40 NOVINKY. Product News. Stanovení imunosupresivních lékù soupravami Elecsys. Elecsys Tacrolimus Elecsys Cyclosporine. Nový panel metod.

Transkript

1 40 NOVINKY Product News Nový panel metod Stanovení imunosupresivních lékù soupravami Elecsys Ovìøené a konzistentní výsledky pro pacienty s transplantovanými orgány K pøedcházení akutní rejekce orgánù a zajištìní dlouhodobého pøežití pacienta i transplantátu je nezbytná optimální imunosupresivní léèba, urèovaná klinicky s využitím monitorování terapeutických hladin lékù (TDM). Používání imunosupresivních lékù (ISD), které jsou charakterizovány úzkým terapeutickým oknem, vyžaduje pøi dlouhodobém sledování pøesná a konzistentní mìøení jejich koncentrace v plné krvi. Nové metody Elecsys Tacrolimus Elecsys Cyclosporine Elektrochemiluminiscenèní imunoanalýza (ECLIA) pro kvantitativní stanovení takrolimu respektive cyklosporinu v lidské plné krvi in vitro u Elecsys Tacrolimus balení 100 testù kat. è u Elecsys Tacrolimus CalSet balení 3 x 1 ml od každé hladiny 1 a 2 kat. è u Elecsys Cyclosporine balení 100 testù kat. è u Elecsys Cyclosporine CalSet balení 3 x 1 ml od každé hladiny 1 a 2 kat. è

2 Novinky - Product News è. 40 Pro kontrolu kvality u obou souprav použijte: u PreciControl ISDs 1 x 3 ml od každé hladiny PC ISD 1, 2 a 3 kat. è Pro pøípravu vzorkù u obou souprav použijte: u ISD Sample Pretreatment balení 1 x 30 ml kat. è Indikace Stanovení Elecsys Tacrolimus a Elecsys Cyclosporine se používá jako pomùcka pøi léèbì pacientù s transplantovaným srdcem, játry èi ledvinami, jimž jsou podávány imunosupresivní léky (immunosuppressant drugs, ISD). Tyto léky (napø. takrolimus nebo cyklosporin) se pacientùm s transplantovanými orgány pøedepisují, aby jejich imunitní systém novì transplantovaný orgán neodmítl. Stanovení ISD se používají ke zjiš ování koncentrace lékù v pacientovì krvi, které jsou vodítkem k urèování efektivních a dobøe snášených dávek, protože požadovaného terapeutického úèinku je dosahováno jen v úzkém terapeutickém rozsahu. Dávka léku musí být dost vysoká, aby zamezila rejekci orgánu, ale ne pøíliš vysoká, abychom se vyhnuli toxickým úèinkùm léku a oportunním infekcím. Manuální pøíprava vzorkù Imunometody Elecsys Tacrolimus a Elecsys Cyclosporine vyžadují pro analýzu vzorky plné krve. Protože jsou tyto léky velkou mìrou distribuovány v èervených krvinkách a váží se na proteiny, provádí se jednokroková manuální pøíprava vzorku pro uvolnìní analytu z proteinù (Obr. 1). Pro všechny analýzy Elecsys ISD se používá univerzální pøípravné èinidlo. Obr. 1: Pracovní postup pøípravy vzorku a použité èinidlo jsou identické pro všechny metody nového panelu Elecsys ISD. Obr. 2: Princip metody stanovení Elecsys Tacrolimus, respektive Cyclosporine (schéma metody i princip jsou identické) 2

