Elecsys Insulin. MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 602

Transkript

1 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Česky Systémové informace Pro analyzátor cobas e 411: číslo testu 650 Pro analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602: Číslo kódu aplikace 120 Použití Imunochemické kvantitativní in vitro stanovení lidského inzulínu v lidském séru a plazmě. Stanovení inzulínu se využívá při diagnostice a léčbě různých poruch metabolismu sacharidů, včetně diabetu mellitu a hypoglykémie. Elektrochemiluminiscenční imunostanovení ECLIA je určeno pro použití na analyzátorech imunostanovení Elecsys a cobas e. Souhrn Inzulín je peptidický hormon s molekulovou hmotností přibližně 5808 daltonů skladající se z 51 aminokyselin. Je vylučován β buňkami Langerhansových ostrůvků pankreatu a přechází do oběhu portální žílou a játry. Inzulín je obvykle vylučovaný v pulzech. 1,2 Biologicky aktivní molekula inzulínu je monomér skládající se ze 2 polypeptidových řetězců spojených disulfidickými můstky; α řetězce s 21 aminokyselinami a β řetězce s 30 aminokyselinami. Inzulín je biosyntetický produkt tvořený jedním řetězcem vznikající z prekurzoru preproinzulínu, který je následně štěpený na proinzulín. 2,3,4,5 Specifické proteázy štěpí proinzulín na inzulín a spojovací (C) peptid, které jsou zároveň vylučované v ekvimolárních koncentracích do krevního oběhu. Cirkulující inzulín má biologický poločas 3 5 minut a přednostně je zachytávaný a rozkládaný v játrech. Proto do systémového oběhu vstupuje pouze cca polovina vznikajícího inzulínu. Inaktivace nebo vylučování proinzulínu a C peptidu probíhá zejména v ledvinách a téměř žádný C peptid není zadržován v játrech. Výsledkem je vyšší koncentrace C peptidu v plazmě než koncentrace inzulínu. 6 Sekvence aminokyselin inzulínu zůstala během evoluce téměř konstantní, proto před syntézou lidského inzulínu metodami genetického inženýrství bylo možné při léčbě diabetes mellitus úspěšně používat prasečí a hovězí inzulín. 7 Účinek inzulínu je zprostředkováván specifickými receptory a zahrnuje především usnadnění příjmu glukózy buňkami jater, tukové tkáně a svalstva, což je podstatou jeho hypoglykemizujících účinků. 2,8 Sérová hladina inzulínu se stanovuje zejména u pacientů se symptomy hypoglykemie a může pomoct při klasifikaci různých forem diabetu. 9,10 Používá se ke stanovení kvocientu glukóza/inzulín a k objasnění nejasností týkajících se sekrece inzulínu a funkce β buněk, např. při zhodnocení orálního glukózového tolerančního testu nebo provokačního testu hladověním. 11 Poruchy metabolismu inzulínu mohou silně ovlivňovat mnoho metabolických procesů. Nízká koncentrace volného, biologicky aktivního inzulínu, může vést k vzniku diabetes mellitus. Mezi možné příčiny patří destrukce β buněk (diabetes I. typu), snížení aktivity inzulínu nebo pokles jeho syntézy pankreatem (II. typ), cirkulující protilátky proti inzulínu, opožděné uvolňování inzulínu nebo absence (či nefunkčnost) inzulínových receptorů. 12 Naopak autonomní, neregulovaná sekrece inzulínu je obvykle příčinou hypoglykémie. Tento stav vzniká při inhibici glukoneogeneze, např. v důsledku těžkého hepatálního nebo renálního selhání, adenomu nebo karcinomu buněk ostrůvků pankreatu. Hypoglykémie může být také způsobena úmyslně nebo neúmyslně (uměle vyvolaná hypoglykémie). 10,13 U některých jedinců se sníženou glukózovou tolerancí se časem metabolický stav zhoršuje a vede k rozvoji diabetes mellitus. Snížená glukózová tolerance v průběhu těhotenství vždy vyžaduje léčbu. Jasně zvýšené riziko mortality plodu vyžaduje intenzivní monitorování. 