Rapid-VIDITEST Avian Flu Jednokrokový kazetový test pro detekci antigenu viru chřipky typu A. Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: The Rapid-VIDITEST Avian Flu test je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A ve vzorcích ptačího trusu. Test slouží jako pomocný diagnostický test při diagnostice ptačí chřipky. ÚVOD: Ptačí chřipka (chřipka typu A) je virové onemocnění obyčejně se vyskytující u ptáků. Viry ptačí chřipky mohou infikovat slepice, krůty, bažanty, křepelky, kachny, husy, perličky a řadu dalších ptáků včetně stěhovavého vodního ptactva. Jednotlivé kmeny ptačí chřipky jsou označované podle kombinace dvou proteinů: protein hemaglutinin (H), kterého je známo 16 typů (H1-H16), a neuraminidáza (N), které je známo 9 typů (N1-N9). Kmeny ptačí chřipky jsou rozdělené podle patogenicity (schopnost vyvolávat onemocnění) do dvou skupin. Většina kmenů patří mezi nízkopatogenní, a ty u infikovaných ptáků nevyvolávají žádné onemocnění anebo jen mírné projevy onemocnění. Nízkopatogenní kmeny nezpůsobují pro lidi vážnější nebezpečí. Některé kmeny nízkopatogenních kmenů (H5 a H7) mohou mutovat a dát vznik vysoce patogenním formám. Infekce vysoce patogenními kmeny ptačí chřipky probíhá pod obrazem těžší formy chřipky. Vyvolavatelem nedávné epidemie, jež působila potíže v jihovýchodní Asii, byl vysoce patogenní kmen ptačí chřipky H1N1. Lidé se mohou nakazit od ptáků, ale přenos infekce vyžaduje přímý kontakt s nakaženými zvířaty. Aby se mohly vysoce patogenní kmeny ptačí chřipky přenášet z člověka na člověka, musel by virus znovu zmutovat. PRINCIP TESTU: The Rapid-VIDITEST Avian Flu jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A v ptačím trusu. V testovacích zónách kazety je navázána myší monoklonální protilátka proti virovému antigenu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl předem ponechán vyschnout v místě aplikace vzorku. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Vzlínání pokračuje až k imobilizovaným kontrolním protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety (obsahují jednorázové plastové pipety) - Odběrová zkumavka s pufrem pro vzorky - Odběrové tampóny - Návod k použití POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - Sterilní nádoba pro odběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Seberte dostatečné množství ptačího trusu (1-2 g nebo ml u tekutých vzorků). Vzorky sbírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervantů a transportních medií). Také je možné provést výtěr přímo z kloaky pomocí stěrového tampónu. Pokud budete provádět test do 48 hodin, uskladněte vzorky v lednici při 2-4ºC. Pro dlouhodobé skladování vzorky zmrazte a udržujte při 20ºC. Vzorky před testováním nechte roztát při laboratorní teplotě. Zpracování vzorků ptačího trusu: - Pro každý vzorek použijte nové kapátko nebo odběrovou tyčinku a také novou odběrovou nádobu a odběrovou zkumavku. Odběrovou tyčinku zanořte dvakrát do vzorku trusu a vezměte malý vzorek (100 mg) (1). Vložte tyčinku do odběrové zkumavky s pufrem. - Stěr z kloaky: Tampón se vzorkem z kloaky vložte do odběrové zkumavky s pufrem a mícháním proveďte extrakci antigenu z tampónu (2). Protřepejte obsah zkumavky se vzorkem, abyste docílili důkladného rozmíchání vzorku. (3). U tekutých vzorků trusu naberte kapátkem vzorek a přidejte 100 µl do odběrové zkumavky s pufrem. 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorky trusu a odběrové zkumavky s pufrem vytemperovat na laboratorní teplotu (15 až 30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 1. Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. 2. Protřepejte obsah zkumavky, abyste docílili důkladného rozmíchání vzorku. Odlomte špičku víčka (4). 3. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu a zkumavku. Aplikujte přesně 4 kapky do oválného okénka, které je označeno písmenem S (5). Začněte měřit čas. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: ZELENÁ ČERVENÁ ČERVENÁ Negativní Pozitivní Neplatný Neplatný 3
