Rapid-VIDITEST Giardia Card (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Giardia lamblia) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice, ČR, tel: +420 261 090 565 POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Giardia Card je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Giardia lamblia ve stolici. ÚVOD: Giardióza je průjmové onemocnení, které způsobuje malý parazit Giardia lamblia (znám také jako Giardia intestinales nebo Giardia duodenalis). Je-li zvíře nebo člověk infikován Giardií, parazit žije ve střevě a dál prochází do stolice. Parazit je chráněn vnějším obalem (cysta) a může přežít po dlouhou dobu mimo tělo a ve vnějším prostředí. Infekce Giardiemi je jednou z nejčastějších příčin infekcí z vody u lidí. Nejčastějšími symptomy giardiózy jsou: průjem, řídká nebo vodová stolice, křeče žaludku a nevolnost. Tyto symptomy většinou začínají 1-2 týdny po infekci a můžou u zdravých jedinců trvat 2-6 týdnů. Někdy symptomy trvají déle a mohou vést ke ztrátě hmotnosti a dehydrataci. Někteří jedinci nemají žádné příznaky. Lidé s oslabeným imunitním systémem (např. HIV/AIDS, pacienti s rakovinou a transplantovaní pacienti) a starší osoby můžou mít vážnější infekci, která může vést k vážnějším onemocněním nebo smrti. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Giardia Card je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Giardia lamblia ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány protilátky proti antigenům Giardia lamblia. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-giardia protilátky červená mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - Nádoba na sběr vzorků - Zkumavky nebo lahvičky - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout hned po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při 2 až 10 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (stool collection tube) a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (asi 150 mg) (obr. 1). V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 150 μl a pipetujte do odběrové zkumavky. 2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 2). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 3). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Giardia Card z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky naředěného vzorku (obr. 4). Vyhněte se aplikaci tuhých částic s tekutinou. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Červená Červená Negativní Giardia pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Giardia Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. 4
PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. K testu použijte jenom čerstvé nebo čerstvě rozmražené nekonzervované a nefixované vzorky. 3. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test. 4. Po jednom týdnu trvající infekce počet parazitů ve stolici klesá a tím se snižuje reaktivita vzorku. Proto by vzorky měly být odebrány v průběhu jednoho týdne od nástupu příznaků. 5. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost parazitární infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 6. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. ÚČINNOST TESTU: Citlivost a specificita: Bylo otestováno 77 vzorků stolice (Giardia pozitivních a negativních testovaných mikroskopicky) od pacientů z lokální nemocnice ve Španělsku. Sensitivita pro Rapid-VIDITEST Giardia Card byla >99% a specificita >99%. Křížová reaktivita: Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita Rapid-VIDITEST Giardia Card testu s jinými intestinálními parasity jako: - Cryptosporidium parvum - Entamoeba hystolitica SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do doby použití. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5
REFERENCE: 1. MARSHALL, M.M., ET AL., Waterborne Protozoan Pathogens, Clinical Microbiology Review, Jan. 1997, pp 67/85. 2. DYLAN R., PILLAI AND KEVIN C. KAIN, Immunochromatographic Strip-Based Detection of Entamoeba hystolitica-e. dispar and Giardia lamblia Coproantigen. Journal of Clinical Microbiology, Sept. 1999, Vol. 37, No 9, p. 3017-3019. 3. LYNNE S. GARCIA et. Al., Commercial Assay for Detection of Giardia lamblia and Cryptosporidium parvum Antigens in Human Fecal Specimens by Rapid Solid-Phase Qualitative Immunochromatography, Journal of Clinical Microbiology, Jan. 2003, Vol. 41, No. 1, p. 209-212. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 11/2010 6