Elecsys CA 15-3 II. MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 602

Transkript

1 Česky Systémové informace Pro analyzátor cobas e 411: číslo testu 332 Pro analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602: Číslo kódu aplikace 052 Upozornění Naměřené hodnoty CA 15 3 ve vzorcích pacientů se mohou lišit v závislosti na použitém postupu stanovení. Na laboratorním nálezu musí být proto vždy uveden údaj, kterým testem byl CA 15 3 stanoven. Hodnoty CA 15 3 stanovené ve vzorku pacienta rozdílnými testy nemohou být přímo mezi sebou porovnávány a mohly by způsobit chybnou lékařskou interpretaci. Jestliže dojde ke změně v testovacím postupu stanovení CA 15 3 během monitorování léčby, měly by být hodnoty CA 15 3, získané po této změně, potvrzeny paralelním měřením použitím obou testů. Použití Imunosouprava pro in vitro kvantitativní stanovení CA 15 3 v lidském séru a plazmě při léčbě pacientů s karcinomem prsu. Ve spojení s ostatními klinickými a diagnostickými postupy je testování v sérii pomůckou při včasné detekci rekurence u pacientů s léčeným II. a III. stádiem karcinomu prsu při monitorování odpovědi na terapii metastazujícího karcinomu prsu Elektrochemiluminiscenční imunostanovení ECLIA je určeno pro použití na analyzátorech imunostanovení Elecsys a cobas e. Souhrn CA 15 3 (karcinomový antigen 15 3) je odvozen z glykoproteinu mucinu 1 (MUC 1). 1 Stanovení CA 15 3 používá 2 monoklonální protilátky (MAb), 115D8 a DF3, v sendvičové metodě k detekci 2 antigenních míst spojených s buňkami karcinomu prsu. MAb 115D8 je směrována proti membranám kapek lidského mléčného tuku, 2,3 zatímco MAb DF3 je směřována proti frakci membrány lidského metastázujícího karcinomu prsu. 4 Antigen je běžnou součástí v luminálních sekretech žlázových buněk a v krvi necirkuluje. Když se stanou buňky maligními a jejich bazální membrány permeabilními, stane se antigen detekovatelným v séru stanovením CA Nadměrná exprese CA 15 3 hraje významnou roli při epiteliálně-mezenchymální tranzici, významném a komplexním fenoménu, který určuje progresi nádoru. 6 Bylo zjištěno, že hladiny CA 15 3 umožňují předpovědět přežití bez onemocnění a celkové přežití u pacientek s luminálním typem B karcinomu prsu. 7 Různé směrnice a doporučení pro monitorování pokročilého onemocnění byly zmapovené ve studii od Duffyho a kol. Levné a minimálně invazivní monitorování koncentrací CA 15 3 je uvedené v doporučeních ASCO a EGTM a doporučuje se zejména v případech, kdy není onemocnění zobrazitelné konvenčními zobrazovacími metodami. 8 Dle doporučení ESMO pro karcinom prsu může být měření koncentrace CA 15 3 spolu s jinými metodami užitečné zejména v případech, kdy je nádor neměřitelný. 9 Princip testu Sendvičový princip. Celková doba stanovení: 18 minut. 1. inkubace: 20 µl vzorku je automaticky předředěno 1:10 použitím Diluent Universal. Antigen (ve 20 µl předředěného vzorku), biotinylovaná monoklonální protilátka specifická pro CA 15 3 a monoklonální protilátka specifická pro CA 15 3, značená rutheniovým komplexem a) reagují za tvorby sendvičového komplexu. 2. inkubace: Po přidání mikročástic potažených streptavidinem se komplex váže na pevnou fázi prostřednictvím interakce mezi biotinem a streptavidinem. MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Reakční směs je nasáta do měřící cely, kde jsou mikročástice s navázanými komplexy zachyceny prostřednictvím magnetu. Nenavázané složky jsou odstraněny roztokem ProCell/ProCell M. Přivedené napětí na pracovní elektrodě vyvolá chemiluminiscenční emisi fotonů, která je změřena fotonásobičem. Výsledky se stanovují pomocí kalibrační křivky, která je specificky vytvořena pro přístroj 2bodovou kalibrací, a master křivky, která se do přístroje načte z čárového kódu reagencie nebo elektronického