Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP Informace pro objednání

Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP Informace pro objednání REF CONTENT Analyzátory, na kterých lze cobas c pack(y) použít 04528123 190 Tina-quant Hemoglobin A1c Gen.2 (150 testů) 04528417 190 C.f.a.s. HbA1c (3 2 ml) 05479207 190 PreciControl HbA1c norm (4 x 1 ml) 05912504 190 PreciControl HbA1c path (4 1 ml) 04528328 190 COBAS INTEGRA Hemolyzing reagent Gen.2 (6 10 ml) 07 6850 2 07 6852 9 07 7477 4 07 7478 2 07 6851 0 COBAS INTEGRA 400/400 plus COBAS INTEGRA 800 Česky Systémové informace Multitest A1CW2, test ID 0 028 Test HB W2, test ID 0 128; test A1 W2, test ID 0 228 Poměr RWD2M, test ID 0 529 (dle DCCT/NGSP) Poměr RWI2M, test ID 0 427 (dle IFCC) Profil PA1W2, test ID 0 628 Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení mmol/mol hemoglobinu A1c (IFCC) a % hemoglobinu A1c (DCCT/NGSP) v plné krvi na analyzátorech klinické chemie Roche. Měření HbA1c slouží k dlouhodobému monitorování glukózy v krvi u nemocných s diabetes mellitus. Tento test je navíc určen jako pomůcka při diagnostikovaném diabetu a rozpoznání pacientů s rizikem rozvoje diabetu. Souhrn 1,2,3,4,5,6,7,8,9 Hemoglobin (Hb) se skládá ze 4 bílkovinných subjednotek, každá obsahuje část hemu a je červeně zbarveným proteinem v erytrocytech. Jeho hlavní funkcí je transport kyslíku a oxidu uhličitého v krvi. Každá molekula Hb je schopna vázat 4 molekuly kyslíku. Hb se vyskytuje v rozmanitých podskupinách a derivátech. V této heterogenní skupině je HbA1c jedním z glykovaných hemoglobinů, které vznikají připojením různých cukrů na molekulu Hb. HbA1c je vytvářen ve 2 krocích neenzymovou reakcí glukózy s N-terminální aminoskupinou β-řetězce normálního Hb dospělých (HbA). První krok je reverzibilní a vzniká při něm labilní HbA1c. Toto je přeuspořádáno, aby v druhém reakčním kroku vytvořilo stabilní HbA1c. Relativní množství HbA, přeměněného na stabilní HbA1c, se v erytrocytech zvyšuje podle průměrné koncentrace glukózy v krvi. Přeměna na stabilní HbA1c je omezena životností erytrocytů tj. na přibližně 100 až 120 dnů. V důsledku toho odráží HbA1c průměrnou hodnotu krevní glukózy v uplynulých 2 3 měsících. Proto je HbA1c vhodný k dlouhodobému monitorování glukózy v krvi u jedinců s diabetes mellitus. Hladiny glukózy bližší času stanovení mají větší vliv na hladinu HbA1c. 1 Vzájemný vztah mezi HbA1c a průměrnou hodnotou glukózy v krvi v uplynulých 2 až 3 měsících byl analyzován v několika studiích. Dosavadní výsledky lze vyjádřit vztahem: IFCC Standardizace (přepočítaná dle odkazu 8) Odhadovaná průměrná glukóza [mmol/l] = 0.146 HbA1c (mmol/mol) + 0.834 nebo Odhadovaná průměrná glukóza [m] = 2.64 HbA1c (mmol/mol) + 15.03 Standardizace dle DCCT/NGSP 8 Odhadovaná průměrná glukóza [mmol/l] = 1.59 HbA1c (%) - 2.59 nebo Odhadovaná průměrná glukóza [m] = 28.7 HbA1c (%) - 46.7 Riziko diabetických komplikací, jako je diabetická nefropatie a retinopatie, vzrůstá, čím je horší metabolická kontrola. Ve shodě s funkcí indikátoru průměrné hladiny krevní glukózy, lze podle HbA1c předpovídat rozvoj diabetických komplikací u diabetiků. 4,5 Pro monitorování dlouhodobé glykemické kontroly obecně stačí testování každé 3 až 4 měsíce. V určitých klinických stavech, jako např. těhotná diabetička, nebo při zásadní změně léčby, může být vhodné stanovovat HbA1c ve 2 až 4týdenních intervalech. 7 Princip testu 10,11,12 Vzorek plné antikoagulované krve je hemolyzován automaticky na analyzátoru COBAS INTEGRA 400/400 plus/800 pomocí COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2. Tato metoda využívá TTAB a) jako detergent v hemolyzační reagencii k eliminaci interference leukocytů (TTAB nelyzuje leukocyty). Předpříprava vzorku odstraňující labilní HbA1c není nutná. Všechny varianty hemoglobinu, které jsou glykované na N-terminálním konci β-řetězce a které mají oblasti, rozpoznávané protilátkami, shodné s Hb1c jsou rovněž stanovovány. Metabolický stav diabetického pacienta s uremií nebo nejrozšířenějšími hemoglobinopatiemi (HbAS, HbAC, HbAE) může být tudíž stanoven použitím tohoto stanovení. 13,14 Hemoglobin A1c Stanovení HbA1c je založeno na turbidimetrické inhibici (TINIA) v hemolyzované plné krvi. Vzorek a přidání R1 (pufr/protilátka): Glykohemoglobin (HbA1c) ve vzorku reaguje s protilátkou proti HcA1c za tvorby rozpustného komplexu antigen-protilátka. Jestliže nejsou přítomna na molekule místa pro specifické protilátky proti HbA1c, komplex se nevytváří. Přidání SR (pufr/polyhapten) a zahájení reakce: Polyhapteny reagují s nadbytkem protilátek proti HbA1c za tvorby nerozpustného komplexu protilátka-polyhapten, který může být stanoven turbidimetricky. Hemoglobin Uvolněný hemoglobin v hemolyzovaném vzorku je přeměněn na derivát s charakteristickým absorpčním spektrem, které je bichromaticky změřeno během preinkubační fáze (vzorek + R1) výše uvedené imunologické reakce. V důsledku toho není potřebná samostatná reagencie Hb. Konečný výsledek je vyjádřen jako mmol/mol HbA1c nebo % HbA1c a je vypočítaný z poměru HbA1c/Hb: Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): HbA1c (mmol/mol) = (HbA1c/Hb) 1000 Protokol 2 (% HbA1c dle DCCT/NGSP): HbA1c (%) = (HbA1c/Hb) 91.5 + 2.15 a) TTAB = Bromid tetradecyltrimetylamonný 1 / 6 A1C-W

Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP Reagencie - pracovní roztoky R1 SR Reagencie s protilátkou MES b) pufr: 0.025 mol/l; TRIS c) pufr: 0.015 mol/l, ph 6.2; HbA1c protilátka (ovčí sérum): 0.5 mg/ml; stabilizátory; konzervans Reagencie s polyhaptenem MES pufr: 0.025 mol/l; TRIS pufr: 0.015 mol/l, ph 6.2; HbA1c polyhapten: 8 µg/ml; stabilizátory; konzervans b) MES = kys. 2-morfolinethansulfonová c) TRIS = Tris(hydroxymetyl)-aminometan R1 je v pozici B a SR je v pozici C. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Zacházení s reagenciemi Připraveno k použití Uskladnění a stabilita Reagencie Doba skladování při 2 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus V přístroji při použití při 10 15 C Systém COBAS INTEGRA 800 V analyzátoru při použití při 8 C Hemolyzační reagencie Doba skladování při 2 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus/800 Použití v přístroji, stojan ISE, uzavřené nádobky Použití v přístroji, multi rack, otevřené nádobky Systém COBAS INTEGRA 800 CTS Použití v přístroji, stojan ISE, otevřené nádobky Čtěte datum exspirace na štítku cobas c packu 4 týdny 4 týdny Viz datum exspirace na štítku nádobky 4 týdny 2 dny 2 dny Při skladování při teplotách pod 3 C může být reagencie zakalená. Zákal nemá vliv na funkci reagencie a zmizí při vyšších teplotách. Z tohoto důvodu se doporučuje vytemperovat reagencie při pokojové teplotě po dobu cca. 10 minut a před použitím řádně promíchat. Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné. Nesrážlivá venózní nebo kapilární krev. Jedinými vhodnými antikoagulanty jsou Li-heparin, K 2 EDTA, K 3 EDTA a fluorid draselný/na 2 EDTA. Stabilita: 15 3 dnypři 15 25 C 7 dní při 2 8 C 6 měsíců při ( 15) ( 25) C Výtěžnost hodnot poměru HbA1c z usazených vzorků, zejména v případě slabě kontrolovaných diabetických pacientů, může být nepatrně zvýšená. Aby se tento efekt minimalizoval mohou být vzorky před analýzou jemně promíchány převrácením. Zamrazit jen jednou. Po rozmazení důkladně promíchat. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2 for Tina quant HbA1C Gen.2, Kat. č. 04528328 190, systémové ID 07 6851 0. Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. Aplikace pro Hb a HbA1c COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Hb HB-W2 R1-S Výpočet první/posl. 17/33 Faktor předředění 100 378/659 nm Hb Diluent (H 2 O) Celkový objem 126 µl COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu HbA1c A1-W2 R1-S-SR Výpočet první/posl. 33/57 Faktor předředění 100 340/659 nm HbA1c Diluent (H 2 O) SR 24 µl 0 µl Celkový objem 150 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Hb HB-W2 R1-S A1C-W 2 / 6

Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP Výpočet první/posl. 17/44 Faktor předředění 100 378/659 nm Hb Diluent (H 2 O) Celkový objem 126 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu HbA1c A1-W2 R1-S-SR Výpočet první/posl. 44/96 Faktor předředění 100 340/659 nm HbA1c Diluent (H 2 O) SR 24 µl 0 µl Celkový objem 150 µl Definice poměru pro mmol/mol HbA1c a výpočet % HbA1c Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): Zkrácený název RWI2M (0-427) Rovnice (A1-W2/HB-W2) 1000 mm/m Protokol 2 (% HbA1c dle DCCT/NGSP): Zkrácený název RWD2M (0-529) Rovnice (A1-W2/HB-W2) 91.5 + 2.15 % Použijte předdefinovaný profil (PA1W2, 0 628) pro simultánní zadávání příkazů testů Hb (HB W2) a HbA1c (A1 W2) ze stejného hemolyzátu. Poměr pro HbA1c (mmol/mol HbA1c dle IFCC a % HbA1c dle DCCT/NGSP) se vypočítává automaticky po dohotovení obou testů. Pro duální vykazování obou jednotek mmol/mol HbA1c (IFCC) jakož i % HbA1c (DCCT/NGSP) se prosím ujistěte, že jsou aktivovány oba testy poměru 0 427 (dle IFCC) a 0 529 (dle DCCT/NGSP). Kalibrace Hb Kalibrátor HbA1c Kalibrátor C.f.a.s. HbA1c C.f.a.s. HbA1c Poměr ředění kalibrátoru 1:1, 1:1.67, 1:2, 1:5, 1:25, 0, prováděno automaticky přístrojem Diluent kalibrátoru Typ kalibrace Logit/log 5 Opakování kalibrace Kalibrační interval COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2, Kat. č. 04528328 190 Doporučen duplikát Každou šarži, každých 29 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle schválené IFCC referenční metody pro stanovení HbA1c v lidské krvi 16,17 a může být převedena na výsledky s návazností na výpočet podle DCCT/NGSP. Upozornění Pro tyto aplikace odpovídají hodnoty kalibrátoru C.f.a.s. HbA1c šarži reagencií. Pro každou aplikaci a každou kombinaci šarže kalibrátoru C.f.a.s. HbA1c a šarže reagencií Tina quant HbA1c Gen.2 jsou v příslušném letáku hodnot pro kalibrátor C.f.a.s. HbA1c uvedeny přesné hodnoty kalibrátoru. Zadejte cílové hodnoty kalibrátoru, závislé na šarži a na aplikaci. Používejte pouze příslušné C.f.a.s. HbA1c kalibrátory. COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2, 6 x 11 ml, Kat. č. 04528328 190, systémové ID 07 6851 0, musí být v analyzátoru dostupná. Jinak nemůže být kalibrace provedena. Kontrola kvality Kontrola kvality Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci PreciControl HbA1c norm PreciControl HbA1c path doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontrolní intervaly a limity by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Upozornění Kontroly předpřipravte stejným způsobem jako vzorky. Kontroly HbA1c mají deklaraci pouze pro mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). Pro Hb a HbA1c není deklarace koncentrace dodávána. V důsledku toho je s HbA1c Controls zacházeno jako se vzorky a nejsou zahrnuty do programu Quality Control systému COBAS INTEGRA. Výpočet Hb Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci Hb pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). HbA1c Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci HbA1c každého vzorku. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Výpočet poměru HbA1c Pro výpočet hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) čtěte prosím části Princip testu a Definice poměru pro mmol/mol HbA1c a výpočet % HbA1c v tomto metodickém listu. Omezení - interference 13,14,18,19,20,21,22 3 / 6 A1C-W

Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP 1. Pro diagnostické účely by měly být hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) používány ve spojení s informacemi z dalších diagnostických postupů a klinických nálezů. 2. Test je určen pouze pro precizní a správné stanovení mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). Jednotlivé výsledky koncentrace celkového Hb a HbA1c by neměly být vydávány. 3. Ze zásady musí být při interpretaci jakýchkoliv výsledků HbA1c od pacientů s variantami Hb dáván pozor. Abnormální hemoglobiny mohou ovlivnit poločas červených krvinek nebo in vivo hodnoty glykace. V těchto případech nereflektují ani analyticky správné výsledky stejnou hladinu glykemické kontroly, která by byla očekávána u pacientů s normálním hemoglobinem. 23 HbA1c nesmí být použito pro diagnózu diabetu mellitus při jakémkoliv podezření na přítomnost varianty Hb (např. HbSS, HbCC nebo HbSC) mající vliv na korelaci mezi hodnotou HbA1c a glykemickou kontrolou. 4. Každá příčina zkrácení životnosti erytrocytů nebo pokles průměrného stáří erytrocytů snižuje dobu, po kterou je erytrocyt vystaven působení glukózy s následným poklesem hodnot mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP), ačkoliv může dojít ke zvýšení průměrné hladiny glukózy v daném období. Příčinami zkrácení životnosti erytrocytů může být hemolytická anemie nebo jiná hemolytická onemocnění, homozygotní srpkovitá anemie, těhotenství, nedávná výrazná nebo chronická ztráta krve atd. Obdobně mohou nedávné transfuze krve změnit hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). Tyto okolnosti musí být vzaty v úvahu při posuzování výsledků HbA1c těchto pacientů. Za těchto okolností nesmí být HbA1c použito při diagnostice diabetu mellitus. 5. Glykosylovaný HbF není detekován, jelikož neobsahuje glykosylovaný β řetězec, typický pro HbA1c. HbF je nicméně měřeno ve stanoveních Total Hb, a jako důsledek mohou vzorky obsahující větší množství HbF (> 10 %) být menší než očekávané hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). 13,22 6. Hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP) nejsou vhodné pro diagnostiku gestačního diabetu. 24 7. Ve velmi vzácných případech rychle se rozvíjejícího diabetu 1. typu mohou být hodnoty HbA1c opožděné ve srovnání s akutním nárůstem v koncentraci glukózy. Za těchto okolností musí být diabetes mellitus diagnostikován na základě koncentrace glukózy v plazmě a/nebo typických klinických symptomů. 24 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ± 10 % počáteční hodnoty. Ikterus: Bez významných interferencí do koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu 1000 µmol/l nebo 60 m. Lipémie (Intralipid): Analyzátor COBAS INTEGRA 800: Bez významných interferencí do koncentrace Intralipidu 800 m. Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus: Bez významných interferencí do koncentrace Intralipidu 600 m. Mezi koncentrací triglyceridů a zákalem je slabá korelace. Glykemie: Bez významných interferencí do koncentrace glukózy 55.5 mmol/l nebo 1000 m. Odběr nalačno není nutný. Revmatoidní faktory: Žádná interference revmatoidních faktorů do koncentrace 750 IU/mL. Léky: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference. 25 Ostatní: Protilátky proti HbA1c této soupravy nezaznamenaly křížovou reakci s HbA0, HbA1a, HbA1b, acetyl hemoglobinem, karbamyl hemoglobinem, glykovaným albuminem, labilním HbA1c a HbA1d. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Použití speciálních mycích cyklů je nutné při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA. Pro další pokyny čtěte Návody metod, Úvod, Extra mycí cykly. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vykazováním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry over). Limity a rozmezí Rozsah měření Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus: Hb: 4 35 HbA1c: 0.3 2.6 * *Rozsah měření pro HbA1c leží mezi 0.3 a hodnotou koncentrace nejvyššího standardu. Výše uvedené rozmezí testu je založeno na obvyklé hodnotě kalibrátoru 2.6. Toto odpovídá rozsahu měření 23 197 mmol/mol HbA1c (IFCC) a 4.3 19.5 % HbA1c (DCCT/NGSP) při běžné koncentraci hemoglobinu 13.2. Analyzátor COBAS INTEGRA 800: Hb: 4 35 HbA1c: 0.3 3.4 Toto odpovídá rozsahu měření 23 258 mmol/mol HbA1c (IFCC) a 4.3 24.8 % HbA1c (DCCT/NGSP) při běžné koncentraci hemoglobinu 13.2. Ve vzácných případech označení "test rng", které může nastat při použití aplikace s plnou krví znova promíchejte vzorek plné krve a analýzu zopakujte se stejným nastavením. Spodní limity měření Spodní detekční limit testu: Hb: 0.5 HbA1c: 0.1 Typický spodní detekční limit pro poměr HbA1c může být vypočítán podle dané koncentrace Hb. Považujeme-li za obvyklou koncentraci Hb 13.2, spodní detekční limit je 8 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 2.9 % HbA1c (DCCT/NGSP). Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard 1 + 3 SD, opakovatelnost, n = 21). Očekávané hodnoty Protokol 1 (podle IFCC): 29 42 mmol/mol HbA1c 26 Protokol 2 (podle DCCT/NGSP): 4.8 5.9 % HbA1c 26 Toto referenční rozmezí bylo získáno měřením 474 dobře popsaných zdravých jedinců bez diabetu mellitus. Hladiny HbA1c vyšší než horní hranice referenčního rozmezí indikují hyperglykémii v průběhu uplynulých 2 až 3 měsíců nebo déle. Podle doporučení American Diabetes Association jsou pro diagnostiku diabetu mellitus vhodné hodnoty nad 48 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 6.5 % HbA1c (DCCT/NGSP). 24,27 U pacientů s hodnotami HbA1c v rozmezí 39 46 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 5.7 6.4 % HbA1c (DCCT/NGSP) existuje riziko rozvoje diabetu. 24,27 Hladiny HbA1c mohou u špatně kontrolovaných diabetiků dosáhnout 195 mmol/mol (IFCC) nebo 20 % (DCCT/NGSP) nebo vyšší. Terapeutický zásah je doporučován u hladin nad 64 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 8 % HbA1c (DCCT/NGSP). Diabetický pacient s hladinou HbA1c pod 53 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 7 % HbA1c (DCCT/NGSP) splňuje cíle Americké asociace pro Diabetes. 19,28 Hladiny HbA1c nižší než stanovené referenční rozmezí mohou značit dřívější epizody hypoglykémie, přítomnost variantních Hb nebo zkrácení životnosti erytrocytů. A1C-W 4 / 6

Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního postupu s opakovatelností (n = 21) a mezilehlou precizností (1 alikvot na sérii, 1 série denně, 21 dní). Získány byly následující výsledky (údaje dle hodnot DCCT/NGSP): Průměr % HbA1c Level 1 Level 2 VK % Průměr % HbA1c Opakovatelnost 5.4 0.8 10.2 0.9 Mezilehlá preciznost 5.3 1.3 10.3 1.0 Porovnání metod Hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 400 použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (y) byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (aplikace s plnou krví) na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Vzorky byly měřeny jednotlivě. Analyzátor COBAS INTEGRA 400 Počet vzorků (n) = 69 y = 0.963x + 0.222 % y = 0.961x + 0.267 % τ = 0.963 r = 0.998 SD (md 95) = 0.201 Sy.x = 0.100 Hodnoty byly v rozmezí od 4.91 do 12.5 % HbA1c (DCCT/NGSP). Hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (y) byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tinaquant Hemoglobin A1c Gen.2 (aplikace s plnou krví) na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Vzorky byly měřeny jednotlivě. Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Počet vzorků (n) = 100 y = 0.970x + 0.263 % y = 0.975x + 0.232 % τ = 0.949 r = 0.995 SD (md 95) = 0.283 Sy.x = 0.138 Hodnoty byly v rozmezí od 5.0 do 12.7 % HbA1c (DCCT/NGSP). Hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 CTS reagencií COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (y) byly porovnány s hodnotami stanovenými na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (aplikace s plnou krví) (x). Vzorky byly měřeny jednotlivě. Analyzátor COBAS INTEGRA 800 CTS Počet vzorků (n) = 71 y = 0.987x + 0.064 % y = 1.003x + 0.052 % τ = 0.924 r = 0.997 VK % SD (md 95) = 0.230 Sy.x = 0.106 Hodnoty byly v rozmezí od 5.06 do 12.6 % HbA1c (DCCT/NGSP). Navíc bylo ještě provedeno srovnání s komerčně dostupnou HPLC metodou. Metoda HLPC byla standardizována v souladu s DCCT (Diabetes Control and Complications Trial). 3,4 Metoda HLPC Počet vzorků (n) = 60 y = 0.943x + 0.517 % y = 0.932x + 0.572 % τ = 0.957 r = 0.997 SD (md 95) = 0.235 Sy.x = 0.110 Hodnoty byly v rozmezí od 4.9 do 12.1 % HbA1c (DCCT/NGSP). Analytická specifičnost Deriváty Hb Labilní HbA1c (pre-hba1c), acetyl Hb a karbamyl Hb nemají vliv na výsledky stanovení. Varianty Hb Vzorky s větším obsahem HbF (> 10 %) mohou poskytovat menší než očekávané výsledky HbA1c. Upozornění: Podle souhlasného stanoviska organizací American Diabetes Association (ADA), European Association for the Study of Diabetes (EASD), International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) a International Diabetes Federation (IDF) by mely být výsledky hlášeny souběžně, jak v mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). 30 Navíc může být vykazována HbA1c odvozená odhadovaná průměrná koncentrace glukózy, která může být vypočítána dle rovnic daných v části "Souhrn" tohoto letáku metod. Dřívější hodnoty % HbA1c (IFCC) nesmí být použity kvůli riziku záměny / nesprávné interpretace s hodnotami % HbA1c (DCCT/NGSP). Odkazy 1 Goldstein DE, Little RR, Lorenz RA, et al. Tests of glycemia in diabetes. Diabetes Care 1995;18:896-909. 2 Goldstein DE, Little RR. More than you ever wanted to know (but need to know) about glycohemoglobin testing. Diabetes Care 1994;17:938-939. 3 Santiago JV. Lessons from the diabetes control and complications trial. Diabetes 1993;42:1549-1554. 4 The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long-term complications in insulin-dependent diabetes mellitus. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. N Engl J Med 1993;329:977-986. 5 Intensive blood glucose control with sulfonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes (UKPDS 33). UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Lancet 1998;352:837-853. 6 Finke A, Kobold U, Hoelzel W, et al. Preparation of a candidate primary reference material for the international standardization of HbA1c determinations. Clin Chem Lab Med 1998;36(5):299-308. 7 Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM, et al. Glycated hemoglobin: methodologies and clinical applications. Clin Chem 1986;32:B64-B70. 8 Nathan DM, Kuenen J, Borg R, et al. Translating the A1C assay into estimated average glucose values. Diabetes Care 2008;31:1473-1478. 9 Bunn HF, Gabbay KH, Gallop PM. The glycosylation of hemoglobin: relevance to diabetes mellitus. Science 1978;200:21-27. 10 Zander R, Lang W, Wolf HU. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemiglobin method. I. Description of the method. Clin Chim Acta 1984;136:83-93. 5 / 6 A1C-W

Tina-quant hemoglobin A1c 2. generace Aplikace pro plnou krev - Standardizováno podle IFCC, převoditelné na DCCT/NGSP 11 Wolf HU, Lang W, Zander R. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemiglobin method. II. Standardization of the method using pure chlorohaemin. Clin Chim Acta 1984;136:95-104. 12 Little RR, Wiedmeyer HM, England JD, et al. Interlaboratory standardization of measurements of glycohemoglobins. Clin Chem 1992;38:2472-2478. 13 Chang J, Hoke C, Ettinger B, et al. Evaluation and Interference Study of Hemoglobin A1c Measures by Turbidimetric Inhibition Immunoassay. Am J Clin Pathol 1998;109(3):274-278. 14 Frank EL, Moulton L, Little RR, et al. Effects of hemoglobin C and S traits on seven glycated hemoglobin methods. Clin Chem 2000;46(6):864-867. 15 Data on file at Roche Diagnostics. 16 Kobold U, Jeppsson JO, Duelffer T, et al. Candidate reference methods for hemoglobin A1c based on peptide mapping. Clin Chem 1997;43:1944-1951. 17 Jeppsson JO, Kobold U, Finke A, et al. Approved IFCC reference method for the measurement of HbA1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002;40:78-89. 18 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32:470-475. 19 Sacks BW, Bruns DE, Goldstein DE, et al. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002;48:436-472. 20 Martina WV, Martijn EG, van der Molen M, et al. β-n-terminal glycohemoglobins in subjects with common hemoglobinopathies: relation with fructosamine and mean erythrocyte age. Clin Chem 1993;39:2259-2265. 21 Weykamp CW, Penders TJ, Muskiet FAJ, et al. Influence of hemoglobin variants and derivatives on glycohemoglobin determinations, as investigated by 102 laboratories using 16 methods. Clin Chem 1993;39:1717-1723. 