Rapid-VIDITEST Rota-Adeno (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku rotavirů a adenovirů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Rota-Adeno je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci rotaviru a adenoviru ve stolici. ÚVOD: Virová gastroenteritida je infekce způsobené různými viry, které mají za následek zvracení nebo průjem. Gastroenteritidu může způsobit mnoho různých virů, včetně rotavirů, norovirů, adenovirů, sapovirů a astrovirů. Hlavními příznaky virové gastroenteritidy jsou vodnatý průjem a zvracení. Postižená osoba může mít také bolesti hlavy, horečku a křeče v břiše. Obecně platí, že se příznaky začnou objevovat 1-2 dny po infekci virem vyvolávajícím gastroenteritidu a může trvat po dobu 1 až 10 dnů v závislosti na tom, který virus je původcem nemoci. Některé výzkumy ukázaly, že doba trvání příznaků je 3-4 dny. Akutní průjem u dětí mladších dvou let věku je nejčastěji zapříčiněn rotaviry. Adenoviry a astroviry způsobují průjem většinou u malých dětí, ale k nakažení může dojít i u starších dětí a dospělých osob. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Rota-Adeno je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení Rotaviru a adenoviru ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky proti virovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s konjugátem (anti-rotavirové protilátky a/nebo anti-adenovirové protilátky), který byl imobilizovaný na membráně. Směs konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního výsledku specifické protilátky imobilizované na testovací zóně membrány vážou vzlínající částice. V testovací zóně se objeví jedna nebo dvě barevné linky. Zelená linka se objeví v kontrolní zóně a její přítomnost ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Shromážděte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml tekutého vzorku). Vzorky stolice by měly být odebrány do čistých odběrových nádob (žádné konzervační látky nebo přepravní média). Vzorky lze uchovávat v chladničce (2-8 C) po dobu 1-2 dnů před testováním. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C. Před použitím vzorky nechte vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků Pro každý vzorek použijte samostatnou odběrovou zkumavku. a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (cca 125 mg). Zašroubujte lahvičku s pufrem a vzorkem stolice. b) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku. c) V případě kapalných vzorků stolice, odsajte fekální vzorek kapátkem a přidejte 125 ul do odběrové lahvičky s pufrem. Odeberte vzorek Promíchejte vzorek s pufrem Oddělte špičku zkumavky PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 1. Těsně před použitím vyjměte kazetu Rotavirus-Adenovirus z obalové folie 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Oddělte konec špičky zkumavky. 3. Použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu pro každý vzorek a kontrolu zvlášť. Přidejte přesně 4 kapky naředěného vzorku z odběrové zkumavky do okénka pro vzorek (S- sample/vzorek). 4. Po 10 minutách odečtěte výsledek. 2
Přidejte 4 kapky směsi pufru a vzorku INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: (viz obrázek níže) Adenovirus Rotavirus Adenovirus-Rotavirus Negativní Neplatný Adenovirus pozitivní: V oblasti centrálního okénka se objeví dvě linky. ČERVENÁ linka v místě označeném T1 a ZELENÁ kontrolní linka v místě označeném C. Rotavirus pozitivní: V oblasti centrálního okénka se objeví dvě linky. ČERVENÁ linka v místě označeném T2 a ZELENÁ kontrolní linka v místě označeném C. Adenovirus-Rotavirus pozitivní: V oblasti centrálního okénka se objeví tři linky. ZELENÁ linka v místě označeném C, a dvě ČERVENÉ v místě označeném T1 at2. Negativní: Objeví se pouze ZELENÁ linka (kontrolní) v místě označeném C. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví ZELENÁ linka bez ohledu na to, zda se v zóně výsledku objeví jedna nebo obě červené linky. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku nebo nesprávné provedení testu. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud problém přetrvává, přestaňte testovací soupravu používat a kontaktujte svého distributora. POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKŮ: Intenzita červené barvy testovacích linek v místech označených T1 a T2 se liší v závislosti na koncentraci antigenu ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Rota-Adeno pouze naznačuje přítomnost rotavirové a adenovirvé infekce ve vzorku (kvalitativní detekce) a měl by být použit pouze pro detekci rotavirů a adenovirů ve vzorku stolice. Tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani zvýšení koncentrace antigenů v průběhu onemocnění. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat přípravu vzorku a test. 3