čárového kódu. a) Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium(II)-komplex (Ru(bpy) ) Reagencie - pracovní roztoky Reagenční rackpack je označen jako CA 15 3 II. M R1 R2 Mikročástice potažené streptavidinem (průhledné víčko), 1 nádobka, 6.5 ml: Streptavidinem potažené mikročástice, 0.72 mg/ml; konzervans. Anti-CA 15-3-Ab~biotin (šedé víčko), 1 nádobka, 10 ml: Biotinylovaná monoklonální protilátka (115D8; myší) 1.75 mg/l; fosfátový pufr 20 mmol/l, ph 6.0; konzervans. Anti-CA 15-3-Ab~Ru(bpy) (černé víčko), 1 nádobka, 10 ml: Monoklonální protilátka proti CA 15-3 (DF3; myší), značená rutheniovým komplexem 10 mg/l; fosfátový pufr 100 mmol/l, ph 7.0; konzervans. Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Tato souprava obsahuje složky klasifikované v souladu s nařízením (ES) č. 1272/2008 takto: 2-metyl-2H-izotiazol-3-on hydrochlorid EUH 208 Může vyvolat alergickou reakci. Bezpečnostní značky výrobku se řídí pokyny EU GHS. U všech reagencií a druhů vzorků (vzorky, kalibrátory a kontroly) zabraňte vytvoření pěny. Zacházení s reagenciemi Reagencie v soupravě jsou sestaveny tak, že tvoří komplet připravený k použití a nemohou být odděleny. Všechny informace, potřebné pro správnou činnost, jsou načteny z příslušného čárového kódu reagencie. Uskladnění a stabilita Skladujte při 2 8 C. Nemrazit. Reagenční soupravu Elecsys skladujte ve vzpřímené poloze, aby byla zajištěna dostupnost všech mikročástic během automatického míchání před použitím. Stabilita: neotevřené při 2 8 C po otevření při 2 8 C v analyzátorech do uvedeného data exspirace 12 týdnů 5 týdnů 1 / 5

2 Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testované a jsou přijatelné. Sérum odebrané standardní odběrovou soupravou nebo pomocí zkumavek se separačním gelem. Li heparinizovaná, K 2 EDTA a K 3 EDTA plazma. Kritérium: Výtěžnost v rozmezí hodnot séra nebo sklon úsek na ose v rozmezí < ± 2x analytické citlivosti (LDL) + koeficient korelace > Stabilní 48 hodin při C, 5 dní při 2 8 C, 90 dní při 20 C (± 5 C). Zmrazte pouze jednou. Uvedené druhy vzorků byly testované s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn., že do testu nebyly zařazené všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech zásadní vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením stanovení. Nepoužívejte teplem inaktivované vzorky. Nepoužívejte vzorky a kontroly stabilizované azidem. Před měřením zajistěte, aby vzorky, kalibrátory a kontroly měly teplotu C. Vzhledem k možnému odparu roztoků by měly být vzorky, kalibrátory a kontroly v analyzátoru analyzovány/stanoveny do 2 hodin. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) , CA 15-3 II CalSet, 4 x 1 ml , PreciControl Tumor Marker, pro 4 x 3 ml , Diluent Universal, 2 x 16 ml diluentu vzorku nebo , Diluent Universal, 2 x 36 ml diluentu vzorku Celkové vybavení laboratoře MODULAR ANALYTICS E170 nebo analyzátor cobas e Příslušenství pro analyzátor cobas e 411: , ProCell, 6 x 380 ml systémový pufr , CleanCell, 6 x 380 ml čistící roztok pro měřící celu , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml promývací přísada , Adapter for SysClean , Assay Cup, 60 x 60 reakčních nádobek , AssayTip, 30 x 120 pipetovacích špiček , Clean Liner Příslušenství pro MODULAR ANALYTICS E170, analyzátory cobas e 601 a cobas e 602: , ProCell M, 2 x 2 L systémový pufr , CleanCell M, 2 x 2 L čistící roztok pro měřící celu , PC/CC Cups, 12 kalíšků pro předehřátí ProCell M a CleanCell M před užitím , ProbeWash M, 12 x 70 ml čistícího roztoku pro finalizaci a mytí během změny reagencií , AssayTip/AssayCup, 48 kazet x 84 reakčních nádobek nebo pipetovacích špiček, odpadní vaky , WasteLiner, odpadní vaky , SysClean Adapter M Příslušenství pro všechny analyzátory: , ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml systémový čistící roztok Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Promíchání mikročástic před použitím proběhne automaticky. Načtěte specifické parametry pro test z čárového kódu reagencie. Ve výjimečných případech, kdy nelze načíst čárový kód, zadejte 15místní sekvenci čísel (kromě analyzátoru cobas e 602). Vytemperujte chlazené reagencie na přibl. 