Rapid-VIDITEST Salmonella Card (Jednokrokový kazetový test pro detekci Salmonella spp.) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č.365, Vestec u Prahy, 252 42 Jesenice, Česká republika, tel: +420 261 090 565, fax +420 261 090 566, web: www.vidia.cz, e-mail: info@vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Salmonella Card je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci bakterií rodu Salmonella ve vzorcích stolice. ÚVOD: Klinické projevy bakteriální infekce druhem Salmonella enterica dělíme na tyfovou horečku vyvolávanou sérotypy S. enterica Typhi a Paratyphi a na řadu klinických syndromů, zahrnujících průjmová onemocnění, které vyvolávají infekce ne-tyfovými salmonelami (NTS), jichž existuje přibližně 2500 sérotypů. Tyfová horečka je výhradně lidské a člověku vysoce přizpůsobené invazivní systémové onemocnění, postihující děti a dospělé, a není spojováno s pacienty s oslabeným imunitním systémem. Naproti tomu sérotypy patřící k NTS mají široké hostitelské spektrum mezi obratlovci a výskyt infekce má často původ v nákaze skrze hospodářská zvířata, alespoň v průmyslově rozvinutých zemích, kde se obyčejně projevuje jako gastroenteritida. Těžké, invazivní onemocnění zapříčiněné infekcí NTS je často dáváno do souvislosti s oslabením imunity u HIV infikovaných. Invazivní onemocnění způsobené NTS je také běžné u dětí v Africe a vyskytuje se společně s dalšími syndromy jako je těžká anémie a podvýživa a HIV infekce. Rapid-VIDITEST Salmonella Card umožňuje rychlou detekci bakterií rodu Salmonella přímo ze vzorku stolice. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Salmonella Card je kazetový kvalitativní imunochromatografický test pro detekci bakterie Salmonella ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány protilátky proti salmonelovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl ponechán vyschnout na membráně v místě aplikace vzorku (anti-salmonella protilátka červená latexová mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně kazety. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami ve výsledkové zóně, což se projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. 1
Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) slouží jako vnitřní kontrola reagencií. OBSAH SOUPRAVY: - testovací kazety - zkumavky na vzorky obsahující odběrovou tyčinku a ředicí roztok - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte odpovídající množství vzorku stolice (1-2 g anebo ml tekutého vzorku) do čistých a suchých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce (+2 až +4 C). V případě delšího skladování by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C, avšak maximálně 1 rok. Více než 3 opakování zmrazení a rozmrazení vzorků se nedoporučují. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu a důkladně promíchejte. Zpracování vzorků stolice a) Pro každý vzorek použijte vlastní odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (cca 100mg) (2). Vraťte víčko s tyčinkou do zkumavky, zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. c) Důkladně promíchejte obsah zkumavky za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. 1. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo odstřihněte špičku víčka zkumavky (obr. 4). 2. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Salmonella Card z obalové folie a položte ji na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. 3. Do okénka označeného šipkou aplikujte z odběrové zkumavky přesně 4 kapky (100 μl) naředěného vzorku (obr. 5). Vyvarujte se aplikace pevných částic stolice. 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 3
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Vzorky se aplikují do oválného okénka označeného S (sample vzorek), výsledky se odečítají v obdélníkovém okénku vprostřed kazety označeném C (kontrolní zóna) a T (výsledková-test zóna). Zelená Červená Červená Negativní Salmonella pozitivní Neplatný Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Salmonella pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. To může znamenat infekci způsobenou bakterií Salmonella. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka, a to bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo zkáza/stárnutí reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledků: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně, tímto testem nelze množství antigenu kvantitativně stanovit a ani hodnotit vzestup nebo pokles koncentrace v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. Objevení se zelené linky v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu a potvrzuje použití dostatečného objemu a správnou techniku provedení testu. 4
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Tyfová horečka a salmonelóza jsou považovány za problémy veřejného zdraví ve vyspělých zemích, kde se incidence pohybuje kolem 200 500 případů na 100 000 obyvatel za rok. Přenáší se kontaminací vody a jídla. Zvířata a lidé jsou hlavními přenašeči a tvoří rezervoár pro bakterie. OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu kazety. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Test poskytuje pravděpodobnou diagnózu salmonelózy. Potvrzení diagnózy může provést až lékař po zvážení klinického a laboratorního nálezu. ÚČINNOST TESTU: Detekční limit: Detekční limit testu se liší dle různých sérotypů: S. enteritidis 10 4-10 7 baktérii/ml, S. typhimurium 10 4-10 7 baktérii/ml, S. typhi 10 7-10 10 baktérii/ml. Citlivost a Specifita: Byla provedená předběžná klinická studie pro Rapid-VIDITEST Salmonella Card, kde bylo otestováno 40 vzorků stolice a výsledky byly porovnány s testem Siglepath Salmonella. Z výsledků studie lze konstatovat, že Rapid-VIDITEST Salmonella Card vykazuje > 99% citlivost a > 97% specifitu. Protilátky použité k sestavení tohoto testu rozpoznávají antigenní epitopy bakterií, nacházených ve stolici pacientů, ale také antigeny připravené z bakteriálních kultur pěstovaných in vitro. Výsledky předběžné hodnotící studie je třeba brát s opatrností, dokud nebudou dostupná početnější data. Zkřížená reaktivita: Ke stanovení zkřížené reaktivity byl použit Rapid-VIDITEST Salmonella Card test. Nebyla nalezena žádná zkřížená reaktivita s běžnými střevními patogeny a dalšími organismy a látkami občasně se vyskytujícími ve stolici (H. pylori, Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes, Campylobacter jejuni). SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro diagnostiku in vitro - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy REFERENCE: 1. Gordon M. et al.: Invasive salmonellosis in Malawi. J. Infect Developing Countries, 2008, 2(6): 438-442. 2. Sanchez-Jimenez M. et. Al.: Validation of a PCR for diagnosis of typhoid fever and salmonellosis by amplification of the hil A gene in clinical simples from Colombian patients. Journal of Medical Microbiology, 2004, 53, 875-878. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 11/2010 6