Rapid-VIDITEST Crypto (Jednokrokový test pro kvalitativní detekci antigenu Cryptosporidia) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Cryptosporidium je rychlý imunochromatografický test pro kvalitativní detekci antigenu Cryptosporidium parvum ve vzorcích lidské stolice pro diagnostiku kryptosporidiózy. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Kryptosporidióza je průjmové onemocnění způsobené mikroskopickými parazity rodu Cryptosporidium. Parazit žije ve střevě a prochází do stolice. Je chráněn vnějším obalem umožňujícím dlouhodobé přežívání mimo organismus hostitele a způsobujícím vysokou rezistenci k dezinfekčním prostředkům na bázi chlóru. Onemocnění i parazit sám je obvykle označován jako Krypto. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Cryptosporidium je kvalitativní imunochromatografický test pro detekci antigenu Cryptosporidia ve vzorcích lidské stolice. Na testovacích zónách membrány testu jsou navázány protilátky proti antigenům Cryptosporidia. V průběhu testování vzorek reaguje s částicemi potaženými anti-cryptosporidiovými protilátkami, jež byly zasušeny na membráně v místě aplikace vzorku. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami ve výsledkové zóně, což se projeví jako červená linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) slouží jako vnitřní kontrola reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety/blistery - Zkumavky na vzorky obsahující odběrovou tyčinku a ředicí roztok - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - Nádoba na sběr vzorků - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte odpovídající množství (1-2 g nebo ml v případě tekutého vzorku) vzorku stolice do čistých a suchých odběrových nádob, neobsahujících žádná ochranná nebo transportní média. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1 2 dny před testováním v chladničce (+2 až +4 C). V případě delšího skladování by se měly vzorky uchovávat zmrazené při cca -20 C, avšak maximálně 1 rok. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte. Ujistěte se, že vzorky nebyly upravovány pomocí rozpouštědel obsahujících formaldehyd nebo jeho deriváty. POSTUPY: Zpracování vzorků stolice: a) Pro každý vzorek použijte vlastní odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředícím rozokem (1) b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte dvakrát malé množství vzorku stolice (cca 150 mg) (2). Vraťte víčko s tyčinkou do zkumavky, zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředícího roztoku. V případě tekutého vzorku napipetujte 150 l do odběrové zkumavky s pufrem. c) Důkladně promíchajte obsah zkumavky za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, resp.blister, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. Postup pro kazetu (Card): 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte špičku víčka zkumavky (4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Cryptosporidium z obalové fölie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 l) naředěného vzorku (5). Vyvarujte se aplikace pevných částic stolice. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
Postup pro blister: Pro provedení testu můžete zvolit postup označený A nebo B. A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister 1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou fólii v označeném místě. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky. 3. Těsně před použitím vyjměte blister Rapid-VIDITEST Cryptosporidium z obalové fólie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a blister. 4. Aplikujte přesně 5 kapek (150 l) naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec blisteru (zóna pro aplikaci vzorku sample region) (4). 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem. B. Ponořením blisteru do zkumavky 1. Po vytemperování blisteru otevřete obalovou fólii v označeném místě. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky. 3. Přeneste 5-10 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky (5). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem. INTERPRETACE VÝSLEDKU: KAZETA Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková-test zóna). 4
Zelená Červená Červená Negativní Cryptosporidium pozitivní Neplatný Neplatný BLISTER Kontrolní zóna Výsledková zóna Zelená Červená Červená Zóna pro nanesení vzorku Cryptosporidium pozitivní Negativní Neplatný 5
Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. To může znamenat infekci způsobenou parazitem Cryptosporidium. Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka, a to bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo zkáza/stárnutí reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledků: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně, tímto testem nelze množství antigenu kvantitativně stanovit a ani hodnotit vzestup nebo pokles koncentrace v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Souprava Cryptosporidium může indikovat pouze přítomnost parazita ve vzorku (kvalitativní detekce) a může být použita pouze pro detekci antigenu Cryptosporidia ve vzorcích stolice. Testem nelze stanovovat kvantitativní hodnoty nebo rychlost nárůstu koncentrace antigenu. 2. K testu použijte jenom čerstvé nebo čerstvě rozmražené nekonzervované a nefixované vzorky (vzorky nesmí obsahovat formaldehyd ani jeho deriváty). 3. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test. 4. Je-li výsledek testu negativní a klinické symptomy přesto přetrvávají, doporučuje se další vyšetření za použití jiných klinických metod. Negativní test nevylučuje pravděpodobnost kryptosporidiózy. 5. Po jednom týdnu trvající infekce počet parazitů ve stolici klesá a tím se snižuje reaktivita vzorku. Proto by vzorky měly být odebrány v průběhu jednoho týdne od nástupu příznaků. 6. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost parazitární infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 7. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. OČEKÁVANÉ HODNOTY: Cryptosporidium způsobuje rozsáhlé vodou přenášené epidemie gastrointestinálních onemocnění, se symptomy jako jsou průjem, nevolnost anebo žaludeční křeče. Lidé s vážně oslabeným imunitním systémem (tedy vážně imunokompromitovaní) jsou náchylní vykazovat vážnější a úpornější symptomy než zdraví jedinci. 6
ÚČINNOST TESTU: Citlivost a specificita: Byly testovány vzorky stolice (Cryptosporidium pozitivních a negativních, které byly zároveń testovány mikroskopicky). Vzorky pocházely od hospitalizovaných pacientů. Výsledky při použití Crypto ukazují: - >99% citlivost a - >99% specificitu Vzorky byly ověřovány mikroskopickými technikami. Zkřížená reaktivita Byla provedena vyhodnocení pro stanovení možné zkřížené reaktivity souprav Rapid- VIDITEST Cryptosporidium. Nebyla nalezena žádná zkřížená reaktivita s běžnými gastrointestinálními parazity příležitostně se vyskytujícími ve stolici. - Entamoeba hystolitica - Giardia lamblia SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Různé šarže soupravy Rapid-VIDITEST Cryptosporidium byly vystaveny 18 cyklům měnící se teploty a vlhkosti (od +2ºC do +40º C/90% RH) v klimatizované místnosti po dobu 4 dnů. Po této době byly soupravy použity ke stanovení vlivu stárnutí na citlivost k přípravku s referenčním standardem antigenu Cryptosporidium. Soupravy Rapid-VIDITEST Cryptosporidium si uchovávají své vlastnosti i po expozici těmto extrémním teplotním podmínkám. Stabilita celé soupravy je za daných podmínek skladování 24 měsíců. Zmražování nebo skladování v chladničce neovlivňuje účinnost testu Rapid-VIDITEST Cryptosporidium. Avšak ředící pufr pro vzorky nesmí být zmražován a musí být skladován při teplotě +2ºC - +8ºC nebo při pokojové teplotě. Teplotní rozmezí pro skladování je mezi +2 až +30ºC. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro diagnostiku in vitro - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - testovací souprava musí do doby použití zůstat ve vzduchotěsné fólii, pokud byla fólie poškozena, testovací soupravu nepoužívejte. - řiďte se pokyny Správné laboratorní praxe (GLP), používejte ochranný oblek, rukavice na jedno použití, nejezte, nepijte nebo nekuřte v prostoru pracoviště. - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy - test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsné fólie. 7
REFERENCE: - Hill DR, Nash TE. Intestinal Flagellate and Ciliate Infections. In: Guerrant RL, Walker DH, Weller PF, eds. Tropical Infectious Diseases. Principles, Pathogens & Practice. 2nd ed. Elsevier, Philadelphia. 2006:984-8. - Copue S, Delabre K, Pouillot R et al. Detection of Cryptosporidium, Giardia and Enterocytozoon bieneusi in surface water, including recreational areas: a one year prospective study: FEMS Immunol Med Microbiol. 2006; 47:351-9. POUŽITÉ SYMBOLY: Výrobce Číslo šarže (LOT) Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 8