20 C a umístěte je do reagenčního kotouče (20 C) analyzátoru. Zabraňte tvorbě pěny. Systém automaticky reguluje teplotu reagencií a otvírá a zavírá nádobky. Kalibrace Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle stanovení Elecsys CA Ta byla dále standardizována podle metody Enzymun Test CA 15 3 a CA 15 3 RIA výrobce Fujirebio Diagnostics. Každá reagenční souprava Elecsys je opatřena štítkem s čárovým kódem obsahujícím specifické informace pro kalibraci dané šarže reagencií. Předdefinovaná master křivka je uzpůsobena pro analyzátor pomocí příslušného CalSet. Frekvence kalibrace: Kalibrace se musí provádět jednou pro celou šarži reagencií novými reagenciemi (tj. ne více než 24 hodin od registrace reagenční soupravy v analyzátoru). Kalibrační interval lze po přijatelné verifikaci kalibrace laboratoří prodloužit. Obnovení kalibrace se doporučuje: po 12 týdnech při používání stejné šarže reagencií po 7 dnech (při používání stejné reagenční soupravy v analyzátoru) dle potřeby: např. výsledky kontroly kvality jsou mimo definované rozmezí Kontrola kvality Pro kontrolu kvality používejte PreciControl Tumor Marker. Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontroly pro rozdílné koncentrační rozmezí by měly být jednotlivě stanoveny nejméně jednou za 24 hodin při používání testu, alespoň 1x na soupravu reagencií a po každé kalibraci. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze. Je-li to nutné, zopakujte měření příslušného vzorku. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátor automaticky vypočítá koncentraci analytu pro každý vzorek (buď v nebo ku/l). Omezení - interference Stanovení není ovlivněno ikteritou (bilirubin < 1112 µmol/l nebo < 65 mg/dl), hemolýzou (Hb < 1.9 mmol/l nebo < 3.0 g/dl), lipémií (Intralipid < 1500 mg/dl) a biotinem (< 409 nmol/l nebo < 100 ng/ml). Kritérium: Výtěžnost v rozmezí ± 10 počáteční hodnoty. Vzorky by neměly být odebrány pacientům podstupujícím léčbu s vysokými dávkami biotinu (tj. > 5 mg/den) po dobu nejméně 8 hodin od podání poslední dávky biotinu. U revmatoidních faktorů nebyla interference zaznamenána do koncentrace 1500 I. Typicky bez efektu nadbytku antigenu b) lze pozorovat při koncentracích CA 15 3 do Kvůli heterogenní povaze antigenu CA 15 3 nelze však pod touto hodnotou zcela vyloučit efekt nadbytku antigenu (hook effect). V případě neočekávaně nízkého výsledku by vzorek měl být naředěn 1:10 (čtěte kapitolu "Ředění") a znovu testován. In vitro testy byly prováděny na 28 běžně užívaných lécích. Nebyla zjištěna žádná interference. Ve vzácných případech je možné pozorovat interferenci způsobenou velmi vysokým titrem protilátek proti test specifickým protilátkám, streptavidinu nebo rutheniu. Tyto účinky jsou minimalizovány vhodným navržením testu. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. b) Efekt nadbytku antigenu (hook efekt): se skutečnou koncentrací nepochybně přesahující rozsah měření, ale nalezen v jeho rámci. 2 / 5

