním místě membrány (anti-lidské hemoglobinové protilátky modrá mikrosféra a antilidské transferrinové protilátky červená mikrosféra). Směs barevného konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru přes testovací zóny kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního 1
výsledku budou specifické protilátky imobilizované na testovací zóně membrány vázat barevné částice konjugátu. Objeví se různé barevné linky v závislosti na přítomnosti hemoglobinu nebo transferrinu ve vzorku. Pomocí těchto linek se interpretuje výsledek. Směs se pohybuje dále směrem nahoru do kontrolní zóny, kde jsou imobilizované protilátky pro kontrolní zónu. V té by se měla vždy objevit zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku 3) vnitřní kontrolu reagencií. OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety (obsahují jednorázové plastové pipety) - odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml). Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při +2 až +10 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při - 18 až -28 C. Před použitím vzorky nechte vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (asi 150 mg). V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 150 l a pipetujte do odběrové zkumavky (1). 2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (2). Vzorek stolice Odběrová zkumavka (1) (2) 2
Upozornění: Vzorky by neměly být odebírány u žen v období menstruace, u pacientů s krvácivými hemoroidy, u pacientů s nálezem krve v moči a u lidí s narušenou peristaltikou (namáhavé vyprazdňování). PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 1. Po vytemperování kazety otevřete obalovou folii v označeném místě. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (3). 3. Těsně před použitím vyjměte Rapid-VIDITEST FOB+Tf z obalové folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu pro každý vzorek a kontrolu zvlášť. 4. Přidejte přesně 4 kapky nebo 100 l naředěného vzorku z odběrové zkumavky do oválného okénka označeného šipkou (4). 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). Aplikujte 4 kapky roztoku se vzorkem (3) Kontrolní zóna Výsledková zóna (4) INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: 3
Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Červená Modrá Zelená Červená Modrá Červená Modrá Negativní Hb a Tf Hb Tf Neplatný Neplatný Neplatný Pozitivní Pozitivní Pozitivní Negativní: Objeví se pouze ZELENÁ linka v místě označeném C (kontrolní zóna). Okultní krvácení není prokázáno: ve vzorku není přítomnost ani lidského hemoglobinu ani transferrinu. Tf pozitivní: Kromě kontrolní ZELENÉ linky se objeví ČERVENÁ linka v místě označeném T (výsledková zóna). To může znamenat krvácení z horní části gastrointestinálního traktu (hemoglobin byl již pravděpodobně odbourán). Hb pozitivní: Kromě kontrolní ZELENÉ linky se objeví MODRÁ linka v místě označeném T (výsledková zóna). To může znamenat krvácení z dolní části gastrointestinálního traktu (koncentrace transferrinu v krvi je 100x menší než hemoglobinu, proto pozitivní hemoglobin znamená pouze malé množství krve ve stolici). Hb a Tf pozitivní: Objeví se všechny výše uvedené linky (ZELENÁ linka v místě označeném C, ČERVENÁ linka (Tf testovací linka) a MODRÁ linka (Hb testovací linka) v místě označeném T). To pravděpodobně znamená krvácení z dolní části gastrointestinálního traktu (kolorektální karcinom). Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví ZELENÁ linka bez ohledu na to, zda se v zóně výsledku objeví červená nebo modrá linka. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku, nesprávné provedení testu nebo poškození činidel. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené nebo modré barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci lidského hemoglobinu nebo lidského transferrinu ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství ani rychlost nárůstu hemoglobinu nebo transferrinu. 4
PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně C je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat přípravu vzorku a test. 3. Vzorky by neměly být odebírány u žen v období menstruace, u pacientů s krvácivými hemoroidy, u pacientů s nálezem krve v moči a u lidí s narušenou peristaltikou (namáhavé vyprazdňování) 4. Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost lidského hemoglobinu a/nebo lidského transferrinu ve stolici, ačkoliv test je určen pro včasnou diagnostiku kolorektálního karcinomu, může být pozitivní i v jiných případech, jako jsou krvácející hemoroidy, stavy s přítomností krve v moči nebo iritace žaludeční sliznice. Pozitivní výsledek by měl vést k dalším vyšetřením ke zjištění zdroje krvácení a příčiny výskytu krve ve stolici. 5. Negativní výsledek nevylučuje krvácení, protože polypy a kolorektální karcinom může způsobovat pouze intermitentní krvácení anebo nemusí krvácet během určitých stádií onemocnění. Krev se může vyskytovat ve stolici nerovnoměrně (může chybět právě jen v v odebraném vzorku). ÚČINNOST TESTU: Citlivost: Vzorek obsahující lidský hemoglobin v koncentraci 50 ng/ml a lidský transferrin v koncentraci 4 ng/ml vykazuje za použití Rapid-VIDITEST FOB+Tf pozitivní výsledek. Detekční limit testu byl stanoven dle pokynů pro provedení tohoto testu. Hemoglobin a transferrin byl různě ředěn přímo v pufru nebo byl smíchán s negativním vzorkem stolice. Citlivost detekce lidského hemoglobinu pomocí Rapid-VIDITEST FOB+Tf testu vykazovala více jak 99% shodu v porovnání s komerčním guajak testem. Citlivost detekce lidského hemoglobinu pomocí Rapid-VIDITEST FOB+Tf testu vykazovala > 99% shodu v porovnání s jinými komerčními rapid testy (ImmunTech OcculTech (YD Diagnostics) a Human Hexagon OBTI). Specificita: Rapid-VIDITEST FOB+Tf je specifický na lidský hemoglobin a lidský transferrin, nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s bovinním a prasečím hemoglobinem nebo transferrinem. Specifita detekce lidského hemoglobinu pomocí Rapid-VIDITEST FOB+Tf vykazovala > 99% shodu s komerčním guajak testem, > 99% shodu s dalšími komerčními rapid testy (ImmunTech OcculTech (YD Diagnostics) a Human Hexagon OBTI). Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST FOB+Tf zaručuje vysoký stupeň specificity pro detekci lidského hemoglobinu a transferrinu. 5
SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy REFERENCE: 1. Towler BP, Irwig L, Glasziou P, Weller D, Kewenter J: Screening for colorectal cancer using the faecal occult blood test, Hemoccult. Cochrane Database Syst Rev. 2000;(2): CD001216. 2. Ransohoff DF and Lang CA: Screening for colorectal cancer with the Fecal Occult Blood Test: a background paper. Ann Intern Med. 1997; 126: 811-822. 3. Ransohoff DF and Lang CA: Suggested technique for Faecal Occult Blood testing and interpretation in colorectal cancer screening. Ann Intern Med. 1997; 126: 808-810. 4. Chien-Hua Chiang et al.: A Comparative Study of Three Fecal Occult Blood Test in Upper Gastrointestinal Bleeding. Kaohsiung J. Med. Sci. May 2006, 22; 223-228. 5. Virtanen et al.: Higher concentrations of serum transferrin receptor in children than in adults, Am. J. Clin. Nutr. 1999; 69: 256-60. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 11/2010 6