Rychlá kvalitativní detekce lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice Všeobecné informace použití a vyhodnocení Použití FOB plus test na okultní krvácení je rychlý vizuální test, založený na principu imunochromatografické metody určený k průkazu hemoglobinu ve vzorcích stolice. Test je určen pouze pro in-vitro diagnostiku v laboratořích a lékařských ordinacích. Tento test má za cíl včasnou diagnostiku poruch dolního gastrointestinálního traktu. Kolorektální karcinom je jedním z nejčastěji diagnostikovaných nádorů a jedním z nejčastějších příčin smrti (Lieberman, 1994, MMWP, 1995). Kolorektální karcinom může být prostřednictvím testů detekován velmi brzy a tím se může snížit stupeň úmrtnosti. (Dam et. al., 1995, Miller, 1995, a Lang, 1996) Předchozí testy na detekci lidského hemoglobinu ve stolici užívaly guajakovou metodu, která vyžadovala speciální dietní režim, aby nedocházelo k falešně pozitivním nebo negativním výsledkům. Vysoká specifita FOB plus zajišťuje detekci lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice. Tento test je založený na imunochemické metodě, která přispěla k přesnější detekci lidského hemoglobinu a tím i k přesnější detekci krvácení do dolního gastrointestinálního traktu oproti tradičnímu guajakovému testu a to především díky své vyšší senzitivitě a specifitě (Frommer et. al., 1988, St. John et. al., 1993). Princip BioNexia FOB test je založen na imunochromatografické metodě, která odhaluje pouze lidský hemoglobin prostřednictvím nanesených specifických protilátek. Hemoglobin obsažený ve vzorku stolice reaguje se specifickými monoklonálními protilátkami, na které jsou navázány zlaté částečky. Tento komplex je nanesený na membránu a vzlíná do testovací zóny (T), na které jsou protilátky proti hemoglobinu. V případě pozitivního výsledku se molekuly ze vzorku stolice, obsahující zlatě obarvené protilátky, navážou v testovací zóně a jsou viditelné pomocí růžového/červeného zbarvení. V případě negativního výsledku nejsou přítomny žádné hemoglobinové molekuly, které by se mohly navázat na testovací linii (T) jako komplexy, a proto také nemůže být žádné zabarvení v testovací linii (T). Jestliže kontrolní linie zrůžoví/zčervená, je to záruka, že vzorek byl odebrán správně a správně prošel přes membránu. Pak je tedy test validní. Skladování a stabilita Testovací soupravu skladujte při teplotě 2-30 C v originálním obalu po dobu skladovatelno sti.
Bezpečnostní opatření Pouze pro in-vitro diagnostiku a pouze pro použití v laboratořích a lékařských ordinacích. Nepoužívejte testovací sadu po exspirační době. Nekombinujte reagencie a kazety ze souprav s odlišnou šarží. Otevřete obal kazety těsně před použitím. Všechny vzorky stolice a pomocný materiál použitý k testování jsou infekční. Likvidujte kontaminovaný materiál dle platných bezpečnostních přepisů. PBS pufr obsahuje azid sodný, který reaguje s mědí a tvoří potenciálně explozivní kovové azidy. Azid je silně toxický, ale v koncentraci, která je v roztoku PBS, je možné jej v nekonečném ředění vylévat do výlevky. Pacienti by se měli řídit podle instrukcí pro sběr a odebrání vzorku a neměli by odebírat vzorky během menstruace nebo v případě krvácejících hemoroidů. Je doporučené použít papírový pruh pro sběr stolice, aby nedošlo ke kontaminaci krví z moči nebo k reakci komponent ve vodě z toalety. Poskytovaný materiál 25 jednotlivě balených testovacích kazet 25 sběrných nádobek na vzorky 25 návodů na sběr vzorků 25 lepivých papírových pruhů na záchyt stolice Návod k použití Sběr vzorku a příprava 1. Testovací sada musí mít před samotným testem pokojovou teplotu. 2. Proveďte sběr stolice za pomoci lepivého papírového pruhu. 3. Držte odběrovou lahvičku svisle a rozšroubujte modrý uzávěr. Vyjměte odběrovou tyčinku. 4. Ponořte spirálovou tyčinku do tří různých míst stolice. 5. Odběrovou tyčinku vložte zpět do odběrové nádobky a dobře zašroubujte. 6. Umístěte pevně uzavřenou lahvičku zpět do obálky. 7. Nadepište obálku pacientovými údaji jméno, datum narození. 8. Skladujte nádobku přes noc v chladu a chraňte ji před světlem. 9. Vzorky stolice jsou v roztoku stabilní až 15 dní. Během tohoto času je možné vzorek skladovat a přepravovat v pokojové teplotě bez nutnosti dalších měření. Pro pozdější testování musí být vzorek uložen po celou dobu při teplotě 2-8 C a do pokojové teploty přenesen krátce před provedením testu. 10. Pokud odebírá vzorek pacient doma, musí být vzorek po odběru uložen v chladu a chráněn před světlem. Provedení testu Kontrola jakosti 1. Test obsahuje kontrolu provedení testu. Barevná linie, které se objeví v kontrolní zóně, ukazuje, že test byl proveden správně. Je možné, že pozadí testu během testování lehce zežloutne v závislosti na barvě vzorku stolice. Toto zabarvení není na škodu, pokud nebrání odečítání výsledku.