22 Rohlfing C, Connolly S, England J, et al. Effect of elevated fetal hemoglobin on HbA1c measurements: four common assay methods compared to the IFCC reference method. Clin Chem 2006;52 Suppl 6:A108. 23 Miedema K. Influence of hemoglobin variants on the determination of glycated hemoglobin. Klin Lab 1993;39:1029-1032. 24 International Expert Committee Report on the Role of the A1C Assay in the Diagnosis of Diabetes. Diabetes Care 2009;32(7):1327-1334. 25 Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-385. 26 Junge W, Wilke B, Halabi A, et al. Determination of reference intervals in adults for hemoglobin A1c (HbA1c). Poster presentation 18th International Diabetes Federation Congress, Paris, 2003. 27 Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care 2010;33(1):62-69. 28 American Diabetes Association. Standards of Medical Care for patients with diabetes mellitus. Diabetes Care [Suppl.] 1995;18(1):8-15. 29 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790. 30 Consensus Statement on the Worldwide Standardization of the Hemoglobin A1c Measurement. American Diabetes Association, European Association for the Study of Diabetes, International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine and International Diabetes Federation Consensus Committee. Diabetes Care 2007;30:2399-2400. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá následující symboly a znaky, včetně uvedených v normě ISO 15223 1. CONTENT Obsah soupravy Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. 2013, Roche Diagnostics Objem po rekonstituci nebo smíchání Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com A1C-W 6 / 6

Tina-quant hemoglobin A1c 2. Generace Aplikace pro hemolyzát - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP Informace pro objednání REF CONTENT Analyzátory, na kterých lze cobas c pack(y) použít 04528123 190 Tina-quant Hemoglobin A1c Gen.2 (150 testů) 04528417 190 C.f.a.s. HbA1c (3 2 ml) 05479207 190 PreciControl HbA1c norm (4 x 1 ml) 05912504 190 PreciControl HbA1c path (4 1 ml) 11488457 122 04528328 190 Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c (1000 ml) COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2 (6 10 ml) 07 6850 2 07 6852 9 07 7477 4 07 7478 2 07 6851 0 COBAS INTEGRA 400/400 plus COBAS INTEGRA 800 Česky Systémové informace Multitest A1CH2, test ID 0 047 Test HB H2, test ID 0 147; test A1 H2, test ID 0 247 Poměr RHD2M, test ID 0 548 (dle DCCT/NGSP) Poměr RHI2M, test ID 0 446 (dle IFCC) Profil PA1H2, test ID 0 347. Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení mmol/mol hemoglobinu A1c (IFCC) a % hemoglobinu A1c (DCCT/NGSP) v hemolyzátu připraveném z plné krve na analyzátorech klinické chemie Roche. Měření HbA1c slouží k dlouhodobému monitorování glukózy v krvi u nemocných s diabetem mellitus. Tento test je navíc určen jako pomůcka při diagnostikovaném diabetu a rozpoznání pacientů s rizikem rozvoje diabetu. Souhrn 1,2,3,4,5,6,7,8,9 Hemoglobin (Hb) se skládá ze 4 bílkovinných subjednotek, každá obsahuje část hemu a je červeně zbarveným proteinem v erytrocytech. Jeho hlavní funkcí je transport kyslíku a oxidu uhličitého v krvi. Každá molekula Hb je schopna vázat 4 molekuly kyslíku. Hb se vyskytuje v rozmanitých podskupinách a derivátech. V této heterogenní skupině je HbA1c jedním z glykovaných hemoglobinů, které vznikají připojením různých cukrů na molekulu Hb. HbA1c je vytvářen ve 2 krocích neenzymovou reakcí glukózy s N-terminální aminoskupinou β-řetězce normálního Hb dospělých (HbA). První krok je reverzibilní a vzniká při něm labilní HbA1c. Toto je přeuspořádáno, aby v druhém reakčním kroku vytvořilo stabilní HbA1c. Relativní množství HbA, přeměněného na stabilní HbA1c, se v erytrocytech zvyšuje podle průměrné koncentrace glukózy v krvi. Přeměna na stabilní HbA1c je omezena životností erytrocytů tj. na přibližně 100 až 120 dnů. V důsledku toho odráží HbA1c průměrnou hodnotu krevní glukózy v uplynulých 2 3 měsících. Proto je HbA1c vhodný k dlouhodobému monitorování glukózy v krvi u jedinců s diabetes mellitus. Hladiny glukózy bližší času stanovení mají větší vliv na hladinu HbA1c. 1 Vzájemný vztah mezi HbA1c a průměrnou hodnotou glukózy v krvi v uplynulých 2 až 3 měsících byl analyzován v několika studiích. Dosavadní výsledky lze vyjádřit vztahem: IFCC Standardizace (přepočítaná dle odkazu 8) Odhadovaná průměrná glukóza [mmol/l] = 0.146 HbA1c (mmol/mol) + 0.834 nebo Odhadovaná průměrná glukóza [m] = 2.64 HbA1c (mmol/mol) + 15.03 Standardizace dle DCCT/NGSP 8 Odhadovaná průměrná glukóza [mmol/l] = 1.59 HbA1c (%) - 2.59 nebo Odhadovaná průměrná glukóza [m] = 28.7 HbA1c (%) - 46.7 Riziko diabetických komplikací, jako je diabetická nefropatie a retinopatie, vzrůstá, čím je horší metabolická kontrola. Ve shodě s funkcí indikátoru průměrné hladiny krevní glukózy, lze podle HbA1c předpovídat rozvoj diabetických komplikací u diabetiků. 4,5 Pro monitorování dlouhodobé glykemické kontroly obecně stačí testování každé 3 až 4 měsíce. V určitých klinických stavech, jako např. těhotná diabetička, nebo při zásadní změně léčby, může být vhodné stanovovat HbA1c ve 2 až 4týdenních intervalech. 7 Princip testu 10,11,12 Tato metoda využívá TTAB a) jako detergent v hemolyzační reagencii k eliminaci interference leukocytů (TTAB nelyzuje leukocyty). Předpříprava vzorku odstraňující labilní HbA1c není nutná. Všechny varianty hemoglobinu, které jsou glykované na N-terminálním konci β-řetězce, a které mají oblasti, rozpoznávané protilátkami, shodné s Hb1c, jsou rovněž stanovovány. Metabolický stav diabetického pacienta s uremií nebo nejrozšířenějšími hemoglobinopatiemi (HbAS, HbAC, HbAE) může být tudíž stanoven použitím tohoto stanovení. 