Interpretace sérologických nálezů u chlamýdií MUDr. Dana Hrubá VIDIA-DIAGNOSTIKA Poliklinika Černý Most, Praha 9 hruba@vidia-diagnostika.cz
Onemocnění u lidí způsobovaná chlamydiemi Druh chlamydií Sérotypy Onemocnění Ch. trachomatis A, B, Ba, C trachom D, Da, E, F, G, uretritis, epididymitis, prostatitis H, I, Ia, H, K cervicitis, endometritis, salpingitis konjunktivitis Reitrův syndrom, reaktivní artritis perihepatitis proktitis pharyngitis, pneumonie bartolinitis, chorioamniotitis L1, L2, L2a, L3 LGV Ch. psittaci ornitosa-psitakosa potraty Ch. pneumoniae pharyngitis, sinusutis bronchitis, pneumonie, asthma, CHOPN, onem. mimo respirační trakt
% Séroprevalence chlamydiových genus a species specifických IgG v populaci ČR věková skupina Sodja I., 1998: Zprávy CEM 7: 34-36
Antigeny zevní membrány buněčné stěny chlamydií LPS - rodově specifický antigen MOMP (40kDa) - druhově specifický antigen OMP2 (56 kda), OMP3 (12,5 kda) na cystein bohaté proteiny, rodově specif. Proteiny o mol.váze 90-100 kda (CP a Cps) chsp prozánětlivě působící protein
Sérologická dg chlam. infekcí Elisa testy (rodově specifický LPS antigen, časnější tvorba protilátek, dříve mizí). MIF, Elisa testy (druhově specifický MOMP antigen, pozdější tvorba protil., přetrvávají déle). Doporučené odběrové schema: 1. sérum v době počátečních příznaků 2. sérum za 2-3 týdny (3. sérum za 6-8 týdnů) Detekce anti-chsp60 IgG U infekcí Ch. pneumoniae v současné době téměř jediná možnost diagnostiky. U infekcí Ch. trachomatis doplňkové vyšetření, na prvním místě by měla být detekce Ag, DNA (vyjímkou jsou sterility), negativita Ab nevylučuje akutní infekci
Hodnocení sérol.nálezů a DNA Ch.trachomatis (CT) Pacient DNA CT Anti-Ch.trachomatis IgG Anti-Ch.trachomatis IgA Č.1 negativní negativní negativní Č.2 negativní poz. ++ 2,74 negativní Č.3 negativní poz. ++ 3,32 poz. + 1,65 Č.4 pozitivní negativní negativní Č.5 pozitivní poz. ++ 3,21 negativní Č.6 pozitivní poz. +++ 4,35 poz. ++ 3,26
Anti-cHSP60 IgG Heat shock proteiny (HSP) jsou vysoce konzervované buněčné stresové proteiny, které se vyskytují ve všech buňkách, prokaryotických i eukaryotických, a mají pozoruhodně vysokou homologii (homologie HSP mezi člověkem a myší je 99,9%, mezi člověkem a bakteriemi cca 60%). Mikrobiální HSP jsou silné imunogeny a v průběhu infekce jejich syntéza silně narůstá. Současně se exprimují i lidské HSP, aby ochránily humánní buňky. Vzhledem k vysoké homologii mezi proteiny může docházet ke zkříženým reakcím, což v konečném důsledku může vyústit v autoimunitní reakce. Test chsp60 IgG Elisa (medac) používá jako antigen rekombinantní protein tepelného šoku 60 (chsp60) z Ch.trachomatis. I když tento test zachytává převážně protilátky proti HSP60 Ch.trachomatis, tak vzhledem k velmi vysoké homologii mezi druhy chlamýdií na úrovni proteinů (95%) je možný záchyt protilátek i proti Ch.pneumoniae. Nelze i vyloučit, že pozitivita těchto protilátek je odrazem buněčného stresu, který má jinou příčinu, než chlamydiovou infekci.
