SD Rapid test Norovirus Návod k použití soupravy Výrobce: STANDARD DIAGNOSTICS, INC. 156-68 Hagal-dong, Giheung-gu, Yongin-si, Kyonggido, Korea. Tel: +82 31 899 2800, fax: +82 31 899 2840, www.standardia.com Distributor: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: SD Rapid test Norovirus je rychlý imunochromatografický test pro kvalitativní detekci norovirů genoskupiny I (GI) a genoskupiny II (GII). Test umožňuje rychlou a jednoduchou detekci antigenů ve vzorcích stolice. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Noroviry jsou hlavní příčinou gastroenteritid ve světě s odhadovanými 23 miliony případů ročně v USA. Jsou přenášeny přímo z člověka na člověka, i nepřímo prostřednictvím kontaminované vody a jídla. Často jsou spojovány s ohnisky infekce ve veřejných zařízeních jako jsou sanatoria, nemocnice, jesle, věznice a výletní lodě. PRINCIP TESTU: SD Rapid test Norovirus má na povrchu testu 2 linie: T (testovací linie) a C (kontrolní linie). Tyto linie nejsou viditelné ve výsledkové zóně před aplikací vzorku. Kontrolní linie se používá jako kontrola testu. Kontrolní linie by se měla vždy objevit, pokud je test řádně proveden a reagencie jsou funkční. Pokud jsou ve vzorku přítomny noroviry, ve výsledkové zóně se objeví purpurová testovací linie. Když se vzorek aplikuje na test, noroviry ve vzorku reagují s koloidním zlatem s navázanými specifickými protilátkami, a tak tvoří komplex antigen-konjugát protilátky s koloidním zlatem. Jak tento komplex vzlíná přes výsledkovou zónu, je zachycen norovirus-specifickými protilátkami imobilizovanými v testovací linii ve výsledkové zóně a vzniká barevná linka. Pokud norovirus není ve vzorku přítomen, komplex se netvoří a neobjeví se ani barevná testovací linka. OBSAH SOUPRAVY: - samostatně balené testovací kazety s desikantem - 1 test obsahuje: zlaté konjugáty (jako hlavní komponenta): myší monoklonální protilátka anti-norovirus GI koloidní zlato (0,067±0,013 g), myší monoklonální protilátka anti-norovirus GII-koloidní zlato (0,067±0,013 g), testovací linie (jako hlavní komponenta): myší monoklonální protilátka anti-norovirus GI (0,48±0,096 g), myší monoklonální protilátka anti- Norovirus GII (0,48±0,096 g), kontrolní linie (jako hlavní komponenta): kozí anti-myší IgG (0,48±0,096 g) - odběrová zkumavka - uzávěr s kapátkem 1
- odběrové tyčinky - ředicí roztok (25ml lahvička) - kapátka - návod k použití SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ, SKLADOVÁNÍ: Před extrakcí 1. Odběr by se měl uskutečnit co nejdříve od nástupu symptomů (průjem a zvracení), protože maximální vylučování viru nastává 1-3 dny od nástupu symptomů. 2. Vzorky stolice musí být odebírány do čistých nádob bez aditiv a uchovávány v lednici (2-8 C) po dobu 72 hodin. 3. Pokud je skladování delší než 72 hodin, doporučuje se zamražení na méně než -20 C. 4. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte. 5. Vyvarujte se opakovaného zmrazování a rozmrazování vzorků. Extrahovaný vzorek 1. Pokud extrahovaný vzorek nebyl okamžitě použit, měl by být uchován při 2-8 C po dobu 72 hodin. 2. Pokud je vzorek stolice tekutý, napipetujte 0,1 ml vzorku mikropipetou a zamíchejte v ředicím roztoku. Pokud je vzorek tuhý, pomocí odběrové tyčinky odeberte malé množství vzorku stolice (cca 50-100 mg). Vložte odběrovou tyčinku do odběrové zkumavky obsahující ředicí roztok. PRACOVNÍ POSTUP (TESTOVACÍ SCHÉMA): I. Extrakce vzorku 1. Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). 2. Naplňte kapátko ředicím pufrem po rysku (obrázek, bod 1) a přeneste ho do odběrové zkumavky. 3. Opakujte krok 2. 4. Odeberte vzorek stolice (cca 50-100 mg) pomocí odběrové tyčinky. 