METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví

Podobné dokumenty
Metody vyšetření imunity

Metody vyšetření imunity

Imunologické metody fagocytóza, stanovení oxidačního metabolismu, chemiluminiscence, baktericidní test

Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit

Nové metody v průtokové cytometrii. Vlas T., Holubová M., Lysák D., Panzner P.

Mnohobarevná cytometrie v klinické diagnostice

Aplikace průtokové cytometrie v klinické imunologii a hematologii

Průtoková cytometrie Flow Cytometry

Principy a instrumentace

Protinádorová imunita. Jiří Jelínek

Specifická imunitní odpověd. Veřejné zdravotnictví

Marcela Vlková Jana Nechvátalová. FN u sv. Anny v Brně LF MU Brno

Progrese HIV infekce z pohledu laboratorní imunologie

Fagocytóza je proces pohlcení a degradace částic větších než 0,5 µm.

laboratorní technologie

Nespecifické složky buněčné imunity. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol

Intracelulární detekce Foxp3

Nastavení metod pro imunofenotypizaci krevních. EXBIO Praha, a.s.

Obsah. Seznam zkratek Předmluva k 5. vydání... 21

Obsah. Seznam zkratek Předmluva k 6. vydání... 23

laboratoři i s podobnými záhadami?

IMUNOMUDULAČNÍ AKTIVITY IZOTONICKÉHO A HYPERTONICKÉHO ROZTOKU QUINTON

Václav Hořejší Ústav molekulární genetiky AV ČR. IMUNITNÍ SYSTÉM vs. NÁDORY

Nespecifické složky buněčné imunity. M.Průcha

Přínos metody ELISPOT v diagnostice lymeské boreliózy

Využití mnohobarevné průtokové cytometrie pro vyšetření lymfocytárních subpopulací Jana Nechvátalová

DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách

ZÁVĚREČNÝ PROTOKOL O TESTOVÁNÍ BIOAKTIVNÍCH VLASTNOSTÍ LÁTKY CYTOPROTECT

Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví

Průtoková cytometrie

Co jsou imunodeficience? Imunodeficience jsou stavy charakterizované zvýšenou náchylností k infekcím

Proteinové znaky dětské leukémie identifikované pomocí genových expresních profilů

Imunitní systém.

F l u o r e s c e n c e

Mimodřeňová expanze plazmocytů do CNS u mnohočetného myelomu

1. Definice a historie oboru molekulární medicína. 3. Základní laboratorní techniky v molekulární medicíně

Vybrané imunologické metody

Praktický kurz Praktický kurz monitorování apoptózy a autofágie u nádorových prostatických buněk pomocí průtokové cytometrie

Fluorescenční mikroskopie

OBRANNÝ IMUNITNÍ SYSTÉM

Interpretace výsledků měření základních lymfocytárních subpopulací očima (průtokového J ) cytometristy a klinického imunologa

SEZNAM LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ

Imunitní odpověd - morfologie a funkce, nespecifická odpověd, zánět. Veřejné zdravotnictví

Helena Langhansová. 30. listopadu 2011

Téma: Testy životaschopnosti a Počítání buněk

Polychromatická cytometrie v hemato-onkologii

Jana Nechvátalová Fakultní nemocnice u sv. Anny v Brně

PRŮTOKOVÁ CYTOMETRIE - PERSPEKTIVNÍ ALTERNATIVA V ANALÝZE MIKROBIOLOGICKÝCH UKAZATELŮ KVALITY VOD

Funkce imunitního systému. Imunodefekty. Biomedicínská technika a bioinformatika

Základní vyšetření likvoru

ONLINE BIOSENZORY PŘI HLEDÁNÍ KONTAMINACE PITNÉ VODY

NÁLEZ DVOJITĚ POZITIVNÍCH T LYMFOCYTŮ - CO TO MŮŽE ZNAMENAT? Ondřej Souček Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice Hradec Králové

Ing. Martina Almáši, Ph.D. OKH-LEHABI FN Brno, Babákova myelomová skupina při Ústavu patologické fyziologie, LF MU, Brno

Flowcytometrie u MG. - zasedání pracovní skupiny. Lucie Kovářová a kol. OKH, FN Brno

Funkce imunitního systému

VYUŽITÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE PRO DETEKCI ÚČINNOSTI FILTRACE BAKTERIÍ V PROCESECH ČIŠTĚNÍ ODPADNÍCH VOD