3 è. 40 Novinky - Product News Princip testu: Kompetitivní imunoanalýza 1. inkubace (9 minut) 35 µl pøedem zpracovaného vzorku se inkubuje s biotinylovanou specifickou protilátkou proti takrolimu/cyklosporinu a derivátem téhož léku, oznaèeným rutheniovým komplexem. V závislosti na koncentraci analytu ve vzorku a na vytvoøení pøíslušného imunokomplexu dojde k obsazení vazebného místa oznaèených protilátek zèásti analytem ze vzorku a zèásti ruthenylovaným haptenem. 2. inkubace (9 minut) Po pøidání mikroèástic pokrytých streptavidinem se komplex díky interakci biotinu a streptavidinu naváže na pevnou fázi. Mìøení Reakèní smìs je nasáta do mìøicí cely, kde se mikroèástice magneticky zachytí na povrchu elektrody. Poté se odstraní nenavázané látky. Napìtí pøivedené na elektrodu pak indukuje chemiluminiscenèní emisi, která se mìøí fotonásobièem. Technologie Elecsys ECL (ElectroChemiLuminescence) je technologie Roche používaná pro imunoanalytickou detekci. Na základì této technologie ve spojení s dobøe navrženými, specifickými a citlivými imunoanalýzami zajiš- uje Elecsys spolehlivé výsledky. Vývoj imunoanalýz ECL je založen na využití rutheniového komplexu a tripropylaminu (TPA). Chemiluminiscenèní reakce pro detekci reakèního komplexu je spuštìna pøivedením napìtí do roztoku vzorku, po nìmž dojde k pøesnì øízené reakci. Technologii ECL lze využít u mnoha imunoanalytických principù, u nichž vykazuje vynikající funkèní vlastnosti. 3

4 Novinky - Product News è. 40 unkèní vlastnosti stanovení Elecsys Tacrolimus unkèní vlastnosti stanovení Elecsys Cyclosporine Proè vyšetøovat imunosupresiva metodami elektrochemiluminiscence? Pøesnost l Pokroèilý design analýzy ECL a nízká vnitøní variabilita systému (Obr. 3) l Vysoká pøesnost pøi nízkých koncentracích lékù l Vysoká pøesnost v celém rozsahu mìøení umožòuje pøesné dávkování lékù pro maximální léèebný efekt Obr. 3: Stanovení Elecsys Tacrolimus a Cyclosporine s nejlepší pøesností své tøídy. Zdroj: pøíbalové letáky, Konzistence výsledkù l Vynikající srovnatelnost a návaznost mezi šaržemi l Použití unifikovaných reagencií na všech platformách cobas l Vysoká míra srovnatelnosti se zavedenými a validovanými metodami LC-MS/MS (Obr. 4) pokaždé spolehlivé a dùvìryhodné výsledky y = 1,07 x - 0,269, r = 0,97 N = 1029 vzorkù vážená Demingova regrese Obr. 4: Elecsys Tacrolimus: vynikající korelace s dobøe hodnocenou LC-MS/MS. (Zdroj: Multicentrická hodnotící studie 2013) Konsolidace l Možnost konsolidace více než 230 parametrù na jedné platformì cobas, vèetnì parametrù, které jsou velmi dùležité pro pacienty s transplantovanými orgány (napø. infekèní nemoci, diabetes, anémie, funkce ledvin a jater). l Nejlepší ve své tøídì plnì automatické stanovení MPA již dostupné na cobas c l Probíhá vývoj stanovení Elecsys Everolimus a Sirolimus k doplnìní kompletní nabídky ISD (výhled 2014). l Variabilní velikost analytických platforem tak, že umožòuje splnìní potøeb každé jednotlivé laboratoøe. pro optimalizaci a efektivní práci - dnes i v budoucnosti Nová stanovení imunosupresivních lékù Elecsys Tacrolimus a Cyclosporine jsou dùležitým doplnìním nabídky TDM cobas, která se tak stává jednou z nejucelenìjších nabízených øad výrobkù. 4

