CAPILLARYS Hb A1c. Ref /12

Transkript

1 CAPILLARYS Hb A1c Ref /12

2 ÚČEL POUŽITÍ CAPILLARYS Hb A1c /12 Sada CAPILLARYS Hb A1c je navržena pro separaci a kvantifikaci glykolizované frakce hemoglobinu v lidské krvi kapilární elektroforézou v zásaditém tlumivém roztoku (ph 9,4) přístrojem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. Sada CAPILLARYS Hb A1c je určena pouze k laboratornímu použití. Přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je automatický analyzátor, který provádí kompletní profil hemoglobinu pro kvantitativní analýzu frakce HbA 1c. Hemoglobiny dělené v křemenných kapilárách, jsou přímo detekovány absorbancí při 415 nm. Analýza se provádí na hemolyzátu vzorků plné krve odebraných do zkumavek s obsahem K 2 EDTA nebo K 3 EDTA jako anitkoagulantu. Kvantitativní stanovení hemoglobinu A 1c je účinným prostředkem při střednědobém sledování krevní glukózy u diabetiků. Kvantitativní měření hemoglobinu A 1c lze použít jako pomůcku při stanovení diagnózy diabetu mellitu a jako pomůcku při identifikaci pacientů, kterým vznik diabetu mellitu hrozí. Postup CAPILLARYS Hb A1c prováděný přístrojem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING byl certifikován v rámci Národního programu standardizace glykohemoglobinu (National Glycohemoglobin Standardization Program, NGSP). Pro diagnostické použití In Vitro. PRINCIP TESTU 1-28 Glykolování hemoglobinu je neenzymatická reakce mezi glukózou obsaženou v erytrocytech a koncovou N-amino skupinou hemoglobinového ß řetězce. Tato reakce probíhá během celého života červených krvinek. Rychlost vytváření glykolovaného hemoglobinu závisí na glykémii v míře v jaké koncentrace glukózy v erytrocytech nezávisí na insulinu, ale pouze na glykémii. Hromadí se červených krvinkách během 120 dní jejich života. Hladina glykolovaného hemoglobinu odpovídá "integraci" všech glykemických odchylek během předchozích týdnů. Je možné ji použít : - jako ukazatele kontroly diabetu. Tato kvantifikace umožňuje vyhodnotit střednědobou účinnost léčby, - jako pomůcku při stanovení diagnózy diabetu mellitu a jako pomůcku při identifikaci pacientů, kterým vznik diabetu mellitu hrozí. Elektroforéza je dobře zavedená technika běžně používaná v klinických laboratořích pro měření složek v krevních tekutinách, včetně glykolyzované frakce HbA 1c. Přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING byl vyvinut ke kompletní automatizaci s rychlým dělením a přijatelným rozlišením. Tuto techniku lze z mnoha hledisek zařadit mezi klasickou zónovou elektroforézu a kapalinovou chromatografii. Přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING používá princip kapilární elektroforézy ve volném roztoku. Elektricky nabité molekuly jsou děleny podle elektroforetické pohyblivosti v alkalickém tlumivém roztoku o určitém ph. Separace je rovněž závislá na ph elektrolytu a elektroosmotickém toku. Přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING má křemenné kapiláry v paralelním zapojení, což umožňuje 8 paralelních analýz pro kvantifikaci HbA 1c ve vzorku plné krve. Ředění vzorku hemolyzačním roztokem je připraveno a nastříknuto aspirací na anodovém konci kapiláry. Potom následuje vysokonapěťové dělení bílkovin a přímá detekce hemoglobinů se provádí na katodovém konci kapiláry při 415 nm, která je absorbanční vlnová délka specifická pro hemoglobiny. Kapiláry jsou před každým stanovením promývány promývacím roztokem a promytím tlumivým roztokem připraveny k další analýze. Přímá detekce slouží k přesnému kvantitativnímu určení jednotlivých frakcí hemoglobinu A 1c. Kromě toho umožňuje postup CAPILLARYS Hb A1c kvantifikaci HbA 1c a to dokonce i v přítomnosti labilního HbA 1c, karbamylovaných a acetylovaných hemoglobinů a hlavních variant hemoglobinu. Za využití zásaditého tlumivého roztoku se normální a abnormální (nebo varianty) hemoglobinu detekují v následujícím pořadí od katody k anodě : A2/C, E, S/D, F, A0, jiné Hb (včetně menšího Hb A1) a potom A 1c. REAGENTY A MATERIÁLY DODÁVANÉ V SADĚ CAPILLARYS Hb A1c VAROVANÍ : Viz bezpečnostní listy. POLOŽKY KAT. Č Tlumivý roztok (připravený k použití) 2 lahvičky, 700 ml každá Hemolyzační roztok (připraven k použití) 1 lahvička, 700 ml Promývací roztok (zásobní roztok) 1 lahvička, 75 ml Diluční segmenty 1 balení po 90 kusech Filtry 4 filtry Během přepravy může být souprava uchována bez zmražení (15 až 30 C) až po dobu 15 dní bez nepříznivého vlivu na vlastnosti. OPTIMÁLNÍ ŘÍZENÍ VYSLEDOVATELNOSTI : Všechna činidla ze stejné sady se musejí používat společně. DOSAŽENÍ OČEKÁVANÝCH VÝKONŮ : Musí se dodržovat pokyny z příbalového letáku. VAROVANÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda čistoty pro nástřik. 1. TLUMIVÝ ROZTOK Příprava Pufr je připraven k použití. Obsahuje : tlumivý roztok s ph 9,4 ± 0,5 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných. Použití Tlumivý roztok k analýze HbA 1c kapilární elektroforézou SEBIA NÁVOD - Czech

3 Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Tlumivý roztok skladujte v chladničce (2 až 8 C). Roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky tlumivého roztoku. Neskladujte dlouhodobě při pokojové teplotě nebo v blízkosti okna nebo tepelného zdroje. NEZMRAZUJTE. DŮLEŽITÉ : Při skladování při 2-8 C a před použitím je nutné nechat roztok temperovat na pokojovou teplotu. Pro plnou lahvičku to znamená dobu nejméně 3 hodiny. Pokud není tento pokyn dodržován, mohou být ovlivněny výsledky. VAROVANÍ : Nepředehřívejte tlumicí roztok v horké vodě. Po každém použití musí být tlumivý roztok nutně ihned uložen do chladničky (2 až 8 C), pak je stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky s tlumivým roztokem. Pokud se lahvička s tlumivým roztokem spotřebuje do 20 dnů, může se skladovat při pokojové teplotě. Po otevření lahvičky s roztokem a jejím vložení do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je roztok stabilní při pokojové teplotě (15 až 30 C) nejméně 20 dní (akumulovaný čas). DŮLEŽITÉ : Akumulovaný čas skladování tlumivého roztoku při pokojové teplotě nesmí překročit 20 dní. Doba 20 dní zahrnuje i dobu potřebnou pro temperování tlumivého roztoku na pokojovou teplotu. Zředěný tlumivý roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. POZNÁMKA : Během skladování může mít tlumivý roztok mírné zabarvení bez jakéhokoli negativního vlivu na jeho vlastnosti. 