LGV v ČR 11 laboratorně potvrzených případů převážně u HIV + pacientů (NRL pro chlamydie, Seegene, kapilární elektroforéza) 1.pacient r.2010 CT (susp.lgv) bilat.inq.lympadenopatie s perforací 2.,3.,4., pacient 5/2011 epid. souvislost proktitidy 5. pacient 6/2011 bilat.inq.lympadenopatie s perforací 6 případů proktitid (během února a března 2012) sérologicky LGV nelze odlišit, vždy přímý průkaz
Vyšetřovaný materiál (Ch.pneumoniae) sérum cca 5 ml srážlivé krve protilátky nesrážlivá krev (cca 5-10ml) DNA CP (PCR) z periferních leukocytů BAL, sputum DNA CP (PCR), antigen CP (IF) (nasofaryngeální stěry) konjunktivální výtěr
Sérologická kritéria infekcí (Ch. pneumoniae) Primoinfekce: IgM za 2-3 týdny (přetrv. 2-6 měsíců) IgG za 6-8 týdnů Reinfekce: (IgM), IgG vzestup za 1-2 týdny Akutní infekce Sérokonverze druhových protilátek 4x vzestup IgG a/nebo IgM mezi akutním a rekonvalescentním sérem Chronické infekce?? polyklonální aktivace
V roce 2010 30 vyš. na DNA CP 2x pozit. M 2007 J 189 21.10. anti-chlam IgG ++ 3,34 IgA ++ 2,16 IgM +++ 3,77 anti-cp IgG 1:32 ++ IgA neg. IgM 1:20 +++ 25.10. DNA CP pozitivní (BAL) 2.11. anti-chlam IgG +++ 4,41 IgA ++ 1,83 IgM +++ 3,75 anti-cp IgG 1:32 + IgA neg. IgM 1:20 +/-
Kazuistika (M 2000) 12/08 2/09 3/09 5/09 10/09 anti-chlam IgM + 1,41/ ++ 2,34 26.11. 2009 (4.12. dtto) anti-chlam IgG +/- 1,00 IgA +++5,03 IgM +++ 4,51 anti-cp IgG neg. IgA neg. IgM 1:10 ++ 15.12. 2009 anti-chlam IgG +++ 5,39 IgA +++8,48 IgM +++ 5,42 anti-cp IgG 1:16 + IgA 1:16 ++ IgM 1:10 +++ 5.2. 2010 anti-chlam IgG + 1,41 IgA +/- 1,01 IgM ++ 3,08 anti-cp IgG 1:16 ++ IgA neg. IgM 1:10 ++ 5/10 6/10 9/10 anti-chlam IgG neg. IgA neg. IgM ++ 2,24/2,48 anti-cp IgG 1:16 + IgA neg. IgM 1:10 +
MOMP OMP2 hsp60 MIP MOMP OMP2 OMP4 OMP5 MOMP recomline Chlamydia - Interpretation Chlamydia trachomatis pneumoniae psittaci IgG 6 2 1 3 6 6/4 3 3 6/4 IgA 6 3 3 3 6 4 4 4 6 6 points if Chl. Trachomatis is negative, otherwise 4 points Interpretation positive borderline negativ Points 6 4-5 3
Immunoblot recomline Chlamydia IgG / IgA (Mikrogen)
Vyšetření protilátek pomocí WB testu recomline Chlamydia Vyšetřeno 21 sér (dlouhodobá pozitivita pouze anti-lps protilátek) - anti-ch.trachomatis IgG u 8 sér - anti-ch.pneumoniae IgG u 7 sér - anti-ch.pneumoniae IgA u 3 sér
Chlamydia pneumoniae IgG/IgA/IgM Immunoblot (GenID) 54 kd, 35 kd, 60 kd (HSP) zvýšené riziko aterosklerozy
Chlamydia trachomatis IgG/IgA Immunoblot (GenID) HSP 60 kd, 70 kd (sterility, záněty pánve) 57 kd (reaktivní artritidy)
Sérol. nálezy u kontrolní skup. pacientů (grant IGA NS 10064) Serological markers anti-cp NEG anti-cp IgG anti-cp IgA/IgM anti-chl IgA/IgM Total anti-chsp60 IgG NEG 20 (2x CT) 25 (3x CT) 10 (0x CT) 55 (5x CT) anti-chsp60 IgG +- / + 3 (1x CT) 8 (1x CT) 11 (2x CT) 22 (4x CT) anti-chsp60 IgG ++ / +++ 8 (5x CT) 2 (1x CT) 13 (9x CT) 23 (15x CT) Total 31 35 34 100
Standardizing C.pneumoniae Assays: Recommendations from the Centers for Disease Control and Prevention (USA) and the Laboratory Centre for Disease Control (Canada) (Dowell et al. 2001) Sérologie: MIF test (druhové protilátky) akutní infekce - párová séra, detekce IgG a IgM persistentní/chronická infekce IgG, IgA (vysoké hladiny) často používáno, ale není validováno! Kultivace: materiál (stěry z nasofaryngu nebo orofaryngu, sputum, BAL) spec. kontaminace dakronové tampony, transp.médium, transport do 24 hod při 4 C, buněčné kultury, podmínky zpracování, barvení monokl. protilátkami, testování na PCR: z 18 doposud publikovaných postupů pouze 4 splňují validační kriteria (extrakce, kontroly, interní kontroly)
Acute Respiratory Infection Due to C.pneumoniae: Current Status of Diagnostic Methods (Kumar et Hammerschlag, 2007) v publikovaných studiích trvá vysoká heterogenita v sérol. metodách a kritériích pro akutní nebo chronické infekce (studie obtížně srovnatelné) slabá korelace sérologie s kultivačními nálezy a PCR (zejména u dětí) není validovaný sérologický marker pro persistentní chlam.infekce (mnozí používají trvale zvýšené IgA a IgG) od roku 2001 publikováno dalších 13 PCR testů, ale doposud není dostupný komerční standardizovaný test nesrovnatelná a často si odporující data prospektivní, kontrolovaná, slepá multicentrická studie, dg v souladu s CDC doporučeními pokud nebudou k dispozici standardizované a validované dg metody, zůstane úloha CP u akutních a chronických infekcí nejasná
www.infekce.cz Doporučený postup SIL a ČLS JEP Chlamýdiové infekce diagnostika a léčba MUDr. Jan Galský, Ph.D., MBA MUDr. Jiřina Hobstová, CSc.
Děkuji za pozornost. hruba@vidia-diagnostika.cz