Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Cryptosporidium parvum a Giardia lamblia) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Cryptosporidium parvum a/nebo Giardia lamblia ve stolici. ÚVOD: Giardia a Cryptosporidium jsou paraziti nacházející se ve vodě. Způsobují střevní onemocnění giardiózu a kryptosporidiózu. Tyto infekce jsou nejčastější příčinou nemocí z vody (oba paraziti se nacházejí v pitné vodě a vodě pro rekreační účely) u člověka. Giardióza je průjmové onemocnení, které způsobuje malý parazit Giardia lamblia (znám také jako Giardia intestinales nebo Giardia duodenalis). Je-li zvíře nebo člověk infikován Giardií, parazit žije ve střevě a dál prochází do stolice. Parazit je chráněn vnějším obalem (cysta) a může přežít po dlouhou dobu mimo tělo a ve vnějším prostředí. Nejčastějšími symptomy giardiózy jsou: průjem, řídká nebo vodová stolice, křeče žaludku a nevolnost. Infekce parazitem Cryptosporidium parvum je nejčastější příčinou přetrvávajících průjmových onemocnění v rozvojových krajinách. Cryptosporidium je vysoce infekční střevní patogen a infekční stádium parazita je přenášeno fekálně-orální cestou. Příznaky kryptosporidiózy jsou vodnatý průjem, křeče žaludku, ztráta váhy, nevolnost a někdy horečka. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení antigenů parazitů Cryptosporidium parvum a Giardia lamblia ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány protilátky proti těmto antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-cryptosporidium protilátky červená mikrosféra a anti-giardia protilátky modrá mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevné linky. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - Nádoba na sběr vzorků - Zkumavky nebo lahvičky - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout hned po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při 2 až 10 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (stool collection tube) a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice, asi 150 mg (obr.1). V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 150 μl a pipetujte do odběrové zkumavky. 2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 2). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 3). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky naředěného vzorku (obr. 4). Vyhněte se aplikaci tuhých částic s tekutinou. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Červená Modrá Zelená Červená Modrá Červená Modrá Negativní Crypto-Giardia Giardia Crypto Neplatný Neplatný Neplatný Pozitivní Pozitivní Pozitivní Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Pouze Cryptosporidium Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Pouze Giardia Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také modrá linka ve výsledkové zóně T. Crypto-Giardia Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví obě barevné linky tedy červená a modrá zároveň ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené nebo modré linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené nebo modré barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. 4
PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. K testu použijte jenom čerstvé nebo čerstvě rozmražené nekonzervované a nefixované vzorky. 3. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test. 4. Po jednom týdnu trvající infekce počet parazitů ve stolici klesá a tím se snižuje reaktivita vzorku. Proto by vzorky měly být odebrány v průběhu jednoho týdne od nástupu příznaků. 5. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost parazitární infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 6. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. ÚČINNOST TESTU: Citlivost a specificita: Byly testovány vzorky stolice (Giardia a Cryptosporidium pozitivních a negativních testovaných mikroskopicky) od pacientů z lokální nemocnice ve Španělsku. Sensitivita pro Rapid-VIDITEST Crypto Giardia pro Giardia byla >99% a pro Cryptosporidium >99%; specificita pro Giardia byla >99% a pro Cryptosporidium >99%. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5
REFERENCE: 1. MARSHALL, M.M., ET AL., Waterborne Protozoan Pathogens, Clinical Microbiology Review, Jan. 1997, pp 67/85. 2. DYLAN R., PILLAI AND KEVIN C. KAIN, Immunochromatographic Strip-Based Detection of Entamoeba hystolitica-e. dispar and Giardia lamblia Coproantigen. Journal of Clinical Microbiology, Sept. 1999, Vol. 37, No 9, p. 3017-3019. 3. LYNNE S. GARCIA et. Al., Commercial Assay for Detection of Giardia lamblia and Cryptosporidium parvum Antigens in Human Fecal Specimens by Rapid Solid-Phase Qualitative Immunochromatography, Journal of Clinical Microbiology, Jan. 2003, Vol. 41, No. 1, p. 209-212. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6