Rapid-VIDITEST E.coli O157:H7 (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Escherichia coli O157:H7 ) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST E.coli je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Escherichia coli O157:H7 ve stolici. ÚVOD: Infekce bakterií Escherichia coli O157:H7 (Enterohemoragická E.coli )se projevuje širokým spektrem klinických manifestací zahrnujících asymptomatický průběh, průjem, hemoragické kolitidy, hemolyticko-uremický syndrom, trombotickou nebo trombocytopenickou purpuru. E.coli O157:H7 je významným agens nejen při hemoragických kolitidách, ale je také jednou z hlavních příčin bakteriálních průjmů. Přenáší se nejčastěji špatně upravenými potravinami, zejména nedovařeným masem a mléčnými produkty, významný je také sekundární přenos při kontaktu s infikovanou osobou. Organismus produkuje nejméně dva toxiny podobné Shiga toxinům. Tyto toxiny mají pravděpodobně přímý patogenní význam v infekci E.coli O157:H7. Tato infekce je obvykle diagnostikována na základě pozitivní kultivace stolice nebo na základě přítomnosti Shiga toxinů, případně z kombinace obou stanovení. Včasný odběr vzorků stolice pro kultivaci (do 7 dnů od nástupu onemocnění) je zásadní pro správný výsledek. Rapid-VIDITEST E.coli O157:H7 umožňuje rychlou detekci E.coli O157:H7 přímo ze vzorků stolice. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST E.coli O157:H7 je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení E.coli O157:H7 ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší polyklonální protilátky, které rozpoznávají tento sérotyp (myší polyklonální protilátky proti O157:H7 antigenům). V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti- E.coli O157:H7 protilátky červená mikročástice). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - Nádoba na sběr vzorků - Zkumavky nebo lahvičky - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při 2-4 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při 18 až -28 C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (obr. 1) a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice. V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 100 l a pipetujte do odběrové zkumavky (obr. 2). 2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 5 kapek (150 l) naředěného vzorku (obr. 5). 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková zóna). Zelená Červená Červená Negativní E.coli O157:H7 pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. E.coli O157:H7 Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka.v testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě řeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test. 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Negativní výsledek testu může znamenat, že ve vzorku je příliš nízké množství E.coli. V tomto případě doporučujeme diagnostiku doplnit kultivací stolice. 5. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost bakteriální infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 6. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. ÚČINNOST TESTU: Hodnocení účinnosti tohoto testu bylo provedené tak, že výsledky získané Rapid-VIDITEST E.coli O157:H7 byly porovnány takto: citlivost tohoto testu byla porovnána s citlivostí získanou při kultivaci stolice, specifita byla hodnocena při testování vzorků, které obsahovaly organismy produkující Shiga toxiny a organismy neprodukující Shiga toxiny, a vzorků od pacientů s infekcí Enterobakteriemi. Tyto vzorky byly charakterizované španělskou referenční laboratoří pro E.coli. Citlivost: Detekce E.coli O157:H7 vykazovala 100% shodu v citlivosti. Specificita: Detekce E.coli O157:H7 vykazovala 85% shodu ve specificitě. Pozitivní prediktivní hodnota je 70%, negativní prediktivní hodnota 100%. Přesnost testu je 94%. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2-30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy 5
REFERENCE: 1. THOMPSON, J., HODGE, D. and BORCZYK, A.; Rapid Biochemical Test to Identify Verocytotoxin-Positive Strains of Escherichia coli Serotype O157 ; Journal of Clinical Microbiology, Oct. 1990, Vol. 28, No. 10, pp 2165-2168. 2. VALLANCE B.A. and FINLAY B.B., Exploitation of host cells by enteropathogenic Escherichia coli, PNAS, August 2000, Vol. 97, No. 16, pp. 8799-8806. 3. BLANCO, M. et al. Escherichia coli Verotoxigénicos (ECVT) en Espana: ECVT O157:H7 y NO-O157 en humanos y alimentos. El ganado bovino y ovino como reservorio. Técnicas para detección de ECVT Laboratorio de Referencia de Escherichia coli (LREC), Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, 27002 Lugo. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum exspirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6