Helicobacter, Legionella, Bordetella, Haemophilus, Neisseria. V. Adámková ÚLM FNKV Praha

Transkript

1 Helicobacter, Legionella, Bordetella, Haemophilus, Neisseria V. Adámková ÚLM FNKV Praha

2 Helicobacter pylori Morfologie, kultivace, biochemie: Spirálovité, mikroaerofilní, pohyblivé G tyčinky Modifikovaná obohacená kultivační media /čokoládový agar, ThayerMartin agar/; vlhko, 37 dnů Kolonie drobné, transparentní Fermentuje aminokyseliny, neutilizuje sacharidy Kataláza, oxidáza, ureáza pozitivní

3 Helicobacter pylori Faktory patogenity: Adheziny /stěnový LPS/, bičíky Ureáza neutralizuje ŽK, stimuluje chemotaxi, produkci cytokinů HspB /heat shock protein/ zvyšuje produkci ureázy Acidinhibitory protein blokuje sekreci HCl > hypochlorhydrie Mucináza, fosfolipáza rozrušení hlenu Kataláza, superoxid dismutáza ochrana před fagocytózou

4 Helicobacter pylori Epidemiologie: Člověk reservoir Přenos fekálně orální cestou Lab. Diagnostika: Mikroskopie HE, Gram, WarthinStarry /100% senzitivita a specificita/ Kultivace Ureázový test polotuhé medium s močovinou a ph indikátorem > za 2 hod. odečet Dechový test Sérologie Ag ve stolici; Ab v séru

5 Helicobacter pylori Onemocnění: Gastritis acuta >>> Vředová choroba Gastritis chronica >prekanceróza Terapie: AMO KLA inhibitor protonové pumpy AMO MET soli vizmutu

6 C. jejuni H. pylori H. cinaedi H. fennelliae Oxidáza Kataláza Redukce nitrátů Ureáza Hydrolýza: Hippurát Indoxylacetát Růst při: 25 C 37 C 42 C Citlivost na: Nalidixová k. S R S S Cefalotin R S I S

7 Rod Legionella Morfologie: Gramnegativní, pohyblivé, aerobní, nesporulující, štíhlé tyčky, pleomorfní, často vláknité µm x 2 6 µm, někdy až 20 µm Dva a více bičíků Stěna obsahuje unikátní rozvětvené 2,3 dihydroxy mastné kyseliny, které jsou charakteristické pro tento rod Cystein dependentní Silver stain

8 Rod Legionella Kultivace: BCYE agar /buffered charcoal yeast extract/ týden; CO 2, 25 C 43 C Kolonie šedé, splývavé, ostře ohraničené Produkují hnědý pigment na půdě s tyrozinem Fluorescence v UV světle /L.erythra, L.bozemanii a L.dumoffii / Biochemie: Kataláza pozitivní, zkapalňují želatinu, nefermentují cukry Společný antigen /58 kd/ Druhová příslušnost DNA hybridizace; mikroaglutinace

9 Legionella pneumophila Patogeneze: Hemolyzin, cytotoxin, endotoxin, DNAáza a fosfatázu??? Role v patogenezi Toxiny brání??? Letálnímu účinku PMN na legionely Replikace v alveolárních makrofázích Epidemiologie: Přírodní vodní reservoiry, průmyslové vody, chladící voda klimatizačních jednotek, teplovodní rozvody Inhalační nákaza Nepřenosná z člověka na člověka

10 Legionella pneumophila Onemocnění: Pontiacká horečka /nejsou postiženy plíce/ Legionářská nemoc /plíce, ledviny, játra, CNS, GIT/ Terapie: erytromycin / rifampicin ciprofloxacin, ofloxacin Produkce βlaktamáz

11 Bordetella spp. 8 druhů (B. avium, B. hinzii, B. holmesii, B. petrii, B. trematum) 3 odpovídají za onemocnění u člověka B. pertusiss B. parapertusiss B. bronchiseptica

