Rapid-VIDITEST H. pylori (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku Helicobacter pylori ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST H. pylori je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci Helicobacter pylori ve stolici. ÚVOD: Helicobacter pylori (H. pylori) je spirálovitá bakterie, která bývá nalézána na žaludeční sliznici nebo adheruje k epitelu žaludku. H. pylori je příčinou více než 90% vředů duodena a více než 80% žaludečních vředů. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST H. pylori je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Helicobacter pylori ve stolici. Na testovacích zónách blisteru jsou navázány myší monoklonální protilátky proti antigenům H. pylori. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-h. pylori myší monoklonální protilátky červená mikrosféra). Směs barevného konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru přes testovací zóny kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního výsledku budou specifické protilátky imobilizované na testovací zóně blisteru vázat barevné částice. Objeví se různé barevné linky v závislosti na přítomnosti bakterie ve vzorku. Pomocí těchto linek se interpretuje výsledek. Směs se pohybuje dále směrem nahoru do kontrolní zóny, kde jsou imobilizované protilátky pro kontrolní zónu. V té by se měla vždy objevit červená linka. Přítomnost červené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací blistery - Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky (ne vodnaté nebo odebrané při průjmu) odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při 2-4 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C. Před použitím vzorky nechte vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací blister, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. A) Provedení testu nakapáním vzorku na blister 1. Rozstřihněte hliníkovou folii v místě perforace, získáte tak jednotlivé blistery. Obal blisteru držte opatrně za okraj, otevřete na vyznačeném místě. Blister nevyndávejte z obalu, dokud nejste připraveni testovat. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4). 3. Vyjměte blister z obalu tak, abyste se nedotýkali testovacích membrán a položte ho na vodorovnou podložku. Aplikujte 5 kapek nebo 150 L ředěného vzorku přímo z odběrové zkumavky na bílý konec blisteru. Pro každý vzorek a kontrolu používejte novou zkumavku. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky) bez další manipulace s blisterem. B) Provedení testu ponořením blisteru do zkumavky 1. Rozstřihněte hliníkovou folii v místě perforace, získáte tak jednotlivé blistery. Obal blisteru držte opatrně za okraj, otevřete na vyznačeném místě. Blister nevyndavejte z obalu, dokud nejste připraveni testovat. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4). 3. Nakapejte 10 kapek ředěného vzorku z odběrové zkumavky do testovací zkumavky nebo lahvičky (5). Vyjměte blister z obalu tak, abyste se nedotýkali testovacích membrán a vložte blister vertikálně bílou částí dolů do zkumavky se vzorkem tak, aby byla hladina vzorku pod šipkami vyznačenými na blisteru. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky) bez další manipulace s blisterem. Pozn: V závislosti na koncentraci H. pylori můžete pozorovat pozitivní výsledek již za 3 minuty. Pro potvrzení výsledku je doporučeno dodržet reakční dobu 10 minut. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku. Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá výsledková zóna. Úsek okénka dále od bílého konce se nazývá kontrolní zóna. H.pylori H.pylori pozitivní negativní Neplatný NEGATIVNÍ: Objeví se pouze horní ČERVENÁ linka (kontrolní). POZITIVNÍ: Objeví se DVĚ ČERVENÉ linky. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně (vrchní) neobjeví červená linka bez ohledu na to, zda se v zóně výsledku (spodní) objeví linka. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku nebo nesprávné provedení testu. V tomto případě opakujte přípravu vzorku a proveďte test na novém blisteru. Pokud se problém opakuje, kontaktujte distributora. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky ve výsledkové zóně závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví červená linka. V testu je použit interní standard. Červená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu blisteru. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat přípravu vzorku a test. 3. Některé vzorky můžou způsobit snížení intenzity červené kontrolní linky. 4. Výsledky tohoto testu pouze naznačují přítomnost infekce Helicobacter pylori. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 5. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. ÚČINNOST TESTU: Citlivost: Detekční limit: Kultura bakterií H. pylori byla sonikována, centrifugována a stanovena koncentrace proteinů v kultuře. Takto připravený referenční antigen H. pylori byl ředěn ve fosfátovém pufru s přídavkem BSA a testován podle návodu k soupravě. Detekční limit této soupravy byl stanoven 4 8 ng/ml. Specificita: Hodnocení účinnosti tohoto testu bylo provedené tak, že výsledky získané Rapid-VIDITEST H. pylori testem byly porovnány s výsledky na jiném komerčně dostupném membránovém testu. Z tohoto porovnání byla stanovena citlivost a specificita testu. Detekce H. pylori vykazovala 95 % shodu výsledků s komerčními testy. Protilátky použité v testu Rapid-VIDITEST H. pylori rozpoznávají epitopy přítomné u antigenů ve stolici, stejně tak i antigeny připravené in vitro z bakteriální kultury. Sonikovaný extrakt. H. pylori z různých komerčně dostupných vzorků reaguje v testu Rapid-VIDITEST. Interference protilátkami HAMA ani vysokou hladinou revmatoidního faktoru ve vzorcích stolice není významná. Některé vzorky stolice mohou vytvářet kontrolní linku světle červené barvy. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2-30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - Odpad likvidujte v souladu jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5
REFERENCE: 1. Bruce E. Dunn, Hartley Cohen, Martin J. Blaser. Helicobacter pylori. Clin.Microbiol.Rev.10(4), 720-741, Oct.(1997). 2. Martin J. Blaser. Helicobacter pylori and gastric diseases. BMJ; 316;, 1507-1510 (1998). 3. John L. Telford, Antonello Covacci, Rino Rappuoli, Paolo Ghiara. Immunobiology of Helicobacter pylori infections. Current Opinion in Immunology, 9, 498-503 (1997). POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6