Postup 1. Testovací kazeta i vzorek stolice by měly mít před samotným testem pokojovou teplotu (20 C 30 C). 2. Vyndejte testovací kazetu z obalu, přeneste do pokojové teploty, abyste zamezili kondenzaci vlhkosti na membráně kazety a označte kazetu jménem nebo jiným označením pacienta. 3. Dobře protřepejte odběrovou nádobku, aby se vzorek stolice řádně smísil s extrakčním roztokem. 4. Rozšroubujte bílý uzávěr. Za použití gázy nebo buničité vaty otočením odlomte plastovou špičku odběrové nádobky. Držte odběrovou nádobku svisle a nakapejte 4 kapky do kruhové jamky na testovací kazetě. 5. Po 5 minutách odečtěte výsledek. Silně pozitivní výsledek může být vyhodnotitelný dříve. Odečtěte výsledek nejpozději během 8 minut od aplikace roztoku do kruhové jamky kazety. Interpretace výsledků Pozitivní výsledek: Dvě růžově zbarvené linie; jedna se objeví v kontrolní zóně (C) a druhá v zóně testovací (T). Při testování silně pozitivních vzorků se intenzita kontrolní linie může zdát slabší. Není doporučeno porovnávat intenzitu barevných linií. Negativní výsledek: Jen jedna růžově zbarvená linie v kontrolní zóně. Žádná v testovací zóně. Chybný test: Jestliže se ani v jedné zóně neobjeví žádná linie nebo se objeví jen linie v testovací zóně, znamená to, že test nefunguje správně, nebo testovací materiály nejsou v pořádku. Opakujte test znovu s jinou testovací kazetou nebo kontaktujte výrobce. Omezení 1. Tato testovací souprava je určena jako kvalitativní test přítomnosti hemoglobinu ve vzorcích stolice. Pozitivní výsledek signalizuje přítomnost krve ve stolici. Kromě intestinálního krvácení může mít krev ve stolici další příčiny, jako hemoroidy nebo smíchaní vzorku stolice s močí obsahující krev. 2. Každé intestinální krvácení se nemusí týkat jen kolorektálního karcinomu nebo polypů tlustého střeva. Výsledky získané pomocí těchto testů by měly být ověřeny dalšími klinickými testy. 3. Negativní výsledky nevylučují rakovinu tlustého střeva nebo polypózu. Některá raná stádia této choroby se nemusí prezentovat přítomností krve ve stolici nebo se nemusí projevit vůbec. Vzorek stolice může být odebrán z nereprezentativního místa. Polypy v počátečním stadiu nemusí bezpodmínečně krvácet. 4. Moč a nadměrné množství vody z WC může způsobit chybný výsledek testu. Proto je doporučeno používat papírový lepivý pruh na sběr vzorku. 5. Vzorky stolice by neměly být odebírány během menstruace nebo 3 dny před a po, v případě krvácení konečníku způsobené zácpou, v případě hemoroidů nebo v případě léků podávaných rektálně. Toto může způsobit falešně pozitivní výsledky. Tento test může být méně citlivý při odhalování krvácení v tenkém střevě, protože během dalších procesů ve střevě může docházet k dalšímu vstřebávání krve.
Charakteristika testu A. Analytická citlivost Vzorek obsahující lidský hemoglobin v koncentraci přibližně 2 µg/g (= 40 ng hemoglobinu/ml v roztoku po extrakci) je vyhodnocen jako pozitivní výsledek. V některých případech, kdy vzorek obsahuje méně než 4 ng/ml hemoglobinu, může být také vyhodnocen jako pozitivní. To je pravděpodobné zejména po 30 minutách. PROZONE efekt BioNexia Plus také funguje i při extrémně vysokých hodnotách hemoglobinu (>500,000 ng/ml). B. Analytická specifita BioNexia FOB plus je specifický pro lidský hemoglobin a nemá zkříženou reakci s hemoglobinem hovězím, vepřovým, králičím, koňským a ovčím až do koncentrace 0.5 mg/ml v extrakčním roztoku. FOB plus také neukáže žádnou zkříženou reakci s bilirubinem, vitaminem C ani křenovou peroxidázou. Poznámka Nedávno publikovaná studie Univerzity Shinshu v Japonsku zkoumala cenu/prospěch vícenásobného používání testu. Tato studie ukázala, že senzitivita se s vyšším počtem testů zvyšuje, přestože specifita se snižuje. Počet testů Senzitivita Specifita 1 58% 96% 2 89% 95% 3 100% 94% POUŽITÁ A DOPORUČENÁ LITERATURA 1. Dam, J.V., et. al.; Feccal Blood Screening for Colorectal Cancer; Archive of Internal Medicine; (1995) 155:2389-2402. 2. Frommer, D. J. et. al.; Improved Screening for Colorectal Cancer by Immunological Detection of Ocult Blood; British Medical Journal; (1988) 296:1092-1094. 3. Lieberman, D.; Screening/Early Detection Model for Colorectal Cancer, Why Screen? Cancer Supplement; (1994) 74:2023-2027. 4. Miller, A. B.; An Epidemiological Perspective on Cancer Screening; Clinical Biochemistry (1995) 28: 41-48. 5. Ransohoff, D. F. and Lang, C. A.; Improving the Feccal Occult-Blood Test; The New England Journal of Medicine; (1996) 334:189-190. 6. Screening for Colorectal Cancer-United States, 1992-1993, and New Guidelines; Mobility and Mortality Weekly Report; (1995) 45: 107-110. 7. St. John, D. J. B., et al.; Evaluation of New Occult Blood Test for Detection of Colorectal Neoplasia; Gastroenterology; (1993) 104:1661-1668. 8. Yamamoto M., Nakama H., Cost-effectiveness analysis of immunochemical occult blood screening for colorectal cancer among three fecal sampling methods: Hepatogastroenterology, (2000) 47 396-399.
SYMBOLY = číslo šarže = datum exspirace _ Máte otázky k použití nebo principu testu? Kontaktujte Vašeho dodavatele nebo výrobce.