12 Fenotypová charakteristika bordetel B.pertussis B.parapertussis B.bronchiseptica Oxidáza Ureázová aktivita Pohyb Růst na: Krevní agar MacConkey agar /

13 Fyziologie a struktura Bordetella spp. Diferenciace na základě růstových charakteristik, biochemických vlastností a antigenní struktury Genetická analýzy téměř identické druhy, liší se pouze expresí virulentních faktorů

14 Bordetella pertussis Morfologie: Gramnegativní nepohyblivá, ovoidní, krátká tyčka (0,2 0,5 x 1 µm) Obarvení toluidinovou modří lze pozorovat bipolární metachromatická granula. Kultivace: BordetGengou agar /bramborový extrakt, glycerin, beraní krev a penicilin G 0.5 mg/l/, kolonie vyrůstají za hod; jsou drobné, průsvitné, perleťově lesklé.

15 Bordetella pertussis Fyziologie: Striktně aerobní mikrob, nefermentuje cukry, vyžaduje NAD, oxiduje aminokyseliny, hemolýzu na krevním agaru mají většinou virulentní kmeny. Roste ve čtyřech růstových fázích I IV. Fáze I má kompletní antigenní vybavení a je opouzdřená, patogenní Fáze IV je antigenně necharakteristické a nepatogenní Ve fázi II a III jsou přechodné formy. Pouzdro tvoří proteinový, druhově specifický, termolabilní K antigen; epidemiologie

16 Bordetella pertussis Epidemiologie: Reservoir člověk Lidský patogen Děti mladší 1 roku mají vyšší riziko infekce, stejně tak, jako neočkovaní jedinci Šíří se kapénkovou infekcí

17 Faktory virulence Bordetella pertussis Adheziny Filamentózní hemaglutinin Pertusový toxin Pertaktin Vazba na glykolipidyřasinkového epitelu; vazba na CR3 polymorfonukleárních leukocytů; iniciace fagocytózy 6 subjednotek S1 toxická; S2 S5 vazebné S2 podjednotka vazba na glykolipid řasinkového epitelu; S3 podjednotka vazba na gangliosid fagocytů Přilnutí k savčím buňkám Pili Přilnutí k savčím buňkám

18 Faktory virulence Bordetella pertussis Toxiny Pertusový toxin Hemolysin Dermonekrotický toxin Tracheální cytotoxin Lipopolysacharid S1 podjednotka deregulace adenylát cyklázy (AC) inaktivací regulačního proteinu G i > sekrece hlenu; inhibice fagocytózy a migrace monocytů Zvyšuje intracelulární hladinu AC; inhibice fagocytózy a migrace monocytů; inaktivován kalmodulinem Na dávce závislé kožní léze v experimentálním modelu Peptidoglykanový fragment toxický pro buňky ciliárního epitelu; uvolňuje IL1; v nízké koncentraci navozuje ciliostázu; ve vyšší koncentraci extruze řasinkového epitelu. Specifická interference s DNA syntézou >narušuje regeneraci poškozených buněk Aktivace komplementu alternativní cestou; uvolňuje cytokiny

19 Patogenita: Bordetella pertussis Obligátní parazit; nevydrží dlouho mimo organismus. Mikroorganismy adherují k povrchu epiteliálních buněk trachey a bronchů Rychle se množí; blokují funkci řasinek, do krve nepronikají Rozpadlé bakterie uvolňují toxin, který dráždí sliznice, vyvolává katarální příznaky a navozuje lymfocytózu.

20 Bordetella pertussis Lab. diagnostika: Nazofaryngeální aspirát (NA) Orofaryngeální výtěr méně vhodný; nutné syntetické výtěrové tampony ( vatový tampon obsahuje mastné kyseliny toxické pro B. pertusiss) Mikroskopie je nespecifická a neprůkazná Kultivace je specifická, ale málo citlivá (rychlá inokulace na médium u lůžka pacienta); nepřežívá v transportním médiu!! Přímá fluorescence přímá detekce v NA PCR specifické, senzitivní Detekce IgG, IgA konfirmace diagnózy (ELISA)

21 Terapie: Testování citlivosti na ATB není standardizováno Rutinní testování není nutné, MIC erytromycinu 0,008 0,5 µg/ml CAVE: byly izolovány kmeny vysoce rezistentní k erytromycinu (USA) Erytromycin Bordetella pertussis COT v případě, že nelze podat ERY ATB neovlivní klinický průběh!!! Kovalescentní fáze je dána rychlostí a stupněm regenerace řasinkového epitelu

22 Bordetella pertussis V neočkované populaci první vzorek séra odebraný příliš brzy je negativní pomalá produkce protilátek Ab nejsou detekovány během prvních dvou týdnů po objevení se prvního typického záchvatu kašle Očkovaní jedinci první vzorek séra bývá diagnostický rychlá anamnestická odpověď Interpretace výsledků závisí na úrovni proočkovanosti populace a aktivitě probíhajícího onemocnění

23 Acelulární vakcína Očkovací látky Pro děti (Dtap) 1996 Infanrix (GlaxoSmithKline), Tripedia (Sanofi Pasteur) antigeny PT, FHA Daptacel (Sanofi Pasteur) 5 komponent PT, FHA, pertactin a fimbrie typ 2 a 3 Pro adolescenty a dospělé (Tdap) 2005 Boostrix (GlaxoSmithKline) 3 antigeny (PT, FHA a pertactin) Adacel (Sanofi Pasteur) stejné jako Daptacel, ale redukováno množství PT

24 Očkovací látky Celobuněčná vakcína Od poloviny 30. let, v kombinaci jako DTP od poloviny 40. let Účinnost po 3 dávkách % Protekce 5 10 let Časté lokální nežádoucí reakce

25 Bordetella spp. B. parapertussis více rezistentní než B. pertussis COT účinnější než ERY B. bronchiseptica in vitro citlivá GEN, TOB, AMI; TIC; CTZ, CPR; TET; CMP je rezistentní k ERY

26 Rod Haemophilus Morfologie, kultivace: Drobné, nepohyblivé, nesporulující pleomorfní, fakultativně anaerobní, kapnofilní gramnegativní tyčinky Závislost na růstových faktorech X (hemin), V (NAD, NADP) Faktor V pro oxidoredukční procesy v buňce Faktor X chybí enzymy pro syntézu protoporfyrinu IX z δaminolevulové k. /průkaz porfyrinovým testem/ Fenomén satelitismu růst v okolí S.aureus Kultivační media: KA se STAU čárou, Levinthalův agar, čokoládový agar

27 Rod Haemophilus H.ducreyi * H.aphrophilus H.haemoglobinophilus H.segnis H.paraphrophilus H.paraphrohaemolyticus H.parahaemolyticus H.parainfluenzae H.haemolyticus H. influenzae Kataláza Oxidáza Hemolýza V X

28 Rod Haemophilus Onemocnění: Meningitída Epiglotitída Artritída Sinusitída Otitis media Pneumonie Konjunktivitída, Brazilská purpurová horečka Chancroid STD

29 Haemophilus influenzae Sérotypy; biotypy, bioskupiny 8 biotypů /tvorba indolu, produkce ureasy, ornithindekarboxylasy/ Faktory patogenity: pouzdro; 6 sérotypů a f; typ b /polyribosyilribitolfosfát/ endotoxin ciliostatická substance > poškození řasinkového epitelu; translokace přes epiteliální i endoteliální buňky Ig A 1 proteasa βlaktamasa

30 Haemophilus influenzae Onemocnění: Otitis media, sinusitis acuta, epiglotitis, pneumonie Bakteriémie, sepse >septická artritida, meningitis /mortalita 3 8 %, následky %/ Brazilská purpurová horečka, konjunktivitida /HAIN biosk. aegyptius/

31 Haemophilus influenzae Lab. diagnostika: Nazofaryngeální výtěr, hnis, punktát, sputum, krev, CSF /transportní půdy, pokoj. teplota (při 4 C hynou)/ Mikroskopie /CSF/ Kultivace Aglutinace /CSF, séroskupiny/