3. Některé vzorky stolice mohou snížit intenzitu kontrolní linie. 4. Pokud je výsledek testu negativní a klinické symptomy přetrvávají, doporučuje se provést jiný test za použití jiných klinických metod. Negativní výsledek nemusí kdykoli vyloučit možnost infekce rotavirem a adenovirem. 5. Tento test pouze naznačuje přítomnost rotavirové a adenovirové infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Každý rok je v USA hospitalizováno v nemocnici asi 70000 dětí nakažených rotavirovou infekcí, odhadem 160000 dětí mladších než 5 let navštíví pohotovost a 1,5 mil. dětí se objeví v ordinacích lékařů. Odhaduje se, že v USA umírá každý rok 100 dětí v důsledku komplikací způsobených rotavirovou infekcí. Rotavirus postihuje populaci ve všech socioekonomických skupinách a je stejně rozšířená ve vyspělých i rozvojových zemích, takže není pravděpodobné, že na výskyt infekce mají vliv sanitární či zásobovací postupy v daných oblastech. Rotavirové infekce se objevují v USA v podzimních měsících na jihozápadě a do jara se pak přesouvá na severovýchod, takže infekce jsou nejčastější v průběhu zimních měsíců. Nicméně, rotavirová infekce se může objevit kdykoliv během roku. Adenoviry způsobují průjem většinou u malých dětí, ale můžou postihnout i starší děti a dospělé osoby. Adenovirové infekce se vyskytují v průběhu celého roku.. ÚČINNOST TESTU: Vyhodnocení bylo provedeno porovnáním výsledků získaných pomocí Rapid-VIDITEST Rota-Adeno a jiného komerčně dostupného rotarovirového membránového testu (Ridascreen Rotavirus ELISA test, r-biopharm) a Adenovirus byl potvrzen pomocí PCR. Rapid-VIDITEST Rota-Adeno je vysoce specifický pro detekci rotaviru (98%) a pro detekci adenoviru (>99%). Byla též zjištěna vysoká citlivost, pro detekci rotaviru (> 99%) a pro detekci adenoviru (> 99%) ve srovnání s výsledky komerčního membránového testu. Použití myších monoklonálních protilátek při výrobě Rapid-VIDITEST Rota-Adeno zajišťuje vysoký stupeň specificity pro detekci těchto virů. Křížová reaktivita Bylo stanovena křížové reaktivita testu Rotavirus-Adenovirus. Křížová reaktivita nebyla zaznamenána u níže uvedených běžných gastrointestinálních patogenů, jiných organismů a látek, které se občas vyskytují ve stolici: Astrovirus Salmonella spp. Helicobacter pylori Enterovirus Clostridium difficile Staphylococcus aureus Norovirus Giardia lamblia Entamoeba hystolitica Campylobacter spp. Shigella spp Listeria monocytogenes Escherichia coli Cryptosporidium parvum 4
SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu chlazené nebo při laboratorní teplotě (2-30 C). Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Test musí zůstat v uzavřeném obalu až do použití. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby - Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do použití - Nepoužívejte test, pokud je sáček poškozen - Dodržujte zásady správné laboratorní praxe, používejte ochranný oděv, ochranné rukavice, nejezte, nepijte a nekuřte - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - Odpad likvidujte v souladu jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy - Test musí být proveden do 2 hodin od otevření sáčku REFERENCE: 1. SILVA DE OLIVEIRA, CONSUELO; LINHARES, ALEXANDRE C. et al., Rotavirus: clinical features and prevention, Jornal de Pediatria - Vol. 75, Supl.1, 1999. 2. GUILLERMO BERNAOLA, WALTER LUQUE. et al., Fisiopatología de las Infecciones por Adenovirus, Paediatrica Asociación de Médicos Residentes del Instituto de Salud del Niño Oct. 2001 - Mar. 2002 Volumen 4, Nº 2 Págs. 41-47. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2014 5