12 Stanovení využívá 2 monoklonálních protilátek, specifických pro lidský inzulín. Princip testu Sendvičový princip. Celková doba stanovení: 18 minut. 1. inkubace: Inzulín ve 20 µl vzorku, biotinylovaná monoklonální protilátka specifická proti inzulínu a monoklonální protilátka specifická proti inzulínu, značená rutheniovým komplexem a) reagují za tvorby sendvičového komplexu. 2. inkubace: Po přidání mikročástic potažených streptavidinem se komplex váže na pevnou fázi prostřednictvím interakce mezi biotinem a streptavidinem. Reakční směs je nasáta do měřící cely, kde jsou mikročástice s navázanými komplexy zachyceny prostřednictvím magnetu. Nenavázané složky jsou odstraněny roztokem ProCell/ProCell M. Přivedené napětí na pracovní elektrodě vyvolá chemiluminiscenční emisi fotonů, která je změřena fotonásobičem. Výsledky se stanovují pomocí kalibrační křivky, která je specificky vytvořena pro přístroj 2bodovou kalibrací, a master křivky, která se do přístroje načte z čárového kódu reagencie nebo elektronického čárového kódu. a) Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium(II)-komplex (Ru(bpy) ) Reagencie - pracovní roztoky Reagenční rackpack je označen jako INSULIN. M R1 R2 Mikročástice potažené streptavidinem (průhledné víčko), 1 nádobka, 6.5 ml: Streptavidinem potažené mikročástice, 0.72 mg/ml; konzervans. Anti-inzulín-Ab~biotin (šedé víčko), 1 nádobka, 10 ml: Biotinylované monoklonální protilátky (myší) proti inzulínu 1 mg/l; MES b) pufr 50 mmol/l, ph 6.0; konzervans. Anti-inzulín-Ab~Ru(bpy) (černé víčko), 1 nádobka, 10 ml: Monoklonální protilátka proti inzulínu (myší) značená rutheniovým komplexem 1.75 mg/l; MES pufr 50 mmol/l, ph 6.0; konzervans. b) MES = 2-morfolinethansulfonová kyselina Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Pro USA: Varování: Federální zákon omezuje prodej tohoto přístroje pouze lékařem nebo na jeho pokyn. U všech reagencií a druhů vzorků (vzorky, kalibrátory a kontroly) zabraňte vytvoření pěny. Zacházení s reagenciemi Reagencie v soupravě jsou sestaveny tak, že tvoří komplet připravený k použití a nemohou být odděleny. Všechny informace, potřebné pro správnou činnost, jsou načteny z příslušného čárového kódu reagencie. Uskladnění a stabilita Skladujte při 2 8 C. Nemrazit. Reagenční soupravu Elecsys skladujte ve vzpřímené poloze, aby byla zajištěna dostupnost všech mikročástic během automatického míchání před použitím. 1 / 5

2 Stabilita: neotevřené při 2 8 C po otevření při 2 8 C v analyzátorech do uvedeného data exspirace 12 týdnů 4 týdny Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testované a jsou přijatelné. Sérum odebrané standardní odběrovou soupravou nebo pomocí zkumavek se separačním gelem. Li heparinizovaná, K 3 EDTA plazma a plazma s citrátem sodným. Hemolýza interferuje, jelikož z erytrocytů jsou uvolňovány peptidázy degradující inzulín. 14 Kritérium: Výtěžnost v rozmezí % hodnot séra nebo sklon úsek na ose v rozmezí < ± 2x analytické citlivosti (LDL) + koeficient korelace > Stabilní 24 hodin při 2 8 C, 6 měsíců při -20 C. Zmrazit jen jednou. 15 Uvedené druhy vzorků byly testované s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn., že do testu nebyly zařazené všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech zásadní vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením stanovení. Nepoužívejte teplem inaktivované vzorky. Nepoužívejte vzorky a kontroly stabilizované azidem. Před měřením zajistěte, aby vzorky, kalibrátory a kontroly měly teplotu C. Vzhledem k možnému odparu roztoků by měly být vzorky, kalibrátory a kontroly v analyzátoru analyzovány/stanoveny do 2 hodin. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) , Insulin CalSet, pro 4 x 1.0 ml , PreciControl Multimarker, pro 6 x 2.0 ml nebo , PreciControl Universal, pro 4 x 3.0 ml , PreciControl Universal, pro 4 x 3.0 ml (pro USA) nebo , PreciControl Multimarker, pro 6 x 2.0 ml (pro USA) Celkové vybavení laboratoře MODULAR ANALYTICS E170 nebo analyzátor cobas e Příslušenství pro analyzátor cobas e 411: , ProCell, 6 x 380 ml systémový pufr , CleanCell, 6 x 380 ml čistící roztok pro měřící celu , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml promývací přísada , Adapter for SysClean , Assay Cup, 60 x 60 reakčních nádobek , AssayTip, 30 x 120 pipetovacích špiček , Clean Liner Příslušenství pro MODULAR ANALYTICS E170, analyzátory cobas e 601 a cobas e 602: , ProCell M, 2 x 2 L systémový pufr , CleanCell M, 2 x 2 L čistící roztok pro měřící celu , PC/CC Cups, 12 kalíšků pro předehřátí ProCell M a CleanCell M před užitím , ProbeWash M, 12 x 70 ml čistícího roztoku pro finalizaci a mytí během změny reagencií , AssayTip/AssayCup, 48 kazet x 84 reakčních nádobek nebo pipetovacích špiček, odpadní vaky , WasteLiner, odpadní vaky , SysClean Adapter M Příslušenství pro všechny analyzátory: , ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml systémový čistící roztok , ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml systémový čistící roztok (pro USA) Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Promíchání mikročástic před použitím proběhne automaticky. Načtěte specifické parametry pro test z čárového kódu reagencie. Ve výjimečných případech, kdy nelze načíst čárový kód, zadejte 15místní sekvenci čísel (kromě analyzátoru cobas e 602). Vytemperujte chlazené reagencie na přibl. 20 C a umístěte je do reagenčního kotouče (20 C) analyzátoru. Zabraňte tvorbě pěny. Systém automaticky reguluje teplotu reagencií a otvírá a zavírá nádobky. Kalibrace Návaznost: Tato metoda byla standardizována použitím 1. IRP WHO referenčního standardu 66/304 (NIBSC). Každá reagenční souprava Elecsys je opatřena štítkem s čárovým kódem obsahujícím specifické informace pro kalibraci dané šarže reagencií. Předdefinovaná master křivka je uzpůsobena pro analyzátor pomocí příslušného CalSet. Frekvence kalibrace: Kalibrace se musí provádět jednou pro celou šarži reagencií novými reagenciemi (tj. ne více než 24 hodin od registrace reagenční soupravy v analyzátoru). Kalibrační interval lze po přijatelné verifikaci kalibrace laboratoří prodloužit. Obnovení kalibrace se doporučuje: po 1 měsíci (28 dní) při používání stejné šarže reagencií po 7 dnech (při používání stejné reagenční soupravy v analyzátoru) dle potřeby: např. výsledky kontroly kvality jsou mimo definované rozmezí Kontrola kvality Pro kontrolu kvality používejte PreciControl Multimarker nebo PreciControl Universal. Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontroly pro rozdílné koncentrační rozmezí by měly být jednotlivě stanoveny nejméně jednou za 24 hodin při používání testu, alespoň 1x na soupravu reagencií a po každé kalibraci. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze. Je-li to nutné, zopakujte měření příslušného vzorku. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Upozornění: Komerční kontroly mohou obsahovat inzulín zvířecího původu. Při hodnocení výsledku je nutné přihlédnout k odpovídající křížové reaktivitě, viz "Analytická specifičnost". Výpočet Analyzátor automaticky vypočítá koncentraci analytu pro každý vzorek (buď v μu/ml nebo pmol/l). Převodní faktory: µu/ml x = pmol/l pmol/l x = µu/ml Omezení - interference Stanovení není ovlivněno ikterem (bilirubin < 1539 µmol/l nebo < 90 mg/dl), lipémií (Intralipid < 1800 mg/dl) a biotinem (< 246 nmol/l nebo < 60 ng/ml). Kritérium: Výtěžnost v rámci ± 10 % počáteční hodnoty. Hemolýza interferuje. Vzorky by neměly být odebrány pacientům podstupujícím léčbu s vysokými dávkami biotinu (tj. > 5 mg/den) po dobu nejméně 8 hodin od podání poslední dávky biotinu. 2 / 5

