Hematologické abnormality. v mikroskopu a průtokovém cytometru

Transkript

1 Hematologické abnormality v mikroskopu a průtokovém cytometru Lenka Zdražilová Dubská, Ladislava Bačíková, Kateřina Pilátová Oddělení laboratorní medicíny, Masarykův onkologický ústav, Brno

2 hematologické abnormality v mikroskopu a průtokovém cytometru Mikroskopie nátěru na sklo Morfologie (např. tvar erytrocytů, přítomnost buněčných inkluzí, struktura jádra aj.) Přítomnost parazitů, artefaktů aj. Automatický KO + diff. Subpopulace lymfocytů (T- a B-lymfocyty, NK buňky ) Flowcytometrie Imunofenotyp patologických lymfocytů Přítomnost CD34+ buněk

3 Kazuistika 1 muž 73 let 03/2017 preventivní prohlídka patologie v krevním obrazu Rodinná anamnéza: Zhoubný nádor v rodině: matka + 69letech na CLL, otec otce + 52 letech ca žaludku

4 Kazuistika 1 morfologie muž 56 let leukocyty: relativni lymfocytóza, reaktivní lymfocyty, velké granulární lymfocyty (LGL), atypické lymfocyty erytrocyty: bez abnormalit trombocyty: makrotrombocyty res.: lymfocytóza s atypickými lymfocyty

5 Kazuistika 1 - průtoková cytometrie záchyt B-lymfocytózy 56% z celkových lymfocytů, B-lymfo se vyskytují ve dvou populacích: 1/ 40% normální imunofenotyp 2/ 60% abnormální CD45low+ CD19+ CD20-/low+ sig- CD5+ CD23+ CD79b- FMC7- CD38- CD10- CD200+ odpovídající B-lymfoproliferaci ze zralých buněk bez exprese prognosticky negativního znaku CD38, mírná T-lymfopenie res.: nový záchyt indolentní B- lymfoproliferace ze zralých buněk typu B-CLL/SCL Počet lymfocytů Počet B-lymfocytů Počet klonálních B-lymfocytů 4,73 x 10(9)/L 0,56 x 4,73 = 2,65 x 10(9)/L 0,6 x 2,65 = 1,59 x 10(9)/L

6 monoclonal B lymphocytosis (MBL) (B- LUS) monoclonal B lymphocytosis (MBL) is defined as the presence of a clonal B-cell population in the peripheral blood with fewer than /L B-cells and no other signs of a lymphoproliferative disorder. Detection of a monoclonal B-cell population in the peripheral blood with light chain restriction Presence of a disease-specific immunophenotype Absolute B-cell count less than 5 x 109/L No other features of lymphoproliferative disorder (no lymph nodes, spleen and/or liver enlargement, no B-symptoms, such as fever, weight loss or nighttime sweating) No autoimmune or infectious disease CLL-like phenotype (75% of cases), in which cells are indistinguishable from that of CLL cases in that they coexpress CD5, CD19, CD23, and CD20 dim, and with surface immunoglobulin (sig) expression at low levels; atypical CLL phenotype: CD5 and CD19 coexpression, CD20 bright expression and/or CD23 negativity, light chain restriction with moderate/bright sig expression; non-cll phenotype: CD5 negativity, expression of CD20, light chain restriction with moderate/bright sig expression. In atypical forms, it is mandatory to exclude t(11;14) to rule out mantle cell lymphoma.

7 Monoklonální B-lymfocytóza MBL Prevalence roste s věkem. 3,5-6,7% (40-60), 5-9% nad 60 let, závislost na technice detekce; 30% u infikovaných HCV genetická predispozice, 2-7x vyšší prevalence Low- vs high- count MBL 0,5 x 10(9)/L klonálních B- lymfocytů Low-count MBL high-count MBL 1-2% roční riziko progrese do CLL n. SCL 1x ročně KO, LN Infekce, karcinomy

8 kazuistika 2 žena 76 let Invazivní duktální karcinom v punkční biopsii mammy, v.s. G2.; adj. cht (AC), RT, hormonoterapie, dispenzarizace na MOÚ od 03/2017 doporučeny dále cestou praktického lékaře při vyšetření krevního obrazu v MOÚ zjištěna trombocytopenie a výrazná neutropenie dle diferenciálního rozpočtu leukocytů zjištěno podezření na akutní leukémii

9 kazuistika 2 morfologie periferní krev žena 76 let leukocyty: četné blasty (36 %) v periferní krvi středně velké, s bazofilní, ojediněle granulovanou cytoplazmou, některé s vakuolami

10 Kazuistika 2 průtokový cytometr žena 76 let ve flowcytometrickém došetření zachycena populace cca 35 % abnormálních buněk s fenotypem CD45low+ z toho 1/3 (tedy 15% z celkového počtu jaderných buněk) tvoří buňky CD45low+CD34+CD33+CD19-CD3- CD4-CD8-CD14-CD56-HLADr- 2/3 buněk jsou pak imunofenotypu: CD45low+CD34-CD33-CD19-CD3-CD4- CD8-CD14-CD56-HLADr- res.: dle flowcytometrie 15 % blastů v periferní krvi odpovídajících imunofenotypem myeloblastům a 20 % nediferencovaných CD45low+ buněk nejasného imunofenotypu AML spojená s léčbou

11 WHO klasifikace

12 Kazuistika 3 muž 20 let 03/ pacient přichází do konziliární ambulance MOÚ výrazný algický syndrom při lymafadenopatii na krku periferní lymfadenopatie bez splenomegalie, testes bez patologie kompletní odběry - FW,CRP, KO+ diff, biochemie, B2M,CRP, koagulace, HBsAg, hepatitidy včetně CMV, EBV, AFP, HCG, objednáno PET/CT

13 Kazuistika 3 hematologický analyzátor muž 20 let

14 Kazuistika 3 morfologie muž 20 let leukocyty: lymfocyty s výrazně reaktivní morfologií erytrocyty: bez abnormalit trombocyty: makrotrombocyty res.: lymfocytóza s četnými atypickými lymfocyty reaktivního vzhledu

15 kazuistika 3 průtokový cytometr muž 20 let lymfocytóza s abnormálními lymfocyty zmnožení cytotoxických CD8+ T- lymfocytů s výraznější expresí aktivačního znaku HLA-DR jedná se o buňky s imunofenotypem CD3+ CD8+ HLA-DR+ CD45RO- CD27+ CCR7- CD56- CD16- imunofenotypem odpovídají aktivovaným cytotoxickým T- lymfocytům res.: expanze cytotoxických T- lymfocytů, nález je kompatibilní s virovou reaktivací/primoinfekcí například herpesviry

16 kazuistika 3 muž 20 let Heterofilní protilátky (Paul-Bunnel) IM-test pozitivní 1:160 arb.j OCH-test pozitivní 1: Cytomegalovirus (CMV) - protilátky CMV IgG negativní 0-0,9 CMV IgM negativní 0-0,9 Epstein-Baarové virus (EBV) - protilátky EBVVCA IgG pozitivní 2,20 0-0,9 EBVVCA IgM pozitivní 6,50 arb.j. 0-0,9 EBV EBNA 1 IgG negativní arb.j. 0-0,9 Memo k metodám: EBVVCA IgM:Akutní primární EBV

17

18

19