2. HEMOLYZAČNÍ ROZTOK Příprava Hemolyzační roztok je připraven k použití. Obsahuje : složky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných. Použití K ředění a hemolyzaci celé krve. Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Hemolyzační roztok skladujte při pokojové teplotě (15 až 30 C) nebo v chladničce (2 až 8 C). Roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky hemolyzačního roztoku. NEZMRAZUJTE. Po otevření hemolizačního roztoku a jeho vložení do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je roztok stabilní maximálně 2 měsíce (akumulovaný čas). Je-li plánované použití hemolizačního roztoku více než 2 měsíce, musí se po každém použití z přístroje vyjmout a uložit při pokojové teplotě (15 to 30 C) nebo v chladničce (mezi teplotami 2 a 8 C). V takovém případě je hemolizační roztok stabilní až do data exspirace uvedeného na jeho štítku. Hemolyzační roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se stane zakaleným v důsledku bakteriální kontaminace. POZNÁMKA : Během skladování se může barva hemolyzačního roztoku změnit na žlutou, což nemá nepříznivý vliv na jeho vlastnosti. 3. PROMÝVACÍ ROZTOK Příprava Lahvička zásobního promývacího roztoku může být zředěna až do 750 ml destilovanou nebo deionizovanou vodou. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok ph 12. Použití K promývání kapilár po elektroforetické separaci HbA 1c. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí. Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Zásobní i pracovní roztok se skladuje při pokojové teplotě nebo v chladničce v těsně uzavřených nádobách. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíce. Pracovní promývací roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace. 4. DILUČNÍ SEGMENTY Použití Segmenty k ředění na jedno použití pro přípravu biologických vzorků pro analýzu s použitím automatizovaného nástroje. Pro umístění na stojan na vzorky. Jeden segment k ředění je určený k analýze 8 vzorků (7 vzorků za přítomnosti rozpouštědla). VAROVÁNÍ : Se segmenty k ředění biologických vzorků je třeba po použití zacházet s opatrností. Jakmile je analýza dokončena, segmenty k ředění je nutné zlikvidovat spolu s biologickým odpadem a NIKDY se nesmí používat znovu. Skladování Před použitím skladujte segmenty k ředění v jejich uzavřeném obalu na čistém a suchém místě a při teplotě v rozmezí 2 a 30 C. 5. FILTRY Použití Filtry na jedno použití k filtraci tlumivého roztoku pro analýzu, hemolyzačního roztoku, pracovního promývacího roztoku a destilované nebo deionizované vody (používají se k vyplachování kapilár). DŮLEŽITÉ : Při výměně soupravy systematicky vyměňte všechny filtry. Při manipulaci a instalaci filtrů noste čisté rukavice. Našroubujte jeden filtr na konektor umístěný na konci každé zkumavky ponořené do lahviček s tlumivým roztokem, hemolyzačním roztokem promývacím roztokem nebo s deionizovanou vodou. Při vkládání filtrů do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING opláchněte konektory a zkumavky destilovanou nebo deionizovanou vodou. Uskladnění Filtry skladujte v originálních, utěsněných obalech, na suchém místě, při pokojové teplotě nebo v chladničce

4 POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ CAPILLARYS Hb A1c /12 VAROVANÍ : Viz bezpečnostní listy. 1. KALIBRAČNÍ ROZTOKY Hb A1c CAPILLARY Složení Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY (SEBIA, kat. č. 4755) jsou získány ze zásobních vzorků lidské krve. Obsahují stabilizační a konzervační látky pro udržení stability frakcí hemoglobinu. Kalibrační roztoky jsou ve stabilizované lyofilní formě. Kalibrační roztok Hb A1c CAPILLARY 1 představuje normální hladinu HbA 1c a kalibrační roztok Hb A1c CAPILLARY 2 má zvýšenou hladinu HbA 1c. Účel použití Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kalibraci a kontrole migrace lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A 1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem CAPILLARYS Hb A1c prováděného na automatickém přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy s cílem dosáhnout výsledky u krevních vzorků pacientů, které jsou srovnatelné se studií DCCT a mají návaznost na referenční systém IFCC. Doporučení pro kalibraci jsou následující : Proveďte 3 po sobě jdoucí série analýz s oběma kalibračními roztoky : - pro první použití programu analýzy "Hb A1c" přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING ; - po změně čísla šarže kalibračních roztoků. Proveďte 1 sérii analýz na obou kalibračních roztocích a potom s 1 ze 2 kontrolních roztoků před zahájením nové posloupnosti analýzy : - po změně čísla šarže tlumivého roztoku pro analýzu ; - v případě, že analýzy kontrolních roztoků poskytnou hodnoty HbA 1c mimo očekávané hodnoty (a po potvrzení této odchylky analýzou druhého dilučního segmentu s kontrolním roztokem krve) ; - po výměně kapilár (bez ohledu na počet vyměněných kapilár). POZNÁMKA : Není zapotřebí kalibrovat přístroj po změně čísla šarže hemolyzačního roztoku. Konkrétní případ : Kalibrace po výměně kapilár - Po výměně kapilár (bez ohledu na počet vyměněných kapilár) proveďte 1 sérii analýz s oběma kalibrátory a pak analyzujte oba kontrolní roztoky se stojanem na vzorky CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING č. F0. - Pro každý analyzovaný kontrolní roztok zkontrolujte, zda všechny získané hodnoty spadají do specifického rozsahu, určeného pro každou šarži kontrolních roztoků, který je přizpůsoben pro přístroj (předpokládaný rozsah určený dříve při nastavování analyzovaných šarží kontrolních roztoků). - Zkontrolujte, zda odchylka hodnoty, získaná pro každou vyměněnou kapiláru je 0,2 bodů pro úroveň kontrolního roztoku 1 a 0,3 pro úroveň kontrolního roztoku 2 v porovnání s průměrnou hodnotou posledních 3 analýz každého kontrolního roztoku na každé vyměněné kapiláře provedených individuálně. Jestliže odchylka hodnoty odpovídá očekávaným specifikacím, přístroj lze použít k analýzám. Pokud ne, proveďte 2 další kalibrace a pak znovu analyzujte oba kontrolní roztoky. - Pro každý analyzovaný kontrolní roztok zkontrolujte, zda všechny získané hodnoty spadají do specifického rozsahu, určeného pro každou šarži kontrolních roztoků, který je přizpůsoben pro přístroj (předpokládaný rozsah určený dříve při nastavování analyzovaných šarží kontrolních roztoků). - Zkontrolujte, zda odchylka hodnoty, získaná pro každou vyměněnou kapiláru je 0,2 bodů pro úroveň kontrolního roztoku 1 a 0,3 pro úroveň kontrolního roztoku 2 v porovnání s průměrnou hodnotou posledních 3 analýz každého kontrolního roztoku na každé vyměněné kapiláře provedených individuálně. Jestliže odchylka hodnoty odpovídá očekávaným specifikacím, přístroj lze použít k analýzám. Jestliže odchylka hodnoty neodpovídá očekávaným specifikacím, (tzn. > 0,2 bodů pro úroveň kontrolního roztoku 1 a > 0,3 pro úroveň kontrolního roztoku 2), určete znovu vlastní hodnoty kontrolních roztoků podle postupu uvedeného v příbalové informaci Hb A1c CAPILLARY Controls. DŮLEŽITÉ : Pro optimální použití každého kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY s přístrojem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je nezbytné použít jednu specifickou zkumavku navrženou pro krevní kontrolní roztoky a odpovídající víčko ("POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky) a označte tuto zkumavku odpovídajícím štítkem s čárovým kódem. - Nařeďte každou lahvičku s lyofilizovaným roztokem kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY Calibrator 1 a 2 přesným objemem destilované nebo deionizované vody a postupem uvedeným v příbalovém letáku kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY Calibrator. Lehce promíchejte lahvičku kalibračního roztoku, aby se rozpustila lyofilizovaná krve, přičemž by žádná kapalina neměla přijít do kontaktu s víčkem. Nechte 30 minut stát při teplotě 2-8 C a lehce zamíchejte (zamezte tvorbu pěny). POZNÁMKA : Přesnost rekonstituovaného objemu by měla být udržována v rozmezí ± 1,0 %. - Každý rozpuštěný kalibrační roztok použijte ve zkumavce určené pro kontrolní roztok krve. - Zavřete zkumavku víčkem. - Pro každý kalibrační roztok vložte klínový adaptér pro zkumavku s kontrolním roztokem do pozice č. 1 na stojanu na vzorky CAPILLARYS 2 FLEX- PIERCING číslo F0 určeného pro kontrolní vzorky krve obsahující nový zelený ředící segment. - Dejte zkumavku s kalibračním roztokem (označenou specifickým štítkem s čárovým kódem kalibrátoru) na klínový adaptér ve stojanu na vzorky číslo F0. - Zahájení analýzy : Zasuňte vzorkovací stojan číslo F0 do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING a v okně, které se zobrazí na displeji zadejte parametry analyzovaného kalibračního roztoku uvedené v příbalovém letáku kalibračních roztoků CAPILLARYS Hb A1c Calibrator : Hladina HbA 1c v mmol/mol, číslo šarže a datum exspirace. POZNÁMKA : Koncentrace HbA 1c je uvedena v jednotce IFCC (mmol/mol). VAROVANÍ : Nezadávejte hladinu HbA 1c v procentech. - Ve stejném okně vyberte "Automatic dilution" (Automatické ředění) a potvrďte. - Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat

5 DŮLEŽITÉ : Pro nejlepší použití kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci zkumavky, která obsahuje kalibrační roztok (před použitím zavřete zkumavku specifickým víčkem). Software zobrazí hodnotu HbA 1c pro oba kalibrační roztoky, které byly zadané operátorem. POZNÁMKA : Pro účinnou kalibraci musí být oba kalibrační roztoky analyzovány : pořadí analýzy obou kalibračních roztoků je indiferentní. Ihned po vysunutí a maximálně během 10 minut může být diluční segment s každým hemolyzovaným kalibračním roztokem znovu analyzován po okamžitém zasunutí odpovídajícího stojanu do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING (zkumavku označenou štítkem s čárovým kódem nechte na stojanu na vzorky). Během druhé analýzy tohoto dilučního segmentu v okně označeném "Hb A1c Calibrator" (Kalibrační roztok Hb A1c), které se objeví na obrazovce, vyberte "Manual dilution" (Ruční ředění) a potvrďte. Diluční segment s hemolyzovaným kalibračním roztokem může být opakovaně použit pouze jednou. Použití klínového adaptéru pro kónické zkumavky určené pro kontrolní roztoky : Tento klínový adaptér je určen jako podpora kónických zkumavek na kontrolní roztoky krve (nebo kalibrační) ve stojanu na vzorky F0 pro vzorky v přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. Obsahuje 2 značky, které umožňují odhadnout objem krevního kontrolního (kalibračního) roztoku dostupného k provedení analýzy : - když je zkumavka podepřena klínovým adaptérem, odpovídá horní značka na klínovém adaptéru objemu přibližně 250 µl krevního kontrolního (kalibračního) roztoku ve zkumavce. Když je objem krevního kontrolního (nebo kalibračního) roztoku na této úrovni nebo výše, je objem dostatečný k provedení úplné analýzy krve ve stojanu na vzorky číslo F0. - když je zkumavka podepřena klínovým adaptérem, odpovídá spodní značka na klínovém adaptéru objemu přibližně 100 µl krevního kontrolního (kalibračního) roztoku ve zkumavce. Když je objem krevního kontrolního (nebo kalibračního) roztoku na této úrovni nebo je mezi 2 značkami na klínovém adaptéru, je objem dostatečný k provedení jedné analýzy krve ve stojanu na vzorky číslo F0. Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Viz příbalový leták kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY. VAROVANÍ : Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. S kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY je proto nutné zacházet jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tyto šarže krví jsou negativní na základě zkoušek schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2. 2. VÍCENÁSOBNÝ SYSTÉM KONTROLNÍ ROZTOKY Hb A1c CAPILLARY (2) Složení Vícenásobný Systém Kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY (SEBIA, kat. č. 4768) jsou získány ze zásobních vzorků lidské krve. Obsahují stabilizační a konzervační látky pro udržení stability frakcí hemoglobinu. Kontrolní roztoky jsou ve stabilizované lyofilní formě. Kontrolní roztok Hb A1c CAPILLARY 1 představuje normální hladinu HbA 1c a kontrolní roztok Hb A1c CAPILLARY 2 má zvýšenou hladinu HbA 1c. Účel použití Kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kontrole migrace a kvality lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A 1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem CAPILLARYS Hb A1c prováděným na automatickém přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy. Získané hodnoty musí být v rozsahu poskytnutém pro každou šarži. DŮLEŽITÉ : Pro optimální použití každého kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY s přístrojem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je nezbytné použít jednu specifickou zkumavku navrženou pro krevní kontrolní roztoky a odpovídající víčko ("POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky) a označte tuto zkumavku odpovídajícím štítkem s čárovým kódem. Určení vlastních hodnot pro kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY : Každá laboratoř si musí stanovit hodnoty pro kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2, které jsou specifické pro automatický přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING postupem uvedeným v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY. VAROVANÍ : Vždy se musí provést určení kontrolních hodnot : - po první kalibraci přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING ; - po výměně jedné nebo více kapilár ; - po změně čísla šarže kalibračních nebo kontrolních roztoků. Viz příbalový leták kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY. Kontrola kvality : Doporučuje se provést analýzu jednoho nebo dvou kontrolních roztoků na všech 8 kapilárách následovně : - po aktivaci kapilár ; - po každé kalibraci přístroje provedené pomocí kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY ; - po sekvenci čištění kapilár roztokem CAPICLEAN. V rutině, je doporučeno : - Na začátku série : k analýze jeden ze dvou ovládacích prvků Hb A1c, druhý ovládací prvek se spustí na začátku další sérii. - V případě velkých sérií : analyzovat jeden ovládací prvek každých 20 vzorové stojany střídáním Control 1 a Control 2. - V případě zprostředkovatelských série v rozmezí 10 až 20 vzorků stojanů : analyzovat na konci řady, na druhou kontrolu. - V případě řady pod 10 vzorků regály : Ovládací prvek, který bude analyzován na začátku další sérii umožní ověření výsledků u vzorků z této série. - Nařeďte každou lahvičku s lyofilizovaným roztokem kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2 přesným objemem destilované nebo deionizované uvedeným v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY Control. Nechte 30 minut stát a lehce zamíchejte (zamezte tvorbu pěny)

6 POZNÁMKA : Přesnost rekonstituovaného objemu by měla být udržována v rozmezí ± 1,0 %. - Každý rozpuštěný kontrolní roztok použijte ve zkumavce určené pro kontrolní roztok krve. - Zavřete zkumavku víčkem. - Každou zkumavku s kontrolním roztokem (označenou specifickým štítkem s čárovým kódem) dejte na klínový adaptér pro krevní kontrolní zkumavky do pozice číslo 1 ve stojanu na vzorky CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING číslo F0 určeného pro kontrolní vzorky a obsahují nový diluční segment. POZNÁMKA : S cílem vyvarovat se omylu se doporučuje použít bílý diluční segment pro kontrolní roztok Hb A1c CAPILLARY Control 1 a šedý pro Hb A1c CAPILLARY Control 2. - Zahájení analýzy : Zasuňte stojan na vzorky do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. - Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. - Zkontrolujte hladiny koncentrací a procenta frakce HbA 1c získané z analýzy kontrolních roztoků s určenými uživatelskými hodnotami přístroje. Musí být v rozmezí stanoveném pro každou šarži. Pokud nikoli, proveďte novou kalibraci přístroje kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY Calibrator (viz odstavec "Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY Calibrator"). POZNÁMKY : - Koncentrace HbA 1c zobrazená softwarem je uvedena v mmol/mol bez jakéhokoli desetinného místa v souladu s doporučením IFCC. Desetinná místa jsou však zvažována při charakterizaci vzorku (jako normální vzorek a vzorek se zvýšenou hladinou HbA 1c ), statistiky a Levey Jenningsovy grafy. - Doporučuje se používat pravidelně softwarovou funkci "Levey Jennings chart" pro ověření, že nedošlo k posunu při analýze kontrolních roztoků. V případě posunu proveďte kalibraci přístroje podle postupu popsaného dříve. DŮLEŽITÉ : Pro nejlepší použití kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY Control je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci zkumavky, která obsahuje kontrolní roztok krve (před použitím zavřete zkumavku specifickým víčkem). Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Viz příbalový leták kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2. POZNÁMKA : Doporučuje se uložit diluční segmenty s hemolyzovanými kontrolními roztoky Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2 do boxů pro skladování kontrolních roztoků (viz "POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Boxy pro skladování kontrolních roztoků). VAROVANÍ : Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. Proto je nutné zacházet s kontrolními roztoky Hb A1c CAPILLARY Control jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tyto šarže krví jsou negativní na základě zkoušek schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2. 3. DESTILOVANÁ NEBO DEIONIZOVANÁ VODA Použití K vyplachování kapilár v automatickém přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA, pro kapilární elektroforézu. Je doporučeno používat filtrovanou, destilovanou nebo deionizovanou vodu (na filtr o porozitě 0,45 μm) a s vodivostí nižší než 3 µs/cm, což odpovídá rezistivitě vyšší než 0,33 MΩ x cm. Vodu je nutno denně měnit, aby nedošlo k mikrobiální kontaminaci. Pro optimální funkci přidejte roztok CLEAN PROTECT (SEBIA, KAT. Č. 2059, 1 lahvička o objemu 5 ml) do destilované nebo deionizované vody nebo použijte přímo roztok CAPIprotect* připravený k použití (SEBIA, KAT. Č : 2 nádoby o objemu 5 L destilované vody s CLEAN PROTECT). DŮLEŽITÉ : Vyplachovací kontejner je před naplněním nutno vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. * POZNÁMKA : Řešení CAPIprotect lze také použít k rozředění zásobního promývacího roztoku. Pak v takovém případě může zředěný promývací roztok vykazovat přechodnou, více či méně žlutou barvu bez jakýchkoliv negativních účinků na jeho výkon. 4. CAPICLEAN Složení Lahvička koncentrovaného roztoku CAPICLEAN (SEBIA, kat. č. 2058, 25 ml) obsahuje : proteolytické enzymy, povrchově aktivní láky a přídavné látky, nezbytné pro optimální provedení, v neškodných koncentracích. Použití K čištění vzorkovací sondy v automatickém přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA, pro kapilární elektroforézu během čištění CAPICLEAN. DŮLEŽITÉ : - Je-li během týdne analyzováno méně než 500 vzorků, spusťte alespoň jednou týdně sekvenci čištění CAPICLEAN. - Jestliže je během jednoho dne analyzováno méně než 500 vzorků, ale během týdne je analyzováno více než 500 vzorků, spusťte čistící sekvenci CAPICLEAN po každých 500 analýzách. - Je-li během dne analyzováno více než 500 vzorků, spusťte sekvenci čištění CAPICLEAN jednou denně. Viz návod k CAPICLEAN, SEBIA. DŮLEŽITÉ : Nepoužívejte opakovaně diluční segmenty po vyčištění vzorkovací sondy. Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Roztok CAPICLEAN skladujte v chladničce (2 až 8 C). Je stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky. NEZMRAZUJTE. V lahvičce roztoku CAPICLEAN může být vidět sraženina nebo částice spojené v suspenzi (vločky) bez nežádoucích účinků na jeho použitelnost. Nerozpouštějte tuto sraženinu ani částice. Doporučuje se shromáždit pouze supernatant. 5. ROZTOK CHLORNANU SODNÉHO (k čištění vzorkovací sondy) Příprava Připravte 9 chlorovaný roztok chlornanu sodného (2 až 3 % chlorid) naředěním 250 ml 9,6 % chlorovaného koncentrovaného roztoku v 1 litru studené destilované nebo deionizované vody

7 Použití Pro čištění vzorkovací sondy přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA, (každotýdenní údržba pro odstranění bílkovin absorbovaných na sondu). Viz návod pro CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA. Použijte stojan na vzorky, určený k čištění kapilár (č. 100). Umístěte zkumavku obsahující 2 ml zředěného chlorovaného roztoku na pozici č. 1 stojanu na vzorky. Zasuňte vzorkovací stojan číslo 100 pro údržbu do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. V okně "MAINTENANCE" (Údržba), které se objeví na obrazovce, zvolte "Launch the probe cleaning (chlorinated sodium hypochlorite solution" (Spustit čištění sondy roztokem chlornanu sodného) a potvrďte. Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Pracovní chlorovaný roztok skladujte v uzavřené nádobě při teplotě místnosti. Roztok je stabilní 3 měsíce. Roztok neskladujte na slunečním světle, blízko tepelného nebo zápalného zdroje, kyselin a amoniaku. 6. PROMÝVACÍ ROZTOK CAPILLARYS / MINICAP Příprava Každá lahvička promývacího roztoku (SEBIA, kat č. 2052, 2 lahvičky, 75 ml) může být zředěna destilovanou nebo deionizovanou vodou až na 750 ml. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok ph 12. Použití Pro promývání kapilár CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. Zapotřebí jsou i další činidla, pokud je počet testů v řadě nižší než 40. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí. Skladování, stabilita a označení znehodnocení roztoku Zásobní i pracovní roztok se skladuje při pokojové teplotě nebo v chladničce v těsně uzavřených nádobách. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíce. Pracovní promývací roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace. POZNÁMKY : Zkoušky provedené pro ověření reagentů prokázaly, že pro různé roztoky a použití přizpůsobeného vybavení pro rekonstituci objemu, nemají odchylky objemu ± 5 % z konečného objemu vliv na výsledek analýzy. Destilovaná nebo deionizovaná voda používaná k ředění roztoků musí být prostá bakteriální proliferace a plísní (použijte filtr 0,45 µm) a musí mít vodivost nižší než 3 µs/cm, což odpovídá rezistivitě vyšší než 0,33 MΩ x cm. POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ 1. Přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA, kat. č Stojan na vzorky dodávaný se systémem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. 3. Stojany pro zkumavky s délkou 11 mm přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA, PN 1360, 5 ks. 4. Souprava nádob dodávaná se systémem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING : Promytí (pro naplnění destilovanou nebo deionizovanou vodu) a nádoba na odpad. 5. Odběrné zkumavky s průměrem 13 mm s odpovídajícími víčky (maximální délka zkumavky s víčkem : 90 mm, maximální průměr víčka : 17 mm) : například zkumavky BD Vacutainer, Terumo Venosafe 5 ml, Greiner Bio-One Vacuette 1, 2, 3 nebo 4 ml nebo zkumavky Sarstedt S-Monovette 4 ml (13 x 75 mm), nebo odběrné zkumavky s průměrem 11 mm s odpovídajícími víčky (maximální délka zkumavky s víčkem : 90 mm, maximální průměr víčka : 17 mm) : například zkumavky Sarstedt S-Monovette 2,7 ml nebo zkumavky Kabe Labortechnik Primavette S 2,6 ml (11 x 66 mm), odběrové zkumavky s ekvivalentními rozměry schválené pro klinické testy. 6. Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky, SEBIA, kat. č (20 jednotek) nebo kat. č (500 jednotek) : kónické zkumavky s víčky pro analýzu kalibračních roztoků, kontrolních roztoků krve a konkrétních vzorků s objemem mezi 100 µl a 1 ml na přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. 7. Klínové adaptéry pro zkumavky kontrolních roztoků, SEBIA, kat. č. 9203, 10 jednotek (nebo dodaných s přístrojem CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING). 8. Krabice pro uskladnění kontrolních roztoků, SEBIA, kat. č : 2 boxy pro skladování dilučních segmentů obsahující kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY Control 1 a ZKUMAVKA NA ODBĚR MALÉHO OBJEMU VZORKU A1c/CE, SEBIA, kat. č. 9216, 200 zkumavek, pro analýzu vzorků o objemu do 100 µl. 10. Stojany (5) NA VZORKY CAPILLARY, SEBIA, kat. č. 1361, 5 jednotek, pro analýzu vzorků o objemu do 100 µl. 11. Žluté diluční segmenty, SEBIA, kat. č. 2079, 70 jednotek, pro analýzu vzorků o objemu do 100 µl. Umístění do stojanu NA VZORKY CAPILLARY. VZORKY PRO ANALÝZU Odběr a skladování vzorků Pro analýzu jsou doporučeny čerstvě antikoagulované vzorky plné krve odebrané do zkumavek s obsahem K 2 EDTA nebo K 3 EDTA jako antikoagulantu. Odběr krve musí být v souladu se zavedenými postupy používanými pro testování v klinických laboratořích. Vzorky lze uchovávat maximálně 7 dní při teplotách mezi 2 C a 8 C nebo maximálně 72 hodin při pokojové teplotě (mezi 15 a 30 C). Na delší skladování by měly být vzorky zmraženy na - 70 / - 80 C do 8 hodin po odběru bez jakékoli přípravy. Vzorky plné krve jsou při - 70 / - 80 C stabilní 3 měsíce. DŮLEŽITÉ : Krevní vzorky se optimálně skladují při - 70 / - 80 C. Neskladujte při - 20 C

8 Příprava vzorků Použijte přímo vzorky plné krve Zkontrolujte, že všechny zkumavky obsahují minimálně 1 ml krve a jsou dobře uzavřeny. Krevní vzorky skladované při teplotě 2-8 C jeden týden nebo při - 70 / - 80 C míchejte 5 s (na vortexu). VAROVANÍ : Zkumavky musí být uzavřeny odpovídajícími víčky určenými pro postup CAPILLARYS Hb A1c v přístroji CAPILLARYS 2 FLEX- PIERCING (viz POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ). Konkrétní případ : Analýza vzorků s objemem mezi 100 µl a 1 ml : - Míchejte krevní vzorek na vortexu po dobu 5 sekund. - Použijte alespoň 100 µl kontrolního roztoku v kónické zkumavce plné krve a zkumavku zavíčkujte. - Dejte zkumavku s klínovým adaptérem do stojanu na vzorky přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. - Zasuňte stojan na vzorky do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING na začátku série analýz. - Proveďte analýzu tohoto vzorku standardním postupem jako pro obvyklý krevní vzorek bez jakékoli prodlevy. POZNÁMKY : Doporučuje se shromáždit vzorky s objemem pod 1 ml na stejném stojanu na vzorky a analyzovat je na začátku série analýz. Dobře zamíchejte vzorek v kónické zkumavce pro analýzu před zasunutím stojanu na vzorky do automatického přístroje. Bez štítku s čárovým kódem na kónické zkumavce nemůže být vzorek identifikován. Analýza vzorků s objemem mezi 20 a 100 µl : - Míchejte vzorek plné krve k analýze na vortexu po dobu 5 sekund. - Použijte 20 µl vzorku plné krve ve "ZKUMAVCE PRO ODBĚR VZORKU S MALÝM OBJEMEM A1c/CE" a zavřete ji víčkem. - Míchejte zkumavku na vortexu po dobu 5 sekund - Označte zkumavku štítkem se specifickým čárovým kódem kontrolního roztoku. - Umístěte nový žlutý diluční segment do stojanu NA VZORKY CAPILLARY (identifikace Cxxx), přičemž středový kolík segmentu musí směřovat k operátorovi. Stojan na vzorky bude vysunut a segment chybí. - Dejte zkumavku do stojanu NA VZORKY CAPILLARYS. - Zasuňte stojan do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. - Po dokončení analýzy zlikvidujte zkumavku jako biologický odpad (ve zbývajícím vzorku nelze provést druhou analýzu). Vzorky, které není vhodné používat Vyvarujte se koagulovaným krevním vzorkům. Nepoužívejte staré, nevhodně skladované krevní vzorky ; automatická hemolýza vzorků by mohla být narušena viskózními shluky červených krvinek. Rozkladné produkty (nebo jejich zbytky) by potom mohly ovlivnit elektroforetický záznam : Při analýze takových vzorků může dodatečná frakce migrovat zvlášť k pozici Hb A2 nebo migrovat více anodicky než Hb A0 (v "jiné pozici Hb A"). V těchto 2 předchozích případech by shluky červených krvinek mohly ovlivnit odběr vzorku sondou. Neanalyzujte přímo zkumavky obsahující méně než 1 ml krevního vzorku, protože by mohla být ovlivněna analýza (viz konkrétní případ). POSTUP Systém CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je multiparametrické zařízení určené k analýze hemoglobinů v paralelních kapilárách. Zkouška hemoglobinů používá pro analýzu vzorků 8 kapiláry. Sekvence automatických kroků je následující : Načtení čárového kódu (až 8 zkumavek) se sérem a kódu stojanu na vzorky ; Míchání vzorků krve před analýzou ; Hemolýza a ředění vzorků z primárních zkumavek v dilučních segmentech ; Promytí kapilár ; Injekce hemolyzovaných vzorků ; Dělení hemoglobinu a přímá detekce rozdělených hemoglobinů v kapilárách. Manuální kroky zahrnují : Uložení zkumavek se vzorky (s víčky) do stojanů v pozicích 1 až 8 ; Umístění nových dilučních segmentů do stojanů na vzorky ; Umístění stojanů do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING ; vyjmutí stojanů se vzorky po provedení analýzy. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K PŘÍSTROJI CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. I. PŘÍPRAVA ANALÝZY CAPILLARYS 1. Zapněte přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING a počítač. 2. Nastavte program, potvrďte a přístroj se automaticky spustí. 3. Sada CAPILLARYS Hb A1c slouží k provádění analýz podle programu "Hb A1c" na přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. Pro volbu programu analýzy "Hb A1c" a umístnění lahvičky s tlumivým roztokem CAPILLARYS Hb A1c a lahviček s hemolyzačními roztoky do přístroje si přečtěte návod k obsluze přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. 4. Stojan na vzorky obsahuje 8 pozic k uložení zkumavek. Umístěte 8 zavíčkovaných zkumavek se vzorky do každého stojanu na vzorky (pozice 1 až 8); čárové kódy musí být viditelné v otvorech stojanů na vzorky. 5. Umístěte na každý stojan nový diluční segment. Stojan na vzorky se vysune, pokud segment chybí. 6. Zasuňte celý stojan na vzorky do přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING otvorem ve střední části přístroje. Postupně v jednom sledu lze umístit do přístroje až 13 stojanů se vzorky. Při analýze kontrolních krevních vzorků se doporučuje používat specifické zkumavky na kontrolní krevní roztoky s odpovídajícími víčky a klínovým adaptérem ve stojanu číslo F0 na kontrolní roztoky nebo v nějakém stojanu na vzorky. 7. Stojany s již analyzovanými vzorky vyjměte z prostoru na levé straně přístroje. 8. Pečlivě odstraňte diluční segmenty ze stojanů na vzorky a zneškodněte je. VAROVANÍ : S dilučními segmenty se musí zacházet jako s nebezpečným biologickým materiálem

9 ŘEDĚNÍ - MIGRACE - POPIS AUTOMATICKÝCH KROKŮ 1. Čárové kódy jsou načítány ze zkumavek i ze stojanů. 2. Míchání zkumavek. 3. Vzorky jsou naředěny hemolyzačním roztokem a vzorkovací sonda je po každém vzorku opláchnuta. 4. Kapiláry jsou promyty. 5. Zředěné vzorky jsou nastříknuty do kapilár. 6. Migrace probíhá za konstantního napětí po dobu asi 9 minut a teplota se ovládá Peltiérovým jevem. 7. Hemoglobiny se detekují přímo, skenováním při 415 nm a na obrazovce přístroje se objeví elektroforetický profil. POZNÁMKA : Tyto automatické kroky popisované výše platí pro první vložený stojan na vzorky. Záznamy z elektroforézy se objeví asi za 20 minut po spuštění analýzy. První tři kroky (čtení čárového kódu a míchání a ředění vzorků) jsou prováděny vždy během analýzy předchozího stojanu na vzorky. II. VÝSLEDEK ANALÝZY Ke konci analýzy je automaticky určeno relativní zastoupení frakce HbA 1c. Koncentrace HbA 1c jsou standardizované a uvedené v procentech (s jedním desetinným místem) a v mmol/mol (bez jakéhokoli desetinného místa) v souladu s doporučením IFCC (Ragnar Hanas et al, 2010). POZNÁMKA : Protože je vzorek charakterizován jako normální nebo se zvýšenou hladinou HbA 1c na základě skutečné hodnoty koncentrace HbA 1c v mmol/mol (celé číslo vypočtené pro analýzu dat přístrojem), může se objevit nesoulad pro hladiny HbA 1c blízko mezní hodnoty. Identifikace normálních krevních vzorků a vzorků krve se zvýšeným HbA 1c je prováděna automaticky a profily je možné rozpoznat v okně křivky podle záznamů modrou čarou pro normální vzorky a oranžovou barvou pro vzorky se zvýšeným HbA 1c : - Normální krevní vzorky s "normální" koncentrací HbA 1c nižší nebo rovnou 42 mmol/mol (6,0 %) jsou označeny modrou barvou. - Krevní vzorky se zvýšenou koncentrací HbA 1c vyšší než 42 mmol/mol (6,0 %) jsou označeny oranžovou barvou. Elektroforetické záznamy s abnormalitou (například další frakce nebo smazání normální frakce mezi HbA 1c, jiné frakce Hb A, Hb A0 a Hb A2) jsou označeny fialovou barvou s označením "Atypický profil" a "HbA 1c (*)". Záznam je automaticky upraven s ohledem na frakci Hb A0 pro usnadnění interpretace. Následující tabulka uvádí varovné a informační signály, které se zobrazují pro analyzovaný vzorek : Varovný signál Analyzovaný vzorek Kalibrační roztoky označené čárovým kódem! Hodnota HbA 1c mimo meze specifikací pro kalibrační roztoky! Žádná detekce frakce Hb A0 nebo HbA 1c Nedostatečná optická hustota pro frakci Hb A0 Zprávy s upozorněním : "analysis of the calibrator not in conformity" (analýza kalibračního roztoku není ve shodě) : Analyzujte kontrolní krev na stojanu F0 nebo zopakujte kalibraci [v případě neplatné kalibrace na jedné (nebo více) kapiláře, kapilára se deaktivuje, hladina HbA 1c není potom zobrazena]!! "Atypický profil" (přítomnost dalších Hodnota HbA 1c mimo meze frakcí nebo smazání očekávaných hodnot pro normální frakce) kontrolní roztoky analyzované v režimu Kontrola kvality (QC) / Kontrolní roztoky označené čárovým kódem / / Žádná hodnota HbA 1c není zobrazena / / Zprávy s upozorněním : "analysis of the control not in conformity" (analýza kontrolního roztoku není ve shodě) : 1. Opakujte analýzu stojanu na vzorky F0 pomocí stejné lahvičky nebo stejného dilučního segmentu, 2. Opakujte analýzu s novou lahvičkou, 3. Zavolejte Technické služby SEBIA, pokud je porucha potvrzena. V režimu Kontrola kvality : Označení "+" nebo "-" podle hladiny HbA 1c ve srovnání s vlastními hodnotami zadanými operátorem. V režimu kontroly kvality, pokud se zobrazí "analysis of the control not in conformity" (analýza kontrolního roztoku není ve shodě), zopakujte kalibraci. Beteg vérmintája Nezobrazila se žádná hodnota HbA 1c (na ramenu HbA 1c nebo Hb A0) Podezření na přítomnost varianty Hb nebo selhání úpravy elektroforetických záznamů, opakujte analýzu pro potvrzení. Zprávy s upozorněním : "too low OD" (< 0,10) (příliš nízké OD) pro krevní vzorek, který není abnormální, zopakujte analýzu : Pokud je výsledek potvrzen, je možné oznámit hladinu HbA 1c. "atypický profil" a "HbA 1c (*)" : podezření na přítomnost varianty Hb. / Když má vzorek více než 3,0 % Hb A2 a pík Hb F, zobrazí se u názvu frakce vykřičník ("Hb A2!"). Pak může být podezření na syndrom beta-talasemie, který by mohl ovlivňovat syntézu HbA 1c (v případě fyziopatologického rušení). Doporučuje se analyzovat vzorek postupem CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E), aby se ověřila procentuální hodnota Hb A2 a nastudovaly klinické údaje pacienta. Kvantifikace HbA 1c však představuje užitečný relativní index pro stejného pacienta. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K PŘÍSTROJI CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING

10 III. UKONČENÍ SÉRIE ANALÝZ Po ukončení každé sekvence analýzy musí operátor zahájit postup "stand by" (přepnutí do pohotovostního režimu) nebo "shut down" (vypnutí) přístroje CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, aby se kapiláry uložily v optimálních podmínkách. IV. PLNĚNÍ REAGENČNÍCH NÁDOB Přístroj CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING automaticky kontroluje přítomnost reagentů. DŮLEŽITÉ : Dodržujte pokyny pro výměnu reagenčních nádob s ohledem na barevný kód pro lahvičky a spojovací části. V případě nezbytného provedení jednoho z následujících úkonů bude zobrazena zpráva : Vložte nový zásobník s tlumivým roztokem a / nebo ; Vložte nový zásobník s hemolyzačním roztokem a / nebo ; Naplňte nádobu pracovním promývacím roztokem a / nebo ; Naplňte nádobu filtrovanou destilovanou nebo deionizovanou vodou k vyplachování kapilár a / nebo Vyprázdněte odpadní nádobu. VAROVANÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda čistoty pro nástřik. DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K PŘÍSTROJI CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING. KONTROLA KVALITY Viz "ČINIDLAPOTŘEBNÁ, NEJSOU VŠAK DODÁNA", "Hb A1c KAPILÁRNÍ KONTROLY". VAROVANÍ : Pokud kontrolní hodnoty spadají mimo rozsah vlastních hodnot, musí být vzorky analyzované na daných kapilárách od poslední validované kontroly kvality analyzovány znovu. DŮLEŽITÉ : K optimálnímu použití krevních kontrolních roztoků v přístroji CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING je nezbytné používat specifické konické zkumavky na kontrolní roztoky s odpovídajícími víčky, klínové adaptéry pro zkumavky na kontrolní roztoky (viz "POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ") a štítky s čárovým kódem určené k označení zkumavek na kontrolní roztoky obsahující krevní kontrolní vzorky k analýze (viz odstavec "Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY", kde je popsáno používání klínového adaptéru pro zkumavky na kontrolní roztoky). VÝSLEDKY Hodnoty Přímá detekce při 415 nm v kapilárách dává relativní koncentrace (procentuální hodnoty) pro jednotlivé zóny hemoglobinů a speciálně kalibrovaná koncentrace HbA 1c. Normální hodnoty hemoglobinu A 1c : 42 mmol/mol (6,0 %) (Geistanger et al, 2008). VAROVANÍ : Hodnotu HbA 1c získanou pro vzorek, představující variantu hemoglobinu, nelze srovnávat s normální hodnotou HbA 1c k určování diagnózy. Normální hodnota byla ve skutečnosti stanovena, podle doporučení IFCC a NGSP, pro jedince bez jakékoli hemoglobinopatie. Pro atypické vzorky (s variantou a) software nezobrazí normální hodnotu HbA 1c, ale kvantitativní stanovení HbA 1c představuje užitečný relativní index pro stejného pacienta. Mezní hodnota HbA 1c pro diagnózu diabetu mellitu : Informace k přerušení HbA 1c pro diagnózu diabetu mellitu najdete v příslušných pokynech. Podle ADA (American Diabetes Association) je mezní hodnota HbA 1c pro diagnózu : 6.5 %. Interpretace Viz ELEKTROFORETICKÉ TYPY. Rušení POZNÁMKA : Běžné faktory rušení postupu CAPILLARYS Hb A1c (triglyceridy, bilirubin, kyselina askorbová, močovina, revmatoidní faktor, glibenklamid, acetylované a karabamylované hemoglobiny, labilní varianty HbA 1c a Hb F) byly hodnoceny ve studiích založených na směrnici Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP7-A2 Interference Testing in Clinical Chemistry" [Rušení zkoušení v klinické chemii]. Výsledky jsou sumarizovány dále. - Nebylo zjištěno žádné rušení postupu CAPILLARYS Hb A1c v důsledku vysoké koncentrace následujících faktorů rušení zkoušených na úrovních odpovídajících koncentracím uvedeným níže :

11 Faktor rušení Triglyceridy Bilirubin Kyselina askorbová Močovina Revmatoidní faktor Glibenklamid Koncentrace 1,12 g/dl (12,8 mm) 25,6 mg/dl (438 µm) 60 mg/dl (3,41 mm) 291 mg/dl (48,5 mm) 2178 IU/mL 3 mg/dl - Nebylo zjištěno žádné rušení postupu CAPILLARYS Hb A1c v důsledku přítomnosti karbamylovaného hemoglobinu ( 8,1 %) a labilního HbA 1c ( 10,5 %). - Acetylovaný hemoglobin může migrovat do menší zóny migrace hemoglobinů, přičemž nebylo pozorováno žádné rušení kvantifikace frakce HbA 1c v důsledku přítomnosti acetylovaného hemoglobinu ( 9,0 %). - Hladiny Hb F (nebo varianty) ve vzorku krve do 23 % neruší kvantifikaci frakce HbA 1c. V případě, že je hladina Hb F (nebo varianty) vyšší než 23 %, je softwarem nahlášen výsledek s varovným signálem "Atypical profile Possible quantitative interference if Hb F or variant > 23 %"(Atypický profil Možné kvantitativní rušení, je-li hladina Hb F nebo varianty > 23 %). - Analýza variant hemoglobinu : - Nebylo pozorováno žádné rušení kvantifikace frakce HbA 1c v důsledku přítomnosti hlavních abnormálních hemoglobinů Hb S ( 40 %), Hb C ( 44 %), Hb D ( 41 %) a Hb E ( 32 %) (s výjimkou Bartova hemoglobinu). V důsledku množství variant je přesto možné pozorovat v migrační zóně HbA 1c přítomnost jiné varianty hemoglobinu. V případě větve na HbA 1c nehlásil software žádné výsledky. - Glykolyzované formy běžných variant hemoglobinu (např. Hb S, Hb C, Hb D nebo Hb E) společně migrují s frakcí Hb A0 nebo menšími frakcemi Hb A1 ("jiné frakce Hb A") bez jakékoliv modifikace výsledku HbA 1c. - Některé varianty hemoglobinu se mohou jevit jako větev frakce Hb A0, kterou software nemusí detekovat. Detekci této větve umožní jedině vizuální posouzení elektroforetického záznamu. Je nezbytné analyzovat hematologický stav a provést doplňkové studie, aby se potvrdila přítomnost varianty. - Navíc mezi variantami, které migrují blízko Hb A0 nebo se připojují k Hb A0, se mohou některé vykazovat další frakci ("X1c"), která migruje odděleně od HbA 1c. Elektroforetický záznam bude identifikován jako "Atypický profil". V tomto případě nehlaste žádný výsledek HbA 1c. - Při analyzování vzorků bez jakéhokoli Hb A (například od homozygotních pacientů nebo s heterozygotními variantami S/S nebo S/C) a v přítomnosti Hb F, může dojít ke zmatení s Hb A0 vzhledem k podobným migračním pozicím. Žádný výsledek HbA 1c nebude softwarem oznámen z důvodu absence HbA 1c v tomto typu vzorku. - Některé varianty hemoglobinu (například J Baltimore) mohou migrovat dostatečně blízko k HbA 1c frakci k narušení kvantifikace (podcenění v důsledku nedostatečného návratu k základu). Pokud je tento výsledek nahlášen, bude tento označen jako "Atypický profil" a měl by být přezkoumán operátorem. - Osoby, u kterých došlo v nedávné době k velké ztrátě krve mohou vykazovat falešně nízké hodnoty HbA 1c vzhledem k vyšší hladině nových erytrocytů. - Abnormální životnost červených krvinek, například v případě hemolytické anémie nebo polycytémie, může ovlivnit hladiny HbA 1c. Tyto hodnoty však představují užitečný relativní index pro stejného pacienta. - U pacientů s hyperleukocytózou může být rychlost migrace vzorku urychlena, což může způsobit posun profilu a vést k tomu, že nedojde k rozpoznání zón. Omezení použití Viz VZORKY PRO ANALÝZU. Analyzujte pouze vzorky krve v odběrných zkumavkách uvedených v odstavci "POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ" nebo zkumavky s ekvivalentními rozměry schválenými pro klinické analýzy. Zavolejte technický servis SEBIA, pokud potřebujete další informace o těchto zařízeních. Neanalyzujte přímo zkumavky obsahující méně než 1 ml krevního vzorku. Vyvarujte se starým, nesprávně skladovaným krevním vzorkům ; rozkladné produkty (nebo jejich zbytky) mohou ovlivnit elektroforetický záznam po 7 dnech skladování. V průběhu analýzy takových vzorků může dodatečná frakce migrovat zvlášť k pozici Hb A2 nebo migrovat více anodicky než Hb A0 (v "jiné pozici Hb A"). Po 10 dnech skladování se mohou objevit viskózní shluky červených krvinek, které je před analýzou nutné odstranit. V případě některých vzorků krve od heterozygotních pacientů A / C s Hb F může dojít k nepřesnému výpočtu frakce Hb A0. Vzhledem k omezené rozlišovací schopnosti a citlivosti zónové elektroforézy je možné, že v přítomnosti všech variant hemoglobinu nemusí být HbA 1c touto metodou kvantifikován. Sada CAPILLARYS Hb A1c by neměla být použita : - pro vyšetření "Point-of-Care" (u pacienta), - pro každodenní sledování hladiny glukózy, - jako náhrada za každodenní domácí testování hladiny glukózy v moči a krvi, - pro analýzu vzorků pacientů s onemocněním způsobujícím zkrácení doby přežití červených krvinek, jako jsou hemolytická onemocnění a významná akutní nebo chronická ztráta krve a, - pro analýzu vzorků pacientů s celkovou hladinou hemoglobinu méně než 1,4 nebo více než 31,0 g/dl a hemoglobinopatiemi které by mohli testy rušit. Varianty hemoglobinu sledované při postupech Hb A1c nebo HEMOGLOBIN(E) : V důsledku odlišného složení tlumicích roztoků Hb A1c a HEMOGLOBIN(E) se může lišit elektroforetická mobilita některých variant hemoglobinu. Odstraňování závad a řešení problémů Pokud při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku testy nevycházejí, kontaktujte technickou podporu společnosti SEBIA. Bezpečnostní datové listy soupravy činidel a informace o čištění a likvidaci odpadů, označování a bezpečnostní pravidla používaná společností SEBIA, obaly pro přepravu biologických vzorků a informace o čistění přístroje jsou k dispozici na webových stránkách SEBIA :