Polychromatická cytometrie - setup experimentu

Přístroje v hematologické laboratoři

Jak analyzovat monoklonální gamapatie

Změny v parametrech imunity v průběhu specifické alergenové imunoterapie. Vlas T., Vachová M., Panzner P.,

Specifická imunita. Ond!ej Beran. Laborato! AIDS a bun"#né imunologie III. klinika infek#ních a tropick$ch nemocí 1. FK UK a FN Na Bulovce

Využití průtokové cytometrie při monitorování pacientů na biologické léčbě

T lymfocyty. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. Ústav imunologie 2.LF UK, FN Motol

III/2- Inovace a zkvalitnění výuky prostřednictvím IVT

Zhoubné nádory druhá nejčastější příčina úmrtí v rozvinutých zemích. Imunologické a genetické metody: Zlepšování dg. Zlepšování prognostiky

VK obecně o akreditaci, důležité kapitoly normy ISO MV obecně o validaci a verifikaci Marcela Vlková ÚKIA, FN u sv.

Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky

CZ.1.07/2.4.00/

KAZUISTIKY V BUNĚČNÉ IMUNOLOGII. UŽIVATELSKÉ SETKÁNÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE BECKMAN COULTER Ing. Pavla Plačková

LRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 3. TESTY ŽIVOTASCHOPNOSTI A POČÍTÁNÍ BUNĚK

IMUNOLOGIE: VELKÝ OBOR OD MOLEKUL K PACIENTŮM CCA 20 NOBELOVÝCH CEN

Zoologická mikrotechnika - FLUORESCENČNÍ MIKROSKOPIE

Pavlína Tinavská Laboratoř imunologie, Nemocnice České Budějovice

PREZENTACE ANTIGENU A REGULACE NA ÚROVNI Th (A DALŠÍCH) LYMFOCYTŮ PREZENTACE ANTIGENU

Výskyt MHC molekul. RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. ajor istocompatibility omplex. Funkce MHC glykoproteinů

SKANÁ imunita. VROZENÁ imunita. kladní znalosti z biochemie, stavby membrán n a fyziologie krve. Prezentace navazuje na základnz

RNDr. Ivana Fellnerová, Ph.D. Katedra zoologie, PřF UP Olomouc

Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomu

Metody separace buněk Funkční testy lymfocytů. RNDr. Jan Lašťovička, CSc. RNDr. Daniela Rožková, PhD. Ústav imunologie 2.

Modul IB. Histochemie. CBO Odd. histologie a embryologie. MUDr. Martin Špaček

Interpretace serologických výsledků. MUDr. Pavel Adamec Sang Lab klinická laboratoř, s.r.o.

Metody testování humorální imunity

NOVÝCH CHIRURGICKÝCH TECHNOLOGIÍ RUSKÁ FEDERACE - MOSKVA

Využití a princip fluorescenční mikroskopie

IMUNOGENETIKA I. Imunologie. nauka o obraných schopnostech organismu. imunitní systém heterogenní populace buněk lymfatické tkáně lymfatické orgány


Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie

Podrobný seznam vyšetření - imunologie

Imunofenotypizace leukemií z kostní dřeně, periferní krve, výpotku a mozkomíšního moku průtokovou cytometrií

Laboratorní diagnostika poruch fagocytózy

Stanovení cytokinového profilu u infertilních žen. Štěpánka Luxová 2. ročník semináře reprodukční medicíny

Metody testování humorální imunity

Imunitní systém člověka. Historie oboru Terminologie Členění IS

Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha

Teorie protinádorového dohledu Hlavní funkcí imunitního systému je boj proti infekcím

Proč jsme zavedli cytometrické vyšetření uzlin. Tomáš Zajíc Oddělení klinické mikrobiologie a imunologie KNL a.s.

RNDr K.Roubalová CSc.

