Rapid-VIDITEST RSV Blister (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku Respiračního syncytiálního viru z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol.s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, ČR, tel: +420 261 090 565 POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST RSV Blister je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenů Respiračního syncytiálního viru. Je určen ke stanovení antigenů z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů. ÚVOD: Respirační syncytiální virus (RSV) je nejčastějším původcem bronchitidy a pneumonie u dětí do 1 roku. Onemocnění obvykle začíná horečkou, rýmou, kašlem a dušností. Závažná infekce dolních cest dýchacích se může objevit v kterémkoliv věku, zvláště mezi staršími lidmi a osobami s oslabeným srdcem, plícemi a imunitním systémem. RSV se šíří prostřednictvím respiračních sekretů, při blízkém kontaktu s nakaženou osobou nebo s kontaminovanými předměty. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST RSV Blister je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenů Respiračního syncytiálního viru. Na testovacích zónách povrchu blisteru jsou navázány myší monoklonální protilátky proti virovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-rsv myší monoklonální protilátky červená mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. OBSAH SOUPRAVY: 1
- Testovací blistery - Sterilní odběrové tampóny - Roztok B (ředicí roztok pro vzorky) - Testovací zkumavky - Jednorázové plastové pipety - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky nosních výtěrů: Vzorky odebírejte sterilním vatovým tampónem z jedné nosní dírky. Zasuňte vatový tampón asi 3 cm hluboko a rotačním pohybem tampónu otřete stěnu nosní dírky. Test by měl být proveden co nejdříve po výtěru. Vzorky nosních výplachů a aspirátů Dospělí pacienti: Do nosu vložte irigátor a celou dutinu důkladně propláchněte fyziologickým roztokem (2,5ml). Irigátorem otáčejte tak, aby se tekutina dostala skutečně do všech míst. Předkloňte hlavu pacienta, aby mohl mukózní roztok z dírky dobře vytékat. Vzorek zachyťte do čisté odběrové nádoby. Totéž opakujte i pro druhou nosní dírku. Děti: Fyziologický roztok vleže nakapejte do nosu, odsajte vzorek výplachu a přeneste do čisté odběrové nádoby. Stejný postup opakujte pro obě nosní dírky. Vzorky by měly být zpracovány co nejdříve po odběru. Před testováním mohou být skladovány v lednici při 2-4 C po dobu 8 hodin. PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte blistery, vzorky nosního výtěru nebo výplachu a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Postup A: pro vzorky nosních výtěrů 1. Do testovací zkumavky aplikujte 15 kapek roztoku B (1). Vložte do ní odběrový tampon. 2. Krouživým pohybem tamponu důkladně roztok promíchejte. Třete tampon o stěnu zkumavky a nakonec z něj stlačením plastové zkumavky vytlačte co nejvíce tekutiny(2). Kvalita testu závisí na tom, jak dobře bude vzorek z tamponu extrahován. Tampon likvidujte jako infekční odpad. 3. a) Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. Blister ponechte na spodní části hliníkové fólie a položte jej na 2
vodorovnou podložku. Na bílý konec blisteru naneste 4-5 kapek roztoku z testovací zkumavky. nebo b) Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. Vyjměte blister z obalu a ponořte ho vertikálně bílým koncem do testovací zkumavky. Hladina roztoku ve zkumavce nesmí přesáhnout hranici označenou šipkami. 4. Na každý vzorek použijte novou pipetu. 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). 3.a. Přidejte 4-5 kapek 3.b. (1) Přidejte 15 kapek reagencie B (2) Vložte tampón a extrahujte z něj maximum tekutiny Vyčkejte 10 minut Postup B: pro vzorky nosních výplachů a aspirátů: 1. Do testovací zkumavky aplikujte 6 kapek nosního výplachu (1) nebo aspirátu. 2. Přidejte do zkumavky 3 kapky roztoku B (2). Opakovaným nasáváním roztoku do pipety směs důkladně promíchejte (3). 3. Dále postupujte podle předchozích instrukcí (postup pro vzorky z nosních výtěrů) 3.a. Přidejte 4-5 kapek 3.b. (1) Přidejte 6 kapek nosního aspirátu (2) Přidejte 3 kapky reagencie B (3) Promíchejte směs opakovaným nasáváním do pipety Vyčkejte 10 minut 3
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku. Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá výsledková zóna. Úsek okénka dále od bílého konce se nazývá kontrolní zóna. Kontrolní zóna Výsledková zóna Zelená Červená Červená Zóna pro nanesení vzorku RSV pozitivní RSV negativní Neplatný Negativní: V kontrolní zóně se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna zůstane čistá. RSV Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně se objeví také červená linka ve výsledkové zóně. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené linky ve výsledkové zóně závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: - Test musí proběhnout do 2 hodin od otevření zataveného obalu. - Tento test slouží pouze k pravděpodobné infekce Respiračním syncytiálním virem. Potvrzení infekce musí být provedeno lékařem poté, co byly vyhodnoceny všechny klinické a laboratorní nálezy. - Rapid-VIDITEST RSV Blister může být použit pouze pro nosní výtěry, výplachy a aspiráty. Výsledky při použití výtěrů z jiných částí těla nebo při použití jiných vzorků, jako jsou sliny, hlen nebo moč, nemohou být uznány platnými. Kvalita testu záleží na kvalitě odebraného vzorku. Vzorky proto odebírejte s náležitou přesností. - Při použití nekvalitních vzorků, nebo vzorků s příliš nízkou koncentrací antigenu může dojít k falešné negativitě výsledku. - Pakliže je vzorek příliš mukózní, nemusí dojít k jeho správné vzlínavosti. V tomto případě přidávejte přímo ke vzorku na bílém konci blisteru diluent (Roztok B), dokud neuvidíte tekutinu vzlínat po membráně v testovací a kontrolní oblasti blisteru. ÚČINNOST TESTU: Citlivost V souladu s instrukcemi k použití této sady byly testovány různé extrakty z virových kultur v různých ředěních. Detekce RSV vykazovala ve srovnání s jinými rychlými komerčními testy >95% citlivost. Specifita Použití myších monoklonálních protilátek v Rapid-VIDITEST RSV Blister zaručuje při detekci antigenů RSV vysoký stupeň specifity. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2-30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí exspirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. Na každý vzorek musí být použit nový odběrový tampón - Test nepoužívejte, pokud je hliníkový obal porušený - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5
REFERENCE: 1. ANN R. FALSEY and EDWARD E. WALSH. Respiratory Syncytial Infection in Adults, Clinical Microbiology Reviews, July 2000, Vol. 13, No.3, p. 371-384. 2. DIANE C. HALSTEAD, SANDRA TODD, and GALE FRITCH; Evaluation of Five Methods for Respiratory Syncytial Virus Detection Journal of Clinical Microbiology, May 1990, Vol. 28, No. 5; p. 1021-1025. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Čtěte návod k použití Uchovejte v suchu Teplotní omezení Datum exspirace Číslo šarže (LOT) Katalogové číslo Obsahuje dostatečné množství surovin pro <n> testů Výrobce Pouze pro ověření Poslední revize tohoto návodu: 07/2010 6