Testovací sada Synovasure PJI Lateral Flow Test alfa-defenzinu na periprotetickou kloubní infekci Dodávaná společností Dodatečné informace o produktu naleznete na webové stránce www.cddiagnostics.com Před použitím výrobku si uživatelé musí pečlivě přečíst celý tento příbalový leták. Při provádění testu postupujte přesně dle uvedených pokynů. Nedodržení těchto pokynů může vést k nepřesným výsledkům. OMEZENÍ Tento test nebyl schválen pro použití u skupiny pacientů bez totální kloubní náhrady. NÁZEV A ÚČEL POUŽITÍ Test Synovasure PJI Lateral Flow je imunologický test sloužící jako doplněk ke zjištění periprotetické kloubní infekce (PJI) v synoviální tekutině u pacientů s bolesti a/nebo zanětem ve vyměněném kloubu. Test Synovasure PJI Lateral Flow měří lidský alfadefenzin 1-3 v synoviální tekutině u pacientů s totální kloubní náhradou. Alfa-defenziny jsou antimikrobiální peptidy uvolněné aktivovanými neutrofily jako odpověď na infekci. Výsledky testu Synovasure PJI Lateral Flow spolus dalšími klinickými a diagnostickými nálezy jsou vymezeny k použití při diagnostice infekce pacienta. Test Synovasure PJI Lateral Flow slouží k určení, zda-li je v synoviální tekutině přítomna infekce. Není ovšem určen ke stanovování specifického typu infekce či jejího původu, rozsahu a závažnosti. Lékaři jen poskytuje pozitivní nebo negativní výsledek na přitomnost alfa-defenzinu 1-3 v synoviální tekutině v důsledku infekce. PRINCIP TESTU Test Synovasure PJI Lateral Flow je imunologický test sloužící k detekci hladiny alfa-defenzinu v synoviální tekutině u pacienta s potenciální PJI. Testovací set zahrnuje kazetu pro jednorázové použití (balena zvlášť), plastovou lahvičku s fialovým uzávěrem s rozpouštěcím/stabilizačním činidlem - pufrem, jednorazovou pipetu Microsafe a průhlednou ampulku bez uzávěru pro vzorek odebrané synoviální tekutiny. Každý kompletní set obsahuje všechny výše zmíněné části, které jsou pro tento test nezbytné. Odeberte synoviální tekutinu do plastové ampulky, poté použijete jednorázovou pipetu Microsafe pro odběr přesně daného množství (po černou rysku pipety) synoviální tekutiny z plastové ampulky. Obsah pipety vyprázdníte do předem odměřeného rozpouštěcího pufru (lahvička s fialovým uzávěrem). Aplikujete právě tři (3) kapky ze vzniklého roztoku do testovacího okénka kazety, aby mohl začít testovací proces. Svrchní vrstva v testovacím okénku nejprve odstraňuje buněčný materiál, poté roztok dále putuje do pufrovací oblasti a mísí se s konjugatem zlata, který byl označen anti-alfadefenzinovými protilátkami. Vzorek pak dále postupuje přes testovací linii a kontrolní linii. Linie s vysledkem testu ( a-d ) se objeví tehdy, je-li hladina alfa-defenzinu ve vzorku vyšší než hraniční (cut-off) koncentrace. Kontrolni linie ( C ) potvrzuje, že roztok spravně protekl kazetou. Výsledky lze odečítat za deset (10) minut. VAROVÁNÍ K diagnostickému použití in vitro Před použitím výrobku si pečlivě přečtěte tento příbalový leták. Nedodržení uvedených pokynů může vést k nepřesným výsledkům. Tato sada byla vyvinuta pouze pro použití se synoviální tekutinou. Použití této testovací sady s jakýmkoli jiným typem vzorku může vést k nesprávným výsledkům testů. Použití změněné synoviální tekutiny jako například po proplachu fyziologickým roztokem nebo při odebrání tekutiny ihned po injekci může mít vliv na průběh testu. Tento test smí být prováděn pouze u pacientů s totální kloubní náhradou. Tento test není určen k načasování reimplantace ve dvou krocích. Tento test by se měl provádět při pokojové teplotě (15 30 C). Mimo tento rozsah test neprovádějte. Doporučená skladovací teplota testovací sady je 2 30 C. Nezaměňujte testovací zařízení či součásti za jiná zařízení a součásti ze sad s jinými čísly šarží. Str. 1 z 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ Bezpečnostní opatření Se vzorky a materiály zacházejte jako s