5 è. 40 Novinky - Product News Elecsys T3 III Elecsys T4 II Vylepšení metod Elektrochemiluminiscenèní imunoanalýza (ECLIA) pro kvantitativní stanovení ft3 respektive ft4 v séru a plazmì in vitro u Elecsys T3 III balení 200 testù kat. è nahrazuje pùvodní kat. è u Elecsys T3 III CalSet 2x (2 x 1 ml) kat. è nahrazuje pùvodní kat. è u Elecsys T4 II balení 200 testù kat. è nahrazuje pùvodní kat. è u Elecsys T4 II CalSet 2x (2 x 1 ml) kat. è nahrazuje pùvodní kat. è Pro kontrolu kvality použijte: u Elecsys PreciControl Universal 2 x 3 ml od každé z hladin PCU1 a PCU2 kat. è Elektrochemiluminiscenèní imunoanalýzu (ECLIA) je možné provozovat na následujících pøístrojích: cobas e 411, Elecsys 2010, cobas e 601/ e 602, MODULAR ANALYTICS <E170>. Indikace Abnormality funkce štítné žlázy postihují velkou èást populace a podílejí se na zhruba 30 % všech endokrinních poruch. Spoleènì s klinickým posouzením jsou biochemické markery stìžejní v urèení etiologie dysfunkce štítné žlázy a rovnìž také pro sledování stavu štítné žlázy po terapii. Podobnì jako vìtšina periferních hormonù se trijódtyronin (T3) a tyroxin (T4) vážou hlavnì na transportní a zásobní proteiny. Jen velmi malý zlomek zùstává volný a aktivní. Protože jsou vazebné proteiny ovlivòovány individuálními predispozicemi a zmìnami, je celková koncentrace promìnlivá. Mnoho benigních stavù, onemocnìní a lékù mùže vést ke zvýšení nebo snížení periferní vazebné kapacity, což ve svém dùsledku ovlivòuje množství celkového tyreoidálního hormonu v obìhu. Stanovení volného tyroxinu je dùležitou souèástí rutinní klinické diagnostiky. Stanovení ft4 spoleènì s TSH se provádí pøi podezøení na dysfunkci štítné žlázy, koncentrace ft4 se rovnìž monitoruje pøi terapii tyreosupresivy. Stanovení ft4 není ovlivnìno koncentracemi vazebných proteinù, takže doplòující stanovení vazebných parametrù, jako jsou T-uptake nebo tyroxin vázající globulin (TBG), není potøebné. T3 se používá v diferenciální diagnostice eu-, hyper- a hypotyreózy. Pøevážná èást trijódtyroninu je vázána na transportní bílkoviny (TBG, albumin, prealbumin). Volný trijódtyronin (ft3) je fyziologicky aktivní formou trijódtyroninu (T3). Podobnì jako u stanovení ft4 není koncentrace ovlivnìna koncentrací vazebných proteinù. 5

6 Novinky - Product News è. 40 Princip metody: jednokroková sendvièová analýza Obr. 5: Princip metody stanovení ft3 respektive ft4 (schéma metody i princip jsou identické) 1. inkubace (9 minut) Inkubuje se 15 µl vzorku spolu s ft4 (respektive ft3) specifickými protilátkami, oznaèenými rutheniovým komplexem. 2. inkubace (9 minut) Po pøidání mikroèástic pokrytých streptavidinem a biotinylovaného T4 (respektive T3) se volná vazebná místa znaèených protilátek obsadí, vytvoøením komplexu protilátka-hapten. Celý komplex se poté díky interakci biotinu a streptavidinu naváže na pevnou fázi. Mìøení Reakèní smìs je nasáta do mìøicí cely, kde se mikroèástice magneticky zachytí na povrchu elektrody. Poté se odstraní nenavázané látky promytím. Napìtí pøivedené na elektrodu pak indukuje redoxní dìje a následnou chemiluminiscenèní emisi, která se vyhodnocuje pomocí fotonásobièe. 6

7 è. 40 Novinky - Product News V èem je nová generace metod lepší než pøedchozí? Nové metody stanovení byly vyvinuty s požadavkem øešení velice specifického a regionálního problému zákazníkù. U tìchto zákazníkù se ve zvýšené míøe vyskytovaly jinak velmi øídké interference rutheniového komplexu, tvoøící detekèní znaèku pøi elektrochemiluminiscenci (Obr. 6). Tyto interference jsou bìžnìjší v regionech, kde se ruthenium používá v procesu barvení textilií. Protože ruthenium nachází stále èastìjší uplatnìní i v jiných prùmyslových odