Rapid-VIDITEST FOB (Jednokrokový blisterový test pro detekci hemoglobinu ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail: objednavky@vidia.cz, Web: www.vidia.cz POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST FOB je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení lidského hemoglobinu (Hb) ve stolici k detekci gastrointestinálního krvácení. ÚVOD: Kolorektální karcinom je nejčastější příčinou onemocnění a úmrtí v hospodářsky vyspělých zemích. Screening pomocí vyšetřování okultního krvácení je založen na předpokladu, že nádory tlustého střeva krvácejí (např. časné stádium kolorektálního karcinomu nebo adenomatózní polypy střeva) a proto mohou být zachyceny testem na okultní krvácení. Jestliže dochází ke krvácení do gastrointestinálního traktu, obsahuje stolice směs neporušeného anebo téměř neporušeného hemoglobinu, neporušeného hemu a metabolitů hemu (porphyrinů) v množstvích, které závisí na místě krvácení, na velikosti krvácení a na rychlosti průchodu gastrointestinálním traktem. Imunochemické testy, které detekují neporušený anebo téměř neporušený hemoglobin, jsou specifické pro krvácení do dolních částí gastrointestinálního traktu, protože krev pocházející z nižších etáží traktu je průchodem méně degradovaná. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST FOB je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení lidského hemoglobinu ve stolici. Na testovacích zónách membrány blisteru jsou navázány myší monoklonální protilátky proti lidskému hemoglobinu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl předem vysušen v aplikačním místě membrány (anti - lidské hemoglobinové protilátky- myší monoklonální protilátka červené mikrokuličky). Směs barevného konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru přes testovací zóny kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního výsledku budou specifické protilátky imobilizované na testovací zóně membrány vázat barevné částice konjugátu. Směs se pohybuje dále směrem nahoru do kontrolní zóny, kde jsou imobilizované protilátky pro kontrolní zónu. V té by se měla vždy objevit zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku 3) vnitřní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: - testovací blistery - odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení - návod pro pacienta na odběr vzorku stolice, sáček s lištou, štítek POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice, pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při +2 až +10 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Před použitím vzorky nechte vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředícím roztokem a pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte malé množství vzorku stolice (asi 100 mg). V případě, že je vzorek tekutý, odeberte 100 l a pipetujte do odběrové zkumavky (obr. 1). 2) Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 2). Vzorek stolice Odběrová zkumavka (1) (2) Upozornění: Vzorky by neměly být odebírány u žen v období menstruace, u pacientů s krvácivými hemeroidy, u pacientů s nálezem krve v moči a u lidí s narušenou peristaltikou (namáhavé vyprazdňování). 2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací blister, vzorek stolice a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (+15 až +30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Pro provedení testu můžete zvolit postup označený A nebo B. A. Aplikace kapky vzorku z odběrové zkumavky na blister 1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. Blister ponechte na spodní části hliníkové fólie a položte jej na vodorovnou podložku. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 3). 3. Těsně před použitím vyjměte blister z obalové folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a blister. 4. Aplikujte přesně 5 kapek nebo 150 l naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec blisteru (zóna pro aplikaci vzorku sample region) (obr. 4). 5. Po 5 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem. B. Ponořením blisteru do zkumavky 1. Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 3). 3. Přeneste 5 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací blister bílým koncem do zkumavky (obr. 5). Neponořujte blister hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami (zóna pro aplikaci vzorku sample region). 4. Po 5 minutách odečtěte výsledek bez další manipulace s blisterem. Postup A Postup B Aplikujte 5 kapek Přidejte 5 kapek (3) (4) (5) 3
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku. Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci blisteru se nazývá výsledková zóna. Úsek okénka dále od bílého konce se nazývá kontrolní zóna. Kontrolní zóna Výsledková zóna Zelená Červená Červená Zóna pro nanesení vzorku FOB pozitivní FOB negativní Neplatný výsledek Negativní: Objeví se pouze ZELENÁ linka v kontrolní zóně. Okultní krvácení není prokázáno: ve vzorku není přítomnost lidského hemoglobinu. Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně se objeví červená linka ve výsledkové zóně. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví ZELENÁ linka bez ohledu na to, zda se v zóně výsledku objeví červená linka. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku, nesprávné provedení testu nebo poškození činidel. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném závisí na koncentraci lidského hemoglobinu ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství ani rychlost nárůstu hemoglobinu. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4
OMEZENÍ TESTU: 1. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření vzduchotěsného obalu blisteru. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat přípravu vzorku a test. 3. Vzorky by neměly být odebírány u žen v období menstruace, u pacientů s krvácivými hemoroidy, u pacientů s nálezem krve v moči a u lidí s narušenou peristaltikou (namáhavé vyprazdňování). 4. Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost lidského hemoglobinu ve stolici, ačkoliv test je určen pro včasnou diagnostiku kolorektálního karcinomu, může být pozitivní i v jiných případech, jako jsou krvácející hemoroidy, stavy s přítomností krve v moči nebo iritace žaludeční sliznice. Pozitivní výsledek by měl vést k dalším vyšetřením ke zjištění zdroje krvácení a příčiny výskytu krve ve stolici. 5. Negativní výsledek nevylučuje krvácení, protože polypy a kolorektální karcinom může způsobovat pouze intermitentní krvácení anebo nemusí krvácet během určitých stádií onemocnění. Krev se může vyskytovat ve stolici nerovnoměrně (může chybět právě jen v v odebraném vzorku). ÚČINNOST TESTU: Citlivost: Vzorek obsahující lidský hemoglobin v koncentraci 50 ng/ml vykazuje za použití Rapid- VIDITEST FOB pozitivní výsledek. V některých případech může být vzorek obsahující méně než 50 ng/ml také testován jako pozitivní. Detekční limit testu byl stanoven dle pokynů pro provedení tohoto testu. Hemoglobin byl různě ředěn přímo v pufru nebo byl smíchán s negativním vzorkem stolice. Citlivost detekce lidského hemoglobinu pomocí Rapid-VIDITEST FOB testu vykazovala více jak 99% shodu v porovnání s komerčním guajak testem. Citlivost detekce lidského hemoglobinu pomocí Rapid-VIDITEST FOB testu vykazovala > 99% shodu v porovnání s jinými komerčními rapid testy (ImmunTech OcculTech (YD Diagnostics) a Human Hexagon OBTI). Specificita: Rapid-VIDITEST FOB je specifický na lidský hemoglobin a nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s bovinním a prasečím hemoglobinem. Specifita detekce lidského hemoglobinu pomocí Rapid-VIDITEST FOB vykazovala > 99% shodu s komerčním guajak testem, > 99% shodu s dalšími komerčními rapid testy (ImmunTech OcculTech (YD Diagnostics) a Human Hexagon OBTI). Použití myší monoklonální protilátky v Rapid-VIDITEST FOB zaručuje vysoký stupeň specificity pro detekci lidského hemoglobinu. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. 5
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - pouze pro in vitro diagnostiku - nepoužívejte po uplynutí expirační doby - se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem - odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy REFERENCE: 1. Towler BP, Irwig L, Glasziou P, Weller D, Kewenter J: Screening for colorectal cancer using the faecal occult blood test, Hemoccult. Cochrane Database Syst Rev. 2000;(2): CD001216. 2. Ransohoff DF and Lang CA: Screening for colorectal cancer with the Fecal Occult Blood Test: a background paper. Ann Intern Med. 1997; 126: 811-822. 3. Ransohoff DF and Lang CA: Suggested technique for Faecal Occult Blood testing and interpretation in colorectal cancer screening. Ann Intern Med. 1997; 126: 808-810. 4. Chien-Hua Chiang et al.: A Comparative Study of Three Fecal Occult Blood Test in Upper Gastrointestinal Bleeding. Kaohsiung J. Med. Sci. May 2006, 22; 223-228. 5. WALKER C.W., Fecal occult blood tests reduce colorectal cancer mortality., Am Fam Physician. 2007 Jun 1; 75(11): 1652-3. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum exspirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6