3 U revmatoidních faktorů nebyla interference pozorovaná do koncentrace IU/mL. Efekt nadbytku antigenu (hook efekt) nebyl zaznamenán pro inzulín do koncentrace µu/ml nebo pmol/l. In vitro testy se prováděly na 20 běžně užívaných léčivech. Nebyla zjištěná žádná interference. Vzorky pacientů léčených hovězím, prasečím nebo lidským inzulínem mohou někdy obsahovat protilátky proti inzulínu, které mohou ovlivňovat výsledky testu. 16,17 Ve vzácných případech je možné pozorovat interferenci způsobenou velmi vysokým titrem protilátek proti test specifickým protilátkám, streptavidinu nebo rutheniu. Tyto účinky jsou minimalizovány vhodným navržením testu. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. Meze a rozmezí Měřící rozsah μu/ml nebo pmol/l (definováno mezí detekce a maximem master křivky). Hodnoty pod mezí detekce se vykazují jako < 0.2 µu/ml (< 1.39 pmol/l). Hodnoty nad měřícím rozsahem se vykazují jako > 1000 μu/ml (> 6945 pmol/l). Dolní meze měření Mez detekce testu Mez detekce: 0.2 µu/ml (1.39 pmol/l) Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Počítá se jako hodnota ležící 2 standardní odchylky nad nejnižším standardem (master kalibrátor, standard SD, studie opakovatelnosti, n = 21). Ředění Není nutné kvůli širokému měřícímu rozsahu. Očekávané hodnoty Studie prováděná se stanovením v klinických centrech v Německu se vzorky 57 zdravých, lačnících jedinců, poskytla následující výsledky (rozmezí percentil): µu/ml ( pmol/l) Stav: MCE, studie č.: B99P027 z 29. března Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím reagencií Elecsys a poolovaného lidského séra v upraveném protokolu (EP5 A) CLSI (Institut pro klinické a laboratorní standardy): 6krát denně po 10 dní (n = 60); opakovatelnost v analyzátoru MODULAR ANALYTICS E170, n = 21. Získané byly následující výsledky: Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Lidské sérum Preciznost byla stanovena použitím reagencií Elecsys a kontrol podle protokolu (EP5 A2) CLSI (Institut pro klinické a laboratorní standardy): 2 série denně v duplikátech, každý po 21 dní (n = 84). Získané byly následující výsledky: PreciControl MM c) PreciControl MM c) MM = Multimarker PreciControl MM PreciControl MM PreciControl MM PreciControl MM / 5

4 PreciControl MM PreciControl MM Porovnání metod a) Porovnání stanovení (y) s metodou Enzymun-Test Insulin (x) použitím klinických vzorků poskytlo následující korelace (µu/ml): Počet naměřených vzorků: 99 Passing/Bablok 18 Lineární regrese y = 1.00x y = 0.92x τ = r = Koncentrace vzorků byly v rozmezí přibližně 3.9 až 80 µu/ml (přibližně 27 až 550 pmol/l). b) Porovnání stanovení (y) s komerčně dostupným Insulin testem (x) použitím klinických vzorků poskytlo následující korelace (µu/ml): Počet naměřených vzorků: 99 Passing/Bablok 18 Lineární regrese y = 0.89x y = 0.93x τ = r = Koncentrace vzorků byly v rozmezí přibližně 1 až 118 µu/ml (přibližně 7 až 820 pmol/l). Analytická specifičnost Pro použité monoklonální protilátky byla zjištěna následující křížová reaktivita: Testované koncentrace Křížová reaktivita % Hovězí inzulín pmol/l 25.0 Prasečí inzulín 8334 pmol/l 19.2 Lidský proinzulín 1000 ng/ml 0.05 C-peptid 100 ng/ml n.d. d) Glukagon 1000 pg/ml n.d. Somatostatin 100 pg/ml n.d. Růstový faktor podobný inzulínu I 6579 pmol/l 0.04 d) n.d. = nedetekovatelné Výsledky křížové reaktivity s rekombinantními analogy inzulínu v mnoha metodách stanovení inzulínu byly publikovány např. 2 skupinami ve Francii a USA. 17,19,20 Následující výsledky byly publikovány Owenem a kol. 19 pro stanovení : Inzulín lispro, inzulín aspart a inzulín glargine byly testovány v koncentracích 30, 100, 300 a 1000 miu/l bez přítomnosti inzulínu. Získané výsledky byly pod detekčním limitem stanovení (< 0.2 µu/ml nebo < 1.39 pmol/l) při všech testovaných koncentracích. Tyto výsledky také korelují s dříve publikovanými závěry Sapina a kol. pro inzulín lispro. 17 Odkazy 1 Lang DA, Matthews DR, Peto J, et al. Cyclic oscillations of basal plasma glucose and insulin concentrations in human beings. N Engl J Med 1979;301: Steiner DF. Adventures with insulin in the islets of Langerhans. J Biol Chem 2011;286(20): Weiss MA. Diabetes mellitus due to the toxic misfolding of proinsulin variants. FEBS Lett 2013;587(13): Menting JG, Whittaker J, Margetts MB, et al. How insulin engages its primary binding site on the insulin receptor. Nature 2013;493(7431): Yang Y, Hua QX, Liu J, et al. Solution structure of proinsulin connecting domain flexibility and prohormone processing. J Biol Chem 2010;285(11): Ghorbani A, Shafiee-Nick R. Pathological consequences of C-peptide deficiency in insulin-dependent diabetes mellitus. World J Diabetes 2015;6(1): Pickup J. Human insulin. Br Med J 1986;292(6514): Sonksen P, Sonksen J. Insulin: understanding its action in health and disease. Br J Anaesth 2000;85: Clark PM. Assays for insulin, proinsulin(s) and C-peptide. Ann Clin Biochem 1999;36(5): Nalbantoğlu Elmas Ö, Demir K, Soylu N, et al. Importance of insulin immunoassays in the diagnosis of factitious hypoglycemia. J Clin Res Pediatr Endocrinol 2014;6(4): Cersosimo E, Solis-Herrera C, Trautmann ME, et al. Assessment of pancreatic -cell function: review of methods and clinical applications. Curr Diabetes Rev 2014;10: Kharroubi AT, Darwish HM. Diabetes mellitus: The epidemic of the century. World J Diabetes. 2015;6(6): Iglesias P, Díez JJ. Management of endocrine disease: a clinical update on tumor-induced hypoglycaemia. Eur J Endocrinol 2014;170(4):R Chevenne D, Letailleur A, Trivin F, et al. Effect of Hemolysis on the Concentration of Insulin in Serum Determined by RIA and IRMA. Clin Chem 1998;44(2): DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995;26(5): Tietz NW. Clinical Guide To Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co, 1995: Sapin R, Le Galudec V, Gasser F, et al. Assay: Free Insulin Determination and the Absence of Cross-Reactivity with Insulin Lispro. Clin Chem 2001;47: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Owen WE, Roberts WL. Letter to the Editor: Cross-Reactivity of Three Recombinant Insulin Analogs with Five Commercial Insulin Immunoassays. Clin Chem 2004;50(1): Sapin R. Review: Insulin Assays: Previously Known and New Analytical Features. Clin Lab 2003;49(3-4): Pro více informací čtěte prosím příslušný návod k použití daného analyzátoru, jednotlivé aplikační listy, informace o produktu a metodické listy všech potřebných komponent (jsou-li dostupné ve Vaší zemi). Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá kromě symbolů a znaků uvedených v normě ISO následující znaky (pro USA: pro definici použitých symbolů navštivte stránku GTIN Obsah soupravy Analyzátory/přístroje, na kterých lze reagencie použít Reagencie Kalibrátor Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Doplnění, odstranění nebo změny textu jsou označeny pruhem podél textu. 2017, Roche Diagnostics 4 / 5

5 Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Distribuce v USA: Roche Diagnostics, Indianpolis, IN Zákaznická podpora v / 5