1 Fagocytóza a metody jejího sledování

MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200

Transkript:

METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY Veřejné zdravotnictví

METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY průtoková cytometrie metody stanovení funkční aktivity lymfocytů testy fagocytárních funkcí

Průtoková cytometrie analýza jednotlivých buněk v suspenzi vlastnosti buněk (velikost, granularita, životnost,...) exprese povrchových membránových znaků obsah DNA a jiných intracelulárních molekul

Značení buněk pro průtokovou cytometrii PŘÍMÉ ZNAČENÍ excitace (laser) emise fluorescence fluorochromem značená mab membránový marker

Průtokový cytometr PE-Cy7 detektory fluorescence FITC APC PE optická soustava LASER detektory FSC SSC označené buňky PC analýza

Rozdělení leukocytů podle velikosti a granularity granulocyty scattergram monocyty lymfocyty

Dvojbarevné značení dot plot

Počet buněk FITC M1 histogram FITC FITC FITC FITC FITC Intenzita fluorescence

Uplatnění průtokové cytometrie fenotypizace buněk diagnostika primárních imunodeficitů (SCID, Brutonova agamaglobulinémie, Hyper-IgM syndrom) diagnostika leukémií a lymfomů monitorování odpovědi na léčbu sekundárních imunodeficitů (AIDS)

CD4 FITC CD8 PE Fenotypizace lymfocytů CD3+/CD4+ Th lymfocyty (52-69%) CD3+/CD8+ cytotoxické lymfocyty (27-46%) CD16+/CD56+ NK buňky (4-18%) CD19+ B lymfocyty (7-18%) 10 0 10 1 10 2 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD3 APC 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD3 APC

zdravá kontrola Diagnostika Hyper-IgM syndromu CD8 pacient CD8

Funkční testy lymfocytů proliferace cytotoxicita sekrece cytokinů

Izolace lymfocytů z krve gradientová centrifugace (oddělení buněk podle rozdílů v jejich hustotě) + trombocyty MONOCYTY

Proliferační test 3 H- tymidinový test kultivace izolovaných lymfocytů v médiu se stimulačními látkami (3-7 dní/37 C) inkubace s radioaktivně značeným tymidinem ( 3 H) inkorporace 3 H- tymidinu do DNA proliferujících lymfocytů detekce -záření čím proliferace, tím naměřená radioaktivita

Uplatnění funkčních testů lymfocytů (1) proliferační testy monitorování buněčné imunity (sekundární imunodeficity, chemoterapie, pooperační stavy) výzkum (imunoterapie nádorů, farmakologie)

Cytotoxické testy vyšetření schopnosti T lymfocytů a NK buněk zabíjet nádorové buňky CTL test založený na uvolňovaní radioaktivního chromu ( 51 Cr) z nádorových buněk nádorová buňka

Provedení testu s 51 Cr izolované lymfocyty + inkubace (37 C/3,5h) nádorové buňky inkubované s 51 Cr výpočet % cytotoxické aktivity 100x (aktivita vzorku-spon)/(max-spon) 51 Cr detekce -záření v supernatantu

Cytotoxická aktivita NK buněk Dox Dox-HPMA Splenocyty myší s SW 620 kolorektálním karcinomem Kont Říhová et al., Journal of Controlled Release

Stanovení sekrece cytokinů ELISPOT kvantifikace T lymfocytů reagujících na antigenní podnět sekrecí konkrétních cytokinů počet spotů v jamce = počet buněk sekretujících cytokiny

ELISPOT primární Ab proti cytokinu cytokin ly sekundární Ab značena biotinem streptavidin-enzym substrát

Uplatnění funkčních testů lymfocytů (2) cytotoxické testy testování nových léků (imunoterapie nádorů) ELISPOT monitorování antigenně specifických T lymfocytů v průběhu infekčních chorob

Testy fagocytárních funkcí test ingesce testy oxidačního vzplanutí

Test ingesce (1) substrát Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, polymerové partikule suspenze partikul nebo kvasinek + plná krev (inkubace 37 C/1hod) zhotovení krevního nátěru fixace a barvení odečítání ve světelném mikroskopu

Test ingesce (2) hodnocení 100 buněk, pozitivní obsahují 3 a více pohlcených částic fagocytární aktivita % fagocytů s pohlcenými částicemi ze všech fagocytujících buněk fagocytární index průměrný počet částic pohlcených jednou buňkou

Oxidační vzplanutí vyšetření schopnosti fagocytů tvořit kyslíkové radikály (aktivace NADPH oxidázy) DHR-123 test plná krev + forbolové estery + dihydrorhodamin vznik rhodaminu (působení ROI) cytometrické měření intenzity fluorescence

Diagnostika CGC zdravá kontrola pacient s X-CGC