materiálem, který by mohl přenášet infekční agens. Při manipulaci se vzorky a během testování používejte jednorázové rukavice. Po provedení každého testu si vyměňte rukavice a pečlivě umýjte ruce. Zlikvidujte všechny vzorky. S veškerými materiály použitými při testu zacházejte jako s potenciálně infekčními. Likvidace všech vzorků a materiálů musí splňovat veškerá místní a státní nařízení o likvidaci infekčního odpadu. Bezpečnostní opatření při manipulaci se zařízením Všechny součásti testovací sady použijte pouze jednou a náležitě je zlikvidujte. Žádné součásti testu nepoužívejte opakovaně. Před testem vždy zkontrolujte datum expirace. Testovací sady nepoužívejte po datu expirace vytištěném na krabici. Také zkontrolujte všechny součásti testovací sady, zda nejsou poškozené. Je-li některá ze součástí sady poškozená, sadu zlikvidujte a pro test si vyberte novou testovací sadu. ČINIDLA A DODÁVANÝ MATERIÁL Kontrolní testovací sada Synovasure PJI Lateral Flow (5 v sadě) REF 00-8888-125-05 Skladování: 2 až 30 C. Spotřebujte do uvedeného data expirace. Jednorázové použití. Nepoužívejte opakovaně. Testovací zařízení (REF P50023), množství: 5 (Obsahuje potaženou membránu s testovací linií obsahující anti-alfadefenzin a kontrolní linií obsahující myší protilátky, anti-alfa-defenzinovou část potaženou částicemi zlata, část pro pufrování vzorku a část odstraňující buněčné části. Vše je v ochranném plastovém pouzdře, uzavřené v sáčku s vysoušedlem.) Vybavení pro přípravu vzorku (REF P50024), množství: 5 (uzavřené pouzdro obsahující předplněný fosfátový pufr, lahvička s kapátkem (REF P50025), jednorázová zkumavka Microsafe (včetně náhradní), kelímek na vzorek Návod k použití NEDODÁVANÝ MATERIÁL Časovač DALŠÍ MATERIÁL Kontrolní testovací sada Synovasure Lateral Flow (2 v sadě) REF 00-8888-125-02 Dostupná jako příslušenství k testovací sadě Synovasure Lateral Flow POSTUP POUŽITÍ TESTOVACÍ SADY SYNOVASURE PJI LATERAL FLOW 1. Rozpuštění: Otevřete vybavení pro přípravu vzorku. Odstraňte fialový vršek z lahvičky s kapátkem a odložte jej stranou. Do zkumavky Microsafe odeberte synoviální tekutinu. Držte zkumavku Microsafe vodorovně a dotkněte se špičkou zkumavky Microsafe vzorku synoviální tekutiny. Díky vzlínání se vzorek automaticky nasaje k plnicí linii a zde se zastaví. POZNAMKA: Při odebírání vzorku nezakrývejte průduch ani pipetku nemačkejte. Než přejdete k dalšímu kroku, musí tekutina dosáhnout plnící linie (černá ryska pipetky). U velmi viskózních vzorků může odběr synoviální tekutiny trvat déle. Vyprázdněte obsah pipetky Microsafe do předplněné lahvičky s kapatkem: pětkrat (5 ) stlačte rozšiřený konec pipetky MicrosafeR, aby se vypudila veškerá viskózní synoviální tekutina. Lahvičku s kapatkem uzavřete víčkem apromíchejte jemným protřepáním. 2. Vyjměte testovací zařízení z fólie (až těsně před použitím). Nepoužívejte, je-li fólie porušená. Str. 2 z 5
3. Umístěte kazetu na rovný povrch. Odstraňte průhlednou krytku u lahvičky s kapatkem a aplikujte právě tři (3) samostatné kapky do okénka testovací kazety. Pro nejlepší výsledek držte lahvičku s kapátkem při nanesení vzorku tekutiny ve svislé poloze. Kazeta musí být během testu na rovném povrchu. Po čas testu se vyhněte manipulaci s kazetou. 4. Ponechte test nerušeně probíhat po dobu deseti (10) minut. Výsledky testu interpretujte podle popisu v části Interpretace výsledků testu. Neodečítejte výsledky po uplynutí dvaceti (20) minut. Po ozřejmění/pročištění okénka kazety se objeví červenorůžova kontrolní linie. Kontrolni linie [C] je nejvyšší linií v testovacím pruhu. POSTUP POUŽITÍ KONTROLNÍ TESTOVACÍ SADY SYNOVASURE LATERAL FLOW 1. Kontroly si připravte podle návodu k použití dodaného s kontrolní testovací sadou Synovasure Lateral Flow. 2. Kontroly proveďte jako klinické vzorky dle uvedených instrukcí k testovací sadě Synovasure PJI Lateral Flow. VNITŘNÍ KONTROLA KVALITY: Procedurální kontrolní linie ( C ) je zabudovaná v každém testovacím zařízení a značí, že tekutina správně protekla zařízením. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Poznámka: Alfa-defenzin je na kazetě označován jako a-d. Intenzita linií kontroly zařízení a výsledku testu nemusí být stejná. Jakákoli červenorůžová linie, bez ohledu na intenzitu nebo velikost, je linie. Po uplynutí dvaceti (20) minut již test neinterpretujte. Test platný: Před odečítáním linií výsledků testu si ověřte, že se vytvořila kontrolní linie zařízení označená jako C. Nezobrazilali se kontrolní linie zařízení, test je neplatný a získané výsledky nelze použít. Zopakujte jej s novým zařízením. Negativní: NEGATIVNÍ výsledek na alfa-defenzin prokazuje přítomnost POUZE červenorůžové kontrolní linie (linie C) bez linie a-d s výsledkem testu po deseti (10) minutách. Pozitivní (ne negativní): POZITIVNÍ výsledek na alfa-defenzin prokazuje přítomnost červenorůžové kontrolní linie (linie C) A ZÁROVEŇ červenorůžové linie a-d s výsledkem testu. Příklady výsledků Test platný Test neplatný - Negativní + Pozitivní Str. 3 z 5
CHARAKTERISTIKY CHOVÁNÍ ALFA-DEFENZINŮ Klinické chování biomarkeru alfa-defenzinu k diagnostice periprotetické kloubní infekce bylo zjištěno pomocí ELISA testu na alfa-defenzin ve studii se 158 pacienty za splnění následujících kritérií: (1) Totální artroplastika/spacer kyčle nebo kolene ke zhodnocení revizní artroplastiky kyčle nebo kolene. (2) Dostatek klinických informací k použití kritérií MSIS pro PJI. (3) Dostatek synoviální tekutiny pro studijní metody. Do této studie byli zahrnuti pacienti, kteří dostali před aspirací antibiotika, pacienti s diagnostikovaným systémovým zánětlivým onemocněním a pacienti s infekcí mimo kloub. Alfa-defenzin byl správně diagnostikován ve 152 ze všech 158 artroplastik s celkovou specificitou 95,8 % (95 % CI: 90,5 98,6 %) a senzitivitou 97,4 % (95 % CI: 86,1 99,6 %). Alfa-defenzin dále správně identifikoval kultivačně negativní infekce, které představují přibližně 36 % pacientů s PJI v této studii. Charakteristiky chování testu Lateral Flow Chování testu Lateral Flow bylo hodnoceno ve srovnání s laboratorním testem. Pozitivní shoda byla 100 % (59/59) a negativní shoda byla 95,6 % (175/183). Přesnost K určení přesnosti eseje byly provedeny testy s různou přesností vzorků (4 vzorky; nízce negativní, vysoce negativní, nízce pozitivní a vysoce pozitivní), a to duplicitně dvakrát denně po dobu 5 dní. Procento (%) správných výsledků bylo 100, 97,5, 95 a 100 v příslušném pořadí. Interferující látky Efekt hemoglobinu, triacylglicerolů a bilirubinu (konjugovaného a nekonjugovaného) byl testován u alfa-defenzin 1-3 negativních a alfa-defenzin 1-3 pozitivních vzorků dle postupů popsaných v protokolu CLSI EP7-A2 3. Nejvyšší koncentrace, u které se neočekával žádný vliv na klinickou interpretaci výsledků, byla pro jednotlivé látky následující: hemoglobin 0,5 g/dl; triacylglyceroly 600 mg/dl; konjugovaný bilirubin 5 mg/dl a nekonjugovaný bilirubin 15 mg/dl. Dodatečné informace o produktu naleznete na webové stránce www.cddiagnostics.com Str. 4 z 5
REFERENCE 1. Deirmengian C, Kardos K, Kilmartin P, Cameron A, Schiller K, Parvizi J. Diagnosing Periprosthetic Joint Infection: Has the Era of the Biomarker Arrived? Clin Orthop Relat Res. 2014 Mar 4. [EPUB před výtiskem] 2. Parvizi, J., Zmistowski, B., Della Valle, C., Bauer, T. W., Malizos, K. N., Alavi, A., Bedair, H., et al. (2013). Diagnosis of Periprosthetic Joint Infection. The Journal of arthroplasty p200-220. 3. CLSI. Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline Second Edition. CLSI document EP7-A2 (ISBN 1-56238-584-4). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2005. LEGENDA K SYMBOLŮM CD Diagnostics, Inc. 650 Naamans Road Suite 100 Claymont, DE 19703 USA Obelis S.A. Bd Général Wahis 53 1030 Brusel, Belgie Str. 5 z 5