3 Limity a rozmezí Rozsah měření (definováno spodním detekčním limitem a maximem master křivky). Hodnoty pod spodním detekčním limitem jsou vykazovány jako < Hodnoty nad rozsahem měření jsou vykazovány jako > 300 (nebo až 3000 při 10násobném ředění vzorku). Spodní limity měření Spodní detekční limit testu Spodní detekční limit: < 1.00 Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Počítá se jako hodnota ležící 2 standardní odchylky nad nejnižším standardem (master kalibrátor, standard 1 + 2, studie opakovatelnosti, n = 21). Ředění Pro automatické předředění vzorku používejte Diluent Universal. Vzorky s koncentrací CA 15 3 vyšší než je měřící rozsah i přes předředění musí být naředěny 1:10 pomocí Diluent Universal (buď automaticky na analyzátorech nebo ručně). Koncentrace ředěného vzorku musí být > 30. Po ručním naředění výsledek vynásobte faktorem ředění. Po naředění analyzátorem počítá software automaticky s ředěním při výpočtu koncentrace vzorku. Očekávané hodnoty Zdraví jedinci: Výsledky studie referenčního rozmezí použitím panelu vzorků 378 zdravých netěhotných žen (studie Roche č. RD000788). Percentil () Interval spolehlivosti () Pacienti s benigním onemocněním a těhotné ženy: Relativní rozložení koncentrací CA 15 3 u pacientů s benigním onemocněním a u těhotných žen Játra, slinivka, žlučník N Klasifikace v procentech () Prsa Gynekologické choroby Selhání ledvin Urologické nemoci Bakteriální infekce Těhotenství Pacienti s maligním onemocněním (jiným než prsu): Relativní rozložení koncentrací CA 15 3 u s maligním onemocněním, jiným než prsu. N Klasifikace v procentech () Ka žaludku c) Hepatocelulární ka Ka plic Ka ovarií N Klasifikace v procentech () Gynekologický ka Ka prostaty Kolorektální ka Ka slinivky c) Ka = Karcinom Pacientky s karcinomem prsu: Relativní rozložení koncentrací CA 15 3 u pacientek s maligním onemocněním prsu. Rozdělení pacientek podle kritérií UICC klasifikace byla provedena při primární diagnostice před zahájením léčby. Pacientky s diagnostikovaným rekurentním onemocněním měly přítomné metastázy (M1). N Klasifikace v procentech () UICC I UICC II UICC III UICC IV Rekurentní onemocnění Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím reagencií Elecsys, poolovaného lidského séra a kontrol v souladu s upraveným protokolem (EP5 A) CLSI (Institut pro klinické a laboratorní standardy): 6krát denně po 10 dní (n = 60); opakovatelnost v analyzátoru MODULAR ANALYTICS E170, n = 21. Získané byly následující výsledky: Analyzátor cobas e 411 Mezilehlá preciznost Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum PreciControl TM d) PreciControl TM d) TM = Tumor Marker Analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602 Mezilehlá preciznost Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum PreciControl TM / 5

4 Analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602 Mezilehlá preciznost PreciControl TM Porovnání metod Porovnání stanovení Elecsys CA 15 3 II (y) se stanovením Elecsys CA 15 3 (x), použitím klinických vzorků, poskytlo následující korelace: naměřených vzorků: 52 Regrese Passing/Bablok 10 Sklon: 1.06 (95 interval spolehlivosti: ) Úsek na ose: 2.66 (95 interval spolehlivosti: ) Korelační koeficient: Koncentrace vzorků byly v rozmezí přibližně 6 až 280. Analytická specifičnost Stanovení nádorového markeru Elecsys CA 15 3 II je založeno na monoklonálních protilátkách 115D8 a DF3, které jsou dostupné jen u Fujirebio Diagnostics, držitelů licence a jejich obchodního zastoupení. Provedení, charakteristické pro postup stanovení, užívající tyto protilátky, nesmí být napodobováno jiným způsobem za použití jiných protilátek. Postup klinického využití Pacientky s diagnostikovaným karcinomem prsu byly vyšetřeny v rámci retrospektivní studie (alespoň 4 vzorky/pacient během dodatkové studie) a klasifikovány podle progrese/rekurence, regrese/odezvy nebo beze změn podle klinických informací (zobrazovací metody a jiná klinická vyšetření). Koncentrace CA 15 3 byly měřeny paralelně a vzhledem k jejich relativní změně byl měřen nárůst markeru (definován jako > 25 a má za následek hodnoty > 10 po nárůstu) a pokles markeru (o > 25 ). Časná detekce rekurence Ze 44 pacientek s dříve diagnostikovaným