Rapid-VIDITEST Listeria Card (Jednokrokový kazetový test pro detekci Listeria monocytogenes.) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec u Prahy, 252 42 Jesenice, Česká republika, tel: +420 261 090 565, fax +420 261 090 566, web: www.vidia.cz, e-mail: info@vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Listeria Card je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Listeria monocytogenes ve vzorcích stolice, za účelem zjištění listerióz u infikovaných osob. ÚVOD: Listeria monocytogenes je malá, gram-pozitivní bakterie, která může růst v anaerobních i aerobních podmínkách. Obecně se vyskytuje v životním prostředí, v půdě, rozkládající se vegetaci a vodě, může být součástí střevní mikroflóry mnoha savců včetně zdravých dospělých osob. K počátečním příznakům infekce patří nespecifické symptomy podobné chřipce, nevolnost, zvracení, křeče, průjem a horečka. Existuje jen málo klinických příznaků, které jsou specifické pro listeriózy. Proto je třeba, aby lékař zvážil různé možné příčiny infekce včetně virových infekcí a dalších bakteriálních infekcí, které mohou vyvolat sepsi nebo meningitidu. Příznaky mohou nastat kdykoli od 2 do 70 dnů po konzumaci kontaminované potravy. Vyjímkou je přenos z matky na plod, kdy většina případů listerióz začíná požitím kontaminované potravy. U většiny zdravých dospělých osob a dětí má listerióza mírný až středně těžký průběh. U lidí s poruchou imunitního systému je mnohem vyšší riziko závažných, život-ohrožujících forem listerióz. Rapid-VIDITEST Listeria Card poskytuje rychlou detekci bakterie Listeria monocytogenes přímo ze vzorku stolice. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Listeria Card je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) ve vzorcích stolice. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky, které rozpoznají tento antigen. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-l. monocytogenes protilátky červená mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - testovací kazety - odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při +2 až +10 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odoberte malé množství vzorku stolice (cca 100mg) (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Zkumavku důkladně promíchejte za účelem dobré homogenizace vzorku (3). d) Při stanovení vzorku z tekuté stolice odeberte 100µL vzorku do ředicího roztoku. 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte konec špičky zkumavky (obr. 4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Listeria Card z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 μl) naředěného vzorku (obr. 5). 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Červená Červená Negativní Pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu listeriózy. Potvrzení diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu. ÚČINNOST TESTU: Detekční limit: Detekční limit testu je 6.25x 10 4 /ml bakterií Listeria monocytogenes Citlivost a Specifita: Byly otestovány vzorky stolice od 32 pacientů se stejnými symptomy. Všechny pozitivní vzorky byly testovány Rapid-VIDITEST Listeria Card testem a porovnány s výsledky získanými při kultivaci. Výsledky vykazovaly > 99% shodu v citlivosti i specifitě. Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST Listeria Card zaručuje vysoký stupeň specificity pro detekci těchto bakterií. Protilátky použité k vyhodnocení tohoto testu rozpoznají epitopy přítomné v antigenu, který se nalézá ve vzorku stolice pacienta, stejně dobře jako z bakteriálních kultur in vitro. Křížová reaktivita: Ke stanovení křížové reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST Listeria Card. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými střevními patogeny, dalšími organismy a někdy přítomnými látkami ve stolici (H. pylori, Rotavirus, Adenovirus, Escherichia coli O:157, Salmonella, Astrovirus). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy - test nepoužívejte jestliže je obal poškozen - během testu nejezte, nepijte a nekuřte, dodržujte Správnou laboratorní praxi, používejte ochranný oděv a jednorázové rukavice - test musí být proveden do dvou hodin od otevření obalu 5
REFERENCE: 1. BOTTELDOORN N, et al. Microbiological and molecular investigation of an increase of human listeriosis in Belgium, 2006-2007. Euro Surveill. 2010;15(6):pii=19482. 2. BORTOLUSSI, R. Listeriosis: a primer. CMAJ, October, 2008 Vol 179(8), pp 795-797. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 11/2010 6