Rapid-VIDITEST Lactoferrin Jednokrokový kazetový test pro detekci laktoferinu ve stolici Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Lactoferrin je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci lidského laktoferinu ve vzorcích stolice, které může být známkou střevního zánětu nebo nespecifického střevního zánětlivého onemocnění. ÚVOD: Laktoferin je glykoprotein, jež je obsažen v sekundárních granulech neutrofilů, patří mezi proteiny akutní fáze zánětu a je uvolňován do stolice z leukocytů přítomných ve stolici. Laktoferin ve stolici je odolný proti proteolýze a může sloužit jako marker zánětu ve střevech. Nejčastější příčinou nálezu leukocytů ve stolici u pacientů s dlouhotrvajícími průjmy jsou chronické nespecifické střevní záněty (Crohnova choroba a ulcerózní kolitida). Jedná se o neinfekční průjmy vyskytující se u pacientů s ulcerózní kolitidou nebo Crohnovou nemocí. Laktoferin byl zkoumán u dětí s průjmy s ohledem na časnou předpověd infekce invazivními enteropatogeny. Bakteriální střevní záněty vyvolávají kmeny Shigella, Salmonella, Campylobacter a Clostridum difficile. Tento marker dokáže odlišit pacienty s chronickým nespecifickým střevním zánětlivým onemocněním v období aktivního zánětu od pacientů s nespecifickým střevním zánětlivým onemocněním v období bez zánětu a od pacientů s dráždivým tračníkem. Rapid-VIDITEST Lactoferrin představuje vysoce citlivou, specifickou a neinvazivní metodu pro hodnocení aktivity zánětlivých onemocnění, sledování odpovědi na léčbu těchto pacientů a předvídání relapsu onemocnění. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Lactoferrin je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení lidského laktoferinu ve vzorcích stolice. V testovacích zónách membrány jsou navázány protilátky proti lidskému laktoferinu. V průběhu testu vzorek reaguje s barevným konjugátem (protilátka proti laktoferinu navázaná na červené mikročástici), který byl předem vysušen v aplikačním místě membrány. Směs vzlíná membránou a uvádí do pohybu barevné částice. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami imobilizovanými v testovací zóně membrány. Barevná linka je viditelná v závislosti na množství laktoferinu ve vzorku. Tato linka se používá k interpretaci výsledku. Směs pokračuje v pohybu membránou až k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy objeví červená linka. Přítomnost této červené linky potvrzuje, 1) že se použil 1
dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) představuje vnitřní kontrolu použitých reagencií. OBSAH SOUPRAVY: - testovací kazety - odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout hned po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 5 dní při pokojové teplotě nebo v chladničce (+2 až +10 C). V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (asi 10 mg). V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 10 μl a pipetujte do odběrové zkumavky (obr. 1). 2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 2). Vzorek stolice Odběrová zkumavka (1) (2) 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 3). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Lactoferrin z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky nebo 100 μl naředěného vzorku (obr. 4). 4. Přesně za 10 minut odečtěte výsledek. Aplikujte 4 kapky roztoku se vzorkem (3) Kontrolní zóna Výsledková zóna (4) 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Pozitivní Negativní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna červená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Laktoferin pozitivní: Kromě červené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví červená linka bez ohledu na přítomnost červené ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky ve výsledkové zóně T závisí na koncentraci lidského laktoferinu ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství ani nárůst laktoferinu v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně C objeví červená linka. V testu je použit interní standard. Červená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky a nebo není přítomna červená linka v kontrolní zóně). 3. Vzorky stolice, které pocházejí od pacientů v aktivním stadiu chronického nespecifického střevního onemocnění, obyčejně obsahují značné množství neutrofilů a měly by být pozitivní na laktoferin. U pacientů s chronickými průjmy s podezřením na nespecifické střevní zánětlivé onemocnění je Rapid-VIDITEST Lactoferrin citlivým testem. 4. Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost laktoferinu ve stolici, ikdyž se může vyskytovat i v jiných případech než jsou chronická nespecifická střevní onemocnění. Pozitivní výsledek by měl být ověřen dalšími diagnostickými vyšetřeními. Pro detekci a stanovení rozsahu střevního zánětu jsou to endoskopie a biopsie ze střeva. 5. Negativní výsledek nevylučuje zánět ve střevě, protože některá onemocnění, jako je např. celiakální sprue a mikroskopické polypy v tlustém střevě jsou provázeny převážně monocytární infiltrací sliznice. 6. Laktoferin je součástí mateřského mléka, proto test bude pozitivní u kojených dětí a z toho důvodu by neměl být používán pro vyšetřování novorozenců krmených mateřským mlékem. ÚČINNOST TESTU: Citlivost: Vzorek obsahující laktoferin v koncentraci 50 ng/ml vykazuje za použití Rapid-VIDITEST Lactoferrin Testu pozitivní výsledek. Detekční limit testu byl stanoven dle pokynů pro provedení tohoto testu. Laktoferin byl různě ředěn přímo v pufru nebo byl smíchán s negativním vzorkem stolice. Detekční limit Rapid-VIDITEST Lactoferrin vykazoval více jak 99% shodu v porovnání s jinými komerčními testy. Specifita: Detekce lidského laktoferinu testovaného Rapid-VIDITEST Lactoferrin vykazovala 92% shodu ve specifitě v porovnání s jiným komerčním testem. Křížová reaktivita: Rapid-VIDITEST Lactoferrin je specifický na lidský laktoferin, nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s bovinním laktoferinem. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte. 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy REFERENCE: 1. Angriman I. et al.: Enzymes in feces Useful markers of chronic inflammatory bowel disease. Clinica Chimica Acta 381, Feb 2007, p. 63-68. 2. Guerrant R. et al.: Measurement of Fecal Lactoferrin as a Marker of Fecal Leukocytes. Journal of Clinical Microbiology, Vol. 30 No 5; May 1992, p. 1238-1242. 3. Langhorst, M.D. et al.: Noninvasive Markers in the Assessment of Intestinal Inflammation in Inflammatory Bowel Diseases: Performance of Fecal Lactoferrin, Calprotectin and PMN-Elastase, CRP, and Clinical Indices. Am. J. Gastroenterol. 2008; Vol. 103, p. 162-169. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6