32 Haemophilus influenzae Terapie: Amoxicilin Cotrimoxazol, klaritromycin, coamoxicilin, chloramfenikol, CEF II Prevence: Očkování od 13. týdne věku, po měsíci přeočkování 2x, 4. dávka po 6 měsících od 3. dávky /hexavakcína/

33 Rod Neisseria Morfologie: Gramnegativní, aerobní, kapnofilní, nepohyblivé, nesporulující koky uspořádané ve dvojici Kultivace: Obohacená kultivační media /čokoládový agar, ThayerMartin agar/ Teplota: 30 38,5 C

34 Rod Neisseria N. gonorrhoeae, N. meningitidis N. animalis, N. animaloris, Neisseria. bacilliformis, N. canis, N. caviae, N. cinerea, N. cuniculi, N. denitrificans, N. dentiae, N. elongata subsp. elongata, N. elongata subsp. glycolitica, N. elongata subsp. nitroreducens, N. flava, N. flavescens, N. iguanae, N. lactamica, N. macacae, N. mucosa, N. ovis, N. perflava, N. polysaccharea, N. sicca, N. subflava, N. weaveri, N. zoodegmatis

35 Neisseria gonorrhoeae Obligátní patogen Gdiplokoky intracelulárně /odolnost proti rozštěpení po fagocytóze/ Fyziologie a biochemie: Citlivý na změnu teploty, vyschnutí, desinfekční prostředky Kataláza, oxidáza pozitivní Štěpí pouze glukózu

36 Neisseria gonorrhoeae 3 třídy Ag W /proteiny/; M /polysacharidy/, J Faktory patogenity: Pilin adheze k epiteliálním buňkám Porprotein intracelulární přežívání blokací fúze fagolysosomu Opa protein přichycení se eukarytických buněk Rmp protein chrání povrchové Ag před baktericidními Ab Tranferin vázající protein získávání železa Laktoferin vázající protein získávání železa Hemoglobin vázající protein získávání železa LOS endotoxin IgA 1 proteáza βlaktamáza

37 Neisseria gonorrhoeae Lab. diagnostika: Nátěr na sklíčko výtěr v transportním médiu MIKROSKOPIE /Gram, Giemsa/ Kultivace obohacené půdy, předehřáté PCR

38 Neisseria gonorrhoeae Onemocnění: Urethritis, cervicitis, salpingitis, PID, proctitis, pharyngitis, Bakteriemie Arthritis FitzHughCurtis sy perihepatitis Ophthalmia neonatorum

39 Neisseria gonorrhoeae Terapie: CEF III Chinolony Spektinomycin Pozn.: DOX sdružená chlamydiová infekce

40 Neisseria meningitidis Gdiplokoky intracelulárně Pouzdro /polysacharidové/ séroskupiny Fyziologie a biochemie: Citlivý na změnu teploty, vyschnutí, desinfekční prostředky Kataláza, oxidáza pozitivní Štěpí glukózu a maltózu 15 % populace nosičství

41 Neisseria meningitidis Faktory virulence: Pouzdro polysacharidové antigenní Pili Opa, Opc proteiny Transferin vázající protein LOS IgA 1 proteáza Superixiddismutáza, kataláza β laktamáza

42 Neisseria meningitidis Lab. diagnostika: CSF, krev Mikroskopie Kultivace Latexová aglutinace přímá detekce PCR

43 Neisseria meningitidis Onemocnění: Meningitis Sepse WaterhouseFriderichsen sy Terapie: PNC CEF III CMP heparin

44 Normáln lní flóra orofaryngeáln lní oblasti Streptococcus pyogenes 0 9% Staphylococcus aureus 35 40% Streptococcus pneumoniae 0 50% Neisseria meningitidis 0 15% Haemophilus influenzae 5 30% Moraxella catarrhalis 0 15% G bakterie, (anaerobní bakterie) 3%