a léčeným karcinomem prsu v II. nebo III. stádiu (bez známek onemocnění při zahájení dodatkové studie) mělo 20 recidivu onemocnění podle klinických symptomů. Z nich mělo 18 (90 ) hladinu CA 15 3 zvýšenou o > 25. Z 24 pacientek, kde nebyla zaznamenána recidiva, 17 (71 ) mělo hladinu CA 15 3 stejnou (do 25 ) nebo sníženou. Tabulka časné detekce recidivy: CA 15 3 nárůst > 25 Klinická diagnóza: Recidiva onemocnění Ano Ne Celkem Ano Ne Celkem Odpovídající výsledky pro pozitivní prediktivní hodnotu (PPV) a negativní prediktivní hodnotu (NPV) s 95 intervalem spolehlivosti, jak byly odvozeny z tabulky: Pozitivní prediktivní hodnota: 72 (50 87 ) Negativní prediktivní hodnota: 90 (66 98 ) Sledování odpovědi na terapii Ze 60 pacientek s diagnostikovaným karcinomem prsu s metastázami, 23 vykázalo odpověď na terapii dle klinických kritérií. Z nich 18 (78 ) mělo hladinu CA 15 3 sníženou o > 25. Z 37 pacientek, které nereagovaly na léčbu, mělo 29 (78 ) hladinu CA 15-3 stejnou (do 25 ) nebo zvýšenou. Tabulka odpovědi na terapii: CA 15 3 pokles > 25 Klinická diagnóza: Odpověď na terapii Ano Ne Celkem Ano Ne Celkem Odpovídající výsledky pro pozitivní prediktivní hodnotu (PPV) a negativní prediktivní hodnotu (NPV) s 95 intervalem spolehlivosti, jak byly odvozeny z tabulky: Pozitivní prediktivní hodnota: 69 (48 85 ) Negativní prediktivní hodnota: 85 (68 95 ) Odkazy 1 Brockhausen I, Yang JM, Burchell J, et al. Mechanisms underlying aberrant glycosylation of MUC1 mucin in breast cancer cells. Eur J Biochem. 1995;233(2): Hilkens J, Buijs F, Hilgers J, et al. Monoclonal antibodies against human milk-fat globule membranes detecting differentiation antigens of the mammary gland. Prot Biol Fluids 1982;29: Hilkens J, Buijs F, Hilgers J, et al. Monoclonal antibodies against human milk-fat globule membranes detecting differentiation antigens of the mammary gland and its tumors. Int J Cancer 1984;34: Kufe D, Inghirami G, Abe M, et al. Differential reactivity of a novel monoclonal antibody (DF3) with human malignant versus benign breast tumor. Hybridoma 1984;(3): Sekine H, Ohno T, Kufe DW. Purification and characterization of a high molecular weight glycoprotein detectable in human milk and breast carcinomas. J Immunol 1985;135(5): Ponnusamy MP, Seshacharyulu P, Lakshmanan I, et al. Emerging role of mucins in epithelial to mesenchymal transition. Curr cancer drug targets 2013;13(9): Shao Y, Sun X, He Y, et al. Elevated levels of serum tumor markers CEA and CA15-3 are prognostic parameters for different molecular subtypes of breast cancer. PLoS ONE 2015;10(7):e doi: /journal.pone Duffy MJ, Walsh S, McDermott EW, et al. Chapter One - Biomarkers in Breast Cancer: Where Are We and Where Are We Going?, In: Gregory S. Makowski, Editor(s), Advances in Clinical Chemistry, Elsevier, 2015;71: 1-23, ISSN , ISBN Cardoso F, Harbeck N, Fallowfield L, et al. Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol 2012;23(7):vii Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Pro více informací čtěte prosím příslušný návod k použití daného analyzátoru, jednotlivé aplikační listy, informace o produktu a metodické listy všech potřebných komponent (jsou-li dostupné ve Vaší zemi). Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. CA 15 3 je ochrannou známkou Fujirebio Diagnostics, Inc. Symboly Roche Diagnostics používá kromě symbolů a znaků uvedených v normě ISO následující znaky (pro USA: pro definici použitých symbolů navštivte stránku GTIN Obsah soupravy Analyzátory/přístroje, na kterých lze reagencie použít Reagencie Kalibrátor Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Doplnění, odstranění nebo změny textu jsou označeny pruhem podél textu. 2017, Roche Diagnostics 4 / 5

5 Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 5 / 5