5. Vložte odběrovou tyčinku do odběrové zkumavky s ředicím roztokem. 6. Otáčejte odběrovou tyčinku nejméně 10x až se vzorek rozpustí v ředicím roztoku. Třete tyčinku o stěnu zkumavky, vytlačte co nejvíc tekutiny. Odběrovou tyčinku zlikvidujte. II. Pracovní postup test 1. Vyjměte testovací kazetu ze sáčku, umístěte ji na rovný, suchý povrch. 2. Nasaďte uzávěr s kapátkem na odběrovou zkumavku. 3. Nakapejte 4 kapky (asi 100 l) do okénka pro vzorky. 4. V průběhu testu vidíte, jak purpurová barva přechází výsledkovou zónu ve středu kazety. 5. Odečtěte výsledek za 15 minut. Výsledky po více než 15 minutách neinterpretujte. INTERPRETACE VÝSLEDKU: 1. V levé části výsledkové zóny se objeví kontrolní barevná linka, která ukazuje, že test řádně funguje. 2. Pravá část výsledkové zóny ukazuje výsledek testu. Pokud se objeví barevná linka v pravé části testovací zóny, je to testovací linka. 2
Negativní výsledek: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna barevná linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Norovirus pozitivní: Kromě barevné linky v kontrolní zóně C se objeví také barevná linka ve výsledkové zóně T, nezáleží na tom, která se objeví dříve. To značí pozitivní výsledek. Neplatný: Test je neplatný, pokud se ve výsledkové zóně neobjeví barevná linka, a to bez ohledu na přítomnost barevné linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nesprávný pracovní postup nebo stárnutí reagencií po uplynutí expirační doby. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. INTERNÍ KONTROLA KVALITY: SD Rapid test Norovirus má na povrchu testu testovací a kontrolní linky, které nejsou viditelné před aplikací vzorku. Kontrolní linka zajišťuje kontrolu průběhu testu a měla by se objevit, pokud je test řádně proveden a reagencie jsou funkční. OMEZENÍ TESTU: 1. Negativní výsledek testu nevylučuje možnost norovirové infekce. Selhání detekce noroviru může být způsobeno faktory jako jsou: sběr vzorku v nevhodné době, kdy už se ve vzorku nachází příliš málo virionů, a nesprávný způsob sběru vzorku a nakládání se vzorkem. 2. Výsledky testu by měly být interpretovány ve spojitosti s informacemi získanými z epidemiologických studií, klinickým stavem pacienta a jinými diagnostickými metodami. CHARAKTERISTIKA TESTU: Účinnost testu byla potvrzena metodou Realtime RT-PCR. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce: Místo testování: Soonchunhyang University Cheonan Hospital Norovirus Ag citlivost a specifita: Realtime RT-PCR SD Rapid test Norovirus Total Pozitivní Negativní Pozitivní 58 11 69 Negativní 11 269 280 Citlivost 84,1% (58/69) 95% (74%-91%) Specifita 96,1% (269/280) 95% (93%-98%) PPV 86,3% (69/80) NPV 96,2% (280/291) 3
SKLADOVÁNÍ A STABILITA / BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: 1. Testovací kazeta by měla být skladována při pokojové teplotě (1-30 C). Neskladujte v lednici. 2. Ředicí roztok je stabilní do data exspirace, pokud byla souprava skladována při 1-30 C. 3. Testovací kazeta je citlivá na vlhkost i teplo. 4. Vykonejte test ihned po otevření a vyjmutí testovací kazety z obalu. 5. Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. 6. Exspirace soupravy je uvedena na vnějším obalu soupravy. 7. Nepoužívejte soupravu v případě poškození obalu nebo poškození uzavírací nálepky. 8. Zkontrolujte, zda ze nezměnila barva indikátoru vlhkosti na desikantu a pokud ano, balení vyhoďte. 9. Nepoužívejte znovu již použitou testovací kazetu. 10. Všechny komponenty soupravy jsou na jedno použití. UPOZORNĚNÍ: 1. Pouze pro diagnostiku in vitro. 2. Dodržujte přesně pracovní postup, abyste dostali správné výsledky. Osoba provádějící test musí být vyškolena pro jeho použití a musí být kvalifikovaná pro práci v laboratoři. 3. Nejezte a nekuřte při nakládání se vzorky. 4. Při práci se vzorky používejte ochranné rukavice. Po práci si důkladně umyjte ruce. 5. Vyvarujte se rozlití nebo tvorbě aerosolu. 6. Pokud došlo k rozlití, použijte vhodný desinfekční prostředek. 7. Dekontaminujte a zlikvidujte všechny vzorky, reakční soupravy a potencionálně kontaminované materiály do odpadní nádoby jako infekční odpad. 8. Vyvarujte se smíchání a záměně vzorků. 9. Buďte opatrní, abyste se vyhnuli kontaminaci konce odběrové zkumavky při kapání ředicího roztoku do okénka pro vzorky. 10. SD Rapid test Norovirus ředicí roztok obsahuje antimikrobiální prostředek, který nepředstavuje žádné riziko, pokud byly dodržovány zásady správné laboratorní praxe. Vyloučení odpovědnosti: Přestože byla uplatněna všechna opatření pro zabezpečení diagnostické spolehlivosti a přesnosti tohoto produktu, produkt je používán mimo dosahu výrobce a distributora, a výsledky proto mohou být ovlivněny vnějšími faktory a /nebo chybou uživatele. Osoba, která je subjektem diagnózy, by měla kontaktovat lékaře pro potvrzení výsledku testu. Upozornění: Výrobce a distributor tohoto produktu není zodpovědný za případné ztráty, odpovědnost, nároky, náklady nebo ztrátu, jestli přímé nebo nepřímé nebo následné, vycházející z podobné nebo nesprávné diagnózy pozitivní nebo negativní, při použití tohoto produktu. REFERENCE: 1. Clark B, McKendrick M. A review of viral gastroenteritis. Curr Opin Infect Dis 2004; 17:461-9 2. Cheng AC, McDonald JR, Thielman NM. Infectious diarrhea in developed and developing countries. J Clin Gastroenterol 2005;39:757-73. 3. Kojima S, Kageyama T, Fukushi S, Hoshino FB, Shinohara M, Uchida K, Natori K, Takeda N, Katayama K. Genogroupspecific PCR primers for detection of Norwalk-like viruses. J Virol Methods 2002;100:107-14. 4. Patel MM, Hall AJ, Vinje J, Parashar UD. Noroviruses: a comprehensive review. J Clin Virol 2009;44:1-8. 5. Bass DM. Rotavirus and other agents of viral gastroenteritis. In: Berman RE, Kliegman RM, Jenson HB, eds. Nelson textbook of pediatrics. 17th ed. Philadelphia; WB Saunders Co; 2004;1081-3. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Skladujte při 1-30 C Návod k použití Číslo šarže (LOT) Na jedno použití. Nepoužívejte znovu Katalogové číslo 4
TESTOVACÍ SCHÉMA: I. Otevřete vnější obal a prohlédněte obsah: 1. Testovací kazeta individuálně balená s desikantem 2. Odběrová zkumavka 3. Uzávěr s kapátkem 4. Ředicí roztok (25ml/lahvička) 5. Odběrová tyčinka 6. Kapátko 7. Návod k použití Otevřete obal kazety a prohlédněte obsah: 1. Výsledková zóna 2. Okénko pro nanesení vzorku a ředicího roztoku II. Pozorně si přečtěte návod k použití soupravy. III. Zkontrolujte expiraci na zadní straně obalu kazety. Pokud je souprava proexpirovaná, použijte jinou soupravu. 5
IV. Dvakrát přeneste do zkumavky vyznačený objem ředicího roztoku. V. Odeberte vzorek stolice 50-100 mg. VI. Vložte odběrovou tyčinku do zkumavky a otáčejte nejméně desetkrát. VII. Otřete tyčinku o stěnu zkumavky, vytlačte co nejvíc tekutiny. Odběrovou tyčinku zlikvidujte. VIII. Nasaďte uzávěr s kapátkem na odběrovou zkumavku. IX. Nakapejte 4 kapky do okénka pro vzorky. X. Za 15 minut odečtěte výsledek. INTERPRETACE VÝSLEDKU: Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna barevná linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Norovirus pozitivní: Kromě barevné linky v kontrolní zóně C se objeví také barevná linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Žádná linka v C zóně. Doporučujeme opakování testu. Poslední revize tohoto návodu: 11/2014 6