POZITIVNÍ: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. NEGATIVNÍ: V kontrolní zóně C se objeví jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane prázdná. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKU: Intenzita červené linky v místě označeném T se může měnit v závislosti na koncentraci antigenu ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat jeho nárůst nebo pokles v čase. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Avian Flu prokazuje pouze přítomnost viru chřipky typu A v testovaném vzorku (kvalitativní detekce). Test je určen pouze pro detekci antigenu viru chřipky typu A ze vzorků ptačího trusu. Tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat jeho nárůst nebo pokles v čase. 2. Aplikování nadbytečného množství vzorku, může způsobit falešně pozitivní výsledky (objevení se hnědých proužků v testovací a kontrolní zóně). V takovém případě nařeďte vzorek pufrem a test opakujte. 3. Některé typy ptačího trusu mohou způsobovat zeslabení intenzity proužku v kontrolní zóně. 4. Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze infekce ptačí chřipkou. Veškeré výsledky musí být interpretovány v souladu s ostatními klinickými známkami a laboratorními nálezy, které má veterinář k dispozici. OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Infekce nízkopatogenními kmeny se často vyskytuje u divoce žijícího ptactva. Ve většině případů probíhá bezpříznakově nebo se projevuje jako lehké onemocnění. Ojediněle je infekce nízkopatogenními typy smrtelná. Nízkopatogenní typy ptačí chřipky nejsou nebezpečné pro lidské zdraví, včetně nízkopatogenního typu H5N1. Vysoce patogenní typy viru se rychle šíří a často vedou k úhynu slepic a krůt. Zástupcem vysoce patogenních typů je vysoce patogenní typ H5N1. V zemích, kde byl detekován virus vysoce patogenního kmene H5N1 uhynuly následkem infekce milióny ptáků. Tento virus také infikoval lidi, přenos byl ve většině případů přímým kontaktem s nakaženými ptáky. Vysoce patogenní typ H5N1 nebyl hlášen na území Spojených států. Jiné vysoce patogenní kmeny viru ptačí chřipky byly ve Spojených státech již třikrát eradikovány, a to v letech 1924, 1983 a 2004. Během těchto epidemických vzplanutí ptačí chřipky nebyla hlášena žádná závažná onemocnění způsobená přenosem infekce na člověka. 4
VLASTNOSTI TESTU: Citlivost a specifita: Porovnání bylo provedeno na vzorcích ověřených technikou RT-PCR. Rapid-VIDITEST Avian Flu test byl vysoce specifický (>99%) a také vysoce citlivý (>97%). Křížové reakce S testem Rapid-VIDITEST Avian Flu byla provedena studie křížové reaktivity. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými gastrointestinálními patogeny a jinými organizmy a látkami, které se příležitostně mohou nacházet v ptačím trusu (Rotavirus, Giardia lamblia). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro profesionální použití in vitro. - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. - Testy až do použití uchovávejte zatavené v neporušených obalech. - Pokud je hliníkový obal porušený, test nepoužívejte. - Používejte ochranný oděv a ochranné rukavice. Při práci nejezte, nepijte a nekuřte. - Se vzorky manipulujte jako s infekčním materiálem. - Testovací kazetu likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. - Test proveďte nejpozději do 2 hodin od otevření hliníkového obalu. REFERENCE AVIAN INFLUENZA Low Pathogenic H5N1 vs. Highly Pathogenic H5N1 Latest UPDATE July 23, 2007. United States Department of Agriculture (USDA) Fact Sheet. POUŽITÉ SYMBOLY Určeno pro diagnostiku in vitro Datum exspirace Číslo šarže Výrobce Datum poslední revize české verze: 04/ 2014 5
6