13,14 Hemoglobin A1c Stanovení HbA1c je založeno na turbidimetrické inhibici (TINIA) v hemolyzované plné krvi. Vzorek a přidání R1 (pufr/protilátka): Glykohemoglobin (HbA1c) ve vzorku reaguje s protilátkou proti HcA1c za tvorby rozpustného komplexu antigen-protilátka. Jestliže nejsou přítomna na molekule místa pro specifické protilátky proti HbA1c, komplex se nevytváří. Přidání SR (pufr/polyhapten) a zahájení reakce: Polyhapteny reagují s nadbytkem protilátek proti HbA1c za tvorby nerozpustného komplexu protilátka-polyhapten, který může být stanoven turbidimetricky. Hemoglobin Uvolněný hemoglobin v hemolyzovaném vzorku je přeměněn na derivát s charakteristickým absorpčním spektrem, které je bichromaticky změřeno během preinkubační fáze (vzorek + R1) výše uvedené imunologické reakce. V důsledku toho není potřebná samostatná reagencie Hb. Konečný výsledek je vyjádřen jako mmol/mol HbA1c nebo % HbA1c a je vypočítaný z poměru HbA1c/Hb: Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): HbA1c (mmol/mol) = (HbA1c/Hb) 1000 1 / 6 A1C-H

Tina-quant hemoglobin A1c 2. Generace Aplikace pro hemolyzát - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP Protokol 2 (% HbA1c dle DCCT/NGSP): HbA1c (%) = (HbA1c/Hb) 91.5 + 2.15 a) TTAB = Bromid tetradecyltrimetylamonný Reagencie - pracovní roztoky R1 SR Reagencie s protilátkou MES b) pufr: 0.025 mol/l; TRIS c) pufr: 0.015 mol/l, ph 6.2; HbA1c protilátka (ovčí sérum): 0.5 mg/ml; stabilizátory; konzervans Reagencie s polyhaptenem MES pufr: 0.025 mol/l; TRIS pufr: 0.015 mol/l, ph 6.2; HbA1c polyhapten: 8 µg/ml; stabilizátory; konzervans b) MES = kys. 2-morfolinethansulfonová c) TRIS = Tris(hydroxymetyl)-aminometan R1 je v pozici B a SR je v pozici C. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Zacházení s reagenciemi Připraveno k použití Uskladnění a stabilita Reagencie Doba skladování při 2 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus V přístroji při použití při 10 15 C Systém COBAS INTEGRA 800 V analyzátoru při použití při 8 C Hemolyzační reagencie Doba skladování při 2 8 C Systémy COBAS INTEGRA 400/400 plus/800 Použití v přístroji, stojan ISE, uzavřené nádobky Použití v přístroji, multi rack, otevřené nádobky Systém COBAS INTEGRA 800 CTS Použití v přístroji, stojan ISE, otevřené nádobky Čtěte datum exspirace na štítku cobas c packu 4 týdny 4 týdny Viz datum exspirace na štítku nádobky 4 týdny 2 dny 2 dny Při skladování při teplotách pod 3 C může být reagencie zakalená. Zákal nemá vliv na funkci reagencie a zmizí při vyšších teplotách. Z tohoto důvodu se doporučuje vytemperovat reagencie při pokojové teplotě po dobu cca. 10 minut a před použitím řádně promíchat. Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné. Nesrážlivá venózní nebo kapilární krev. Jedinými vhodnými antikoagulanty jsou Li-heparin, K 2 EDTA, K 3 EDTA a fluorid draselný/na 2 EDTA. Stabilita: 15 3 dny při 15 25 C 7 dní při 2 8 C 6 měsíců při ( 15) ( 25) C Zamrazit jen jednou. Po rozmažení důkladně promíchat. Příprava hemolyzátu 1. Ponechte vzorek krve a Hemolyzing Reagent pro Tina quant HbA1c, aby se vytemperovaly na pokojovou teplotu. 2. Mírně promíchejte vzorek ještě těsně před pipetováním, aby erytrocyty tvořily homogenní směs. Buďte opatrní, zabraňte vytvoření pěny. 3. Vzorek nařeďte použitím Hemolyzing Reagent for Tina quant HbA1c (Kat. č. 11488457 122) v poměru 1:101 (1+100) použitím jednoho z následujících pipetovacích schémat. Pipetujte do zkumavky: Hemolyzing Reagent for Tina quant HbA1c: 500 µl vzorek (pacient nebo kontrola): 5 µl nebo Hemolyzing Reagent for Tina quant HbA1c: 1000 µl vzorek (pacient nebo kontrola): 10 µl nebo Hemolyzing Reagent for Tina quant HbA1c: 2000 µl vzorek (pacient nebo kontrola): 20 µl 4. Promíchejte třepačkou nebo opatrným mícháním. 5. Hemolyzát může být použit poté, co se barva roztoku změní z červené na hnědo-zelenou (přibl. 1 2 min). Stabilita hemolyzátu: 15 4 hodiny při 15 25 C 24 hodin při 2 8 C 6 měsíců při ( 15) ( 25) C Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) 1. Hemolyzing Reagent for Tina quant HbA1c, Kat. č. 11488457 122. Tuto reagencii použijte k přípravě hemolyzátu, když není na palubě analyzátoru. Viz výše pro postup předpřípravy vzorku. 2. COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2 for Tina quant HbA1C Gen.2, Kat. č. 04528328 190, systémové ID 07 6851 0. Tuto reagencii použijte pro automatizované ředění kalibrátoru na palubě. Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. Aplikace pro Hb a HbA1c COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Hb HB-H2 R1-S Výpočet první/posl. 17/33 378/659 nm Hb Diluent (H 2 O) Celkový objem 126 µl A1C-H 2 / 6

Tina-quant hemoglobin A1c 2. Generace Aplikace pro hemolyzát - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu HbA1c A1-H2 R1-S-SR 340/659 nm Výpočet první/posl. 33/57 HbA1c Diluent (H 2 O) SR 24 µl 0 µl Celkový objem 150 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu Hb HB-H2 R1-S 378/659 nm Výpočet první/posl. 17/44 Hb Diluent (H 2 O) Celkový objem 126 µl COBAS INTEGRA 800 definice testu HbA1c A1-H2 R1-S-SR 340/659 nm Výpočet první/posl. 44/96 HbA1c Diluent (H 2 O) SR 24 µl 0 µl Celkový objem 150 µl Definice poměru pro mmol/mol HbA1c a výpočet % HbA1c Protokol 1 (mmol/mol HbA1c dle IFCC): Zkrácený název RHI2M (0-446) Rovnice (A1-H2/HB-H2) 1000 mm/m Protokol 2 (% HbA1c dle DCCT/NGSP): Zkrácený název RHD2M (0-548) Rovnice (A1-H2/HB-H2) 91.5 + 2.15 % Použijte předdefinovaný profil (PA1H2, 0 347) pro simultánní zadávání příkazů testů Hb (HB H2) a HbA1c (A1 H2) ze stejného hemolyzátu. Poměr pro HbA1c (mmol/mol HbA1c dle IFCC a % HbA1c dle DCCT/NGSP) se vypočítává automaticky po dohotovení obou testů. Pro duální vykazování obou jednotek mmol/mol HbA1c (IFCC) jakož i % HbA1c (DCCT/NGSP) se prosím ujistěte, že jsou aktivovány oba testy poměru 0 446 (dle IFCC) a 0 548 (dle DCCT/NGSP). Kalibrace Hb Kalibrátor HbA1c Kalibrátor C.f.a.s. HbA1c C.f.a.s. HbA1c Poměr ředění kalibrátoru 1:1, 1:1.67, 1:2, 1:5, 1:25, 0, prováděno automaticky přístrojem Diluent kalibrátoru Typ kalibrace Logit/log 5 Opakování kalibrace Kalibrační interval COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2, Kat. č. 04528328 190 Doporučen duplikát Každou šarži, každých 29 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle schválené IFCC referenční metody pro stanovení HbA1c v lidské krvi 16,17 a může být převedena na výsledky s návazností na výpočet podle DCCT/NGSP. Upozornění Pro tyto aplikace odpovídají hodnoty kalibrátoru C.f.a.s. HbA1c šarži reagencií. Pro každou aplikaci a každou kombinaci šarže kalibrátoru C.f.a.s. HbA1c a šarže reagencií Tina quant HbA1c Gen.2 jsou v příslušném letáku hodnot pro kalibrátor C.f.a.s. HbA1c uvedeny přesné hodnoty kalibrátoru. Zadejte cílové hodnoty kalibrátoru, závislé na šarži a na aplikaci. Používejte pouze příslušné C.f.a.s. HbA1c kalibrátory. COBAS INTEGRA Hemolyzing Reagent Gen.2, 6 x 11 ml, Kat. č. 04528328 190, systémové ID 07 6851 0, musí být v analyzátoru dostupná. Jinak nemůže být kalibrace provedena. Kontrola kvality Kontrola kvality Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci PreciControl HbA1c norm PreciControl HbA1c path doporučeno 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. 3 / 6 A1C-H

Tina-quant hemoglobin A1c 2. Generace Aplikace pro hemolyzát - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP Kontrolní intervaly a limity by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Upozornění Kontroly předpřipravte stejným způsobem jako vzorky. Kontroly HbA1c mají deklaraci pouze pro mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). Pro Hb a HbA1c není deklarace koncentrace dodávána. V důsledku toho je s HbA1c Controls zacházeno jako se vzorky a nejsou zahrnuty do programu Quality Control systému COBAS INTEGRA. Výpočet Hb Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci Hb pro každý vzorek. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). HbA1c Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají koncentraci HbA1c každého vzorku. Pro více informací čtěte Data Analysis v Online Help (analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus/800). Výpočet poměru HbA1c Pro výpočet hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) čtěte prosím části Princip testu a Definice poměru pro mmol/mol HbA1c a výpočet % HbA1c v tomto metodickém listu. Omezení - interference 13,14,18,19,20,21,22 1. Pro diagnostické účely by měly být hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) používány ve spojení s informacemi z dalších diagnostických postupů a klinických nálezů. 2. Test je určen pouze pro precizní a správné stanovení mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). Jednotlivé výsledky koncentrace celkového Hb a HbA1c by neměly být vydávány. 3. Ze zásady musí být při interpretaci jakýchkoliv výsledků HbA1c od pacientů s variantami Hb dáván pozor. Abnormální hemoglobiny mohou ovlivnit poločas červených krvinek nebo in vivo hodnoty glykace. V těchto případech nereflektují ani analyticky správné výsledky stejnou hladinu glykemické kontroly, která by byla očekávána u pacientů s normálním hemoglobinem. 23 HbA1c nesmí být použito pro diagnózu diabetu mellitus při jakémkoliv podezření na přítomnost varianty Hb (např. HbSS, HbCC nebo HbSC) mající vliv na korelaci mezi hodnotou HbA1c a glykemickou kontrolou. 4. Každá příčina zkrácení životnosti erytrocytů nebo pokles průměrného stáří erytrocytů snižuje dobu, po kterou je erytrocyt vystaven působení glukózy s následným poklesem hodnot mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP), ačkoliv může dojít ke zvýšení průměrné hladiny glukózy v daném období. Příčinami zkrácení životnosti erytrocytů může být hemolytická anemie nebo jiná hemolytická onemocnění, homozygotní srpkovitá anemie, těhotenství, nedávná výrazná nebo chronická ztráta krve atd. Obdobně mohou nedávné transfuze krve změnit hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). Tyto okolnosti musí být vzaty v úvahu při posuzování výsledků HbA1c těchto pacientů. Za těchto okolností nesmí být HbA1c použito při diagnostice diabetu mellitus. 5. Glykosylovaný HbF není detekován, jelikož neobsahuje glykosylovaný β řetězec, typický pro HbA1c. HbF je nicméně měřeno ve stanoveních Total Hb, a jako důsledek mohou vzorky obsahující větší množství HbF (> 10 %) být menší než očekávané hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). 13,22 6. Hodnoty mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP) nejsou vhodné pro diagnostiku gestačního diabetu. 24 7. Ve velmi vzácných případech rychle se rozvíjejícího diabetu 1. typu mohou být hodnoty HbA1c opožděné ve srovnání s akutním nárůstem v koncentraci glukózy. Za těchto okolností musí být diabetes mellitus diagnostikován na základě koncentrace glukózy v plazmě a/nebo typických klinických symptomů. 24 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ± 10 % počáteční hodnoty. Ikterus: Bez významných interferencí do koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu 1000 µmol/l nebo 60 m. Lipémie (Intralipid): Analyzátor COBAS INTEGRA 800: Bez významných interferencí do koncentrace Intralipidu 800 m. Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus: Bez významných interferencí do koncentrace Intralipidu 600 m. Mezi koncentrací triglyceridů a zákalem je slabá korelace. Glykemie: Bez významných interferencí do koncentrace glukózy 55.5 mmol/l nebo 1000 m. Odběr nalačno není nutný. Revmatoidní faktory: Žádná interference revmatoidních faktorů do koncentrace 750 IU/mL. Léky: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžných panelů léků zjištěna žádná interference. 25 Ostatní: Protilátky proti HbA1c této soupravy nezaznamenaly křížovou reakci s HbA0, HbA1a, HbA1b, acetyl hemoglobinem, karbamyl hemoglobinem, glykovaným albuminem, labilním HbA1c a HbA1d. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Použití speciálních mycích cyklů je nutné při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA. Pro další pokyny čtěte Návody metod, Úvod, Extra mycí cykly. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vykazováním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry over). Limity a rozmezí Rozsah měření Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus: Hb: 4 35 HbA1c: 0.3 2.6 * *Rozsah měření pro HbA1c leží mezi 0.3 a hodnotou koncentrace nejvyššího standardu. Výše uvedené rozmezí testu je založeno na obvyklé hodnotě kalibrátoru 2.6. Toto odpovídá rozsahu měření 23 197 mmol/mol HbA1c (IFCC) a 4.3 19.5 % HbA1c (DCCT/NGSP) při běžné koncentraci hemoglobinu 13.2. Analyzátor COBAS INTEGRA 800: Hb: 4 35 HbA1c: 0.3 3.4 Toto odpovídá rozsahu měření 23 258 mmol/mol HbA1c (IFCC) a 4.3 24.8 % HbA1c (DCCT/NGSP) při běžné koncentraci hemoglobinu 13.2. Spodní limity měření Spodní detekční limit testu: Hb: 0.5 HbA1c: 0.1 Typický spodní detekční limit pro poměr HbA1c může být vypočítán podle dané koncentrace Hb. Považujeme-li za obvyklou koncentraci Hb 13.2, spodní detekční limit je 8 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 2.9 % HbA1c (DCCT/NGSP). Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní A1C-H 4 / 6

Tina-quant hemoglobin A1c 2. Generace Aplikace pro hemolyzát - Standardizováno podle IFCC; převoditelné na DCCT/NGSP odchylky nad nejnižším standardem (standard 1 + 3 SD, opakovatelnost, n = 21). Očekávané hodnoty Protokol 1 (podle IFCC): 29 42 mmol/mol HbA1c 26 Protokol 2 (podle DCCT/NGSP): 4.8 5.9 % HbA1c 26 Toto referenční rozmezí bylo získáno měřením 474 dobře popsaných zdravých jedinců bez diabetu mellitus. Hladiny HbA1c vyšší než horní hranice referenčního rozmezí indikují hyperglykémii v průběhu uplynulých 2 až 3 měsíců nebo déle. Podle doporučení American Diabetes Association jsou pro diagnostiku diabetu mellitus vhodné hodnoty nad 48 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 6.5 % HbA1c (DCCT/NGSP). 24,27 U pacientů s hodnotami HbA1c v rozmezí 39 46 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 5.7 6.4 % HbA1c (DCCT/NGSP) existuje riziko rozvoje diabetu. 24,27 Hladiny HbA1c mohou u špatně kontrolovaných diabetiků dosáhnout 195 mmol/mol (IFCC) nebo 20 % (DCCT/NGSP) nebo vyšší. Terapeutický zásah je doporučován u hladin nad 64 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 8 % HbA1c (DCCT/NGSP). Diabetický pacient s hladinou HbA1c pod 53 mmol/mol HbA1c (IFCC) nebo 7 % HbA1c (DCCT/NGSP) splňuje cíle Americké asociace pro Diabetes. 19,28 Hladiny HbA1c nižší než stanovené referenční rozmezí mohou značit dřívější epizody hypoglykémie, přítomnost variantních Hb nebo zkrácení životnosti erytrocytů. Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního postupu s opakovatelností (n = 21) a mezilehlou precizností (1 alikvot na sérii, 1 série denně, 21 dní). Získány byly následující výsledky (údaje dle hodnot DCCT/NGSP): Průměr % HbA1c Level 1 Level 2 VK % Průměr % HbA1c Opakovatelnost 5.5 1.0 10.6 0.6 Mezilehlá preciznost 5.3 1.0 10.7 0.8 Porovnání metod Hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 400 použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (y) byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (aplikace s hemolyzátem) na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Vzorky byly měřeny jednotlivě. Analyzátor COBAS INTEGRA 400 Počet vzorků (n) = 69 y = 1.001x + 0.050 % y = 0.995x + 0.069 % τ = 0.957 r = 0.997 SD (md 95) = 0.183 Sy.x = 0.106 Hodnoty byly v rozmezí od 5.20 do 12.9 % HbA1c (DCCT/NGSP). Hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (y) byly porovnány VK % s hodnotami stanovenými použitím systémové reagencie COBAS INTEGRA Tinaquant Hemoglobin A1c Gen.2 (aplikace s hemolyzátem) na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (x). Vzorky byly měřeny jednotlivě. Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Počet vzorků (n) = 100 y = 0.892x + 0.583 % y = 0.907x + 0.476 % τ = 0.953 r = 0.996 SD (md 95) = 0.287 Sy.x = 0.128 Hodnoty byly v rozmezí od 5.04 do 13.2 % HbA1c (DCCT/NGSP). Hodnoty % HbA1c (DCCT/NGSP) pro vzorky lidské krve získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 CTS reagencií COBAS INTEGRA Tina quant Hemoglobin A1c Gen.2 (y) byly porovnány s hodnotami stanovenými na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 (aplikace s hemolyzátem) (x). Vzorky byly měřeny jednotlivě. Analyzátor COBAS INTEGRA 800 CTS Počet vzorků (n) = 50 y = 0.987x + 0.577 % y = 1.076x + 0.124 % τ = 0.714 r = 0.982 SD (md 95) = 0.357 Sy.x = 0.180 Hodnoty byly v rozmezí od 4.85 do 13.4 % HbA1c (DCCT/NGSP). Navíc bylo ještě provedeno srovnání s komerčně dostupnou HPLC metodou. Metoda HLPC byla standardizována v souladu s DCCT (Diabetes Control and Complications Trial). 3,4 Metoda HLPC Počet vzorků (n) = 60 y = 1.005x + 0.053 % y = 1.004x + 0.072 % τ = 0.956 r = 0.997 SD (md 95) = 0.208 Sy.x = 0.104 Hodnoty byly v rozmezí od 4.9 do 12.1 % HbA1c (DCCT/NGSP). Analytická specifičnost Deriváty Hb Labilní HbA1c (pre-hba1c), acetyl Hb a karbamyl Hb nemají vliv na výsledky stanovení. Varianty Hb Vzorky s větším obsahem HbF (> 10 %) mohou poskytovat menší než očekávané výsledky HbA1c. Upozornění: Podle souhlasného stanoviska organizací American Diabetes Association (ADA), European Association for the Study of Diabetes (EASD), International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) a International Diabetes Federation (IDF) by mely být výsledky hlášeny souběžně, jak v mmol/mol HbA1c (IFCC) a % HbA1c (DCCT/NGSP). 30 Navíc může být vykazována HbA1c odvozená odhadovaná průměrná koncentrace glukózy, která může být vypočítána dle rovnic daných v části "Souhrn" tohoto letáku metod. Dřívější hodnoty % HbA1c (IFCC) nesmí být použity kvůli riziku záměny / nesprávné interpretace s hodnotami % HbA1c (DCCT/NGSP). Odkazy 1 Goldstein DE, Little RR, Lorenz RA, et al. Tests of glycemia in diabetes. Diabetes Care 1995;18:896-909. 2 Goldstein DE, Little RR. More than you ever wanted to know (but need to know) about glycohemoglobin testing. Diabetes Care 1994;17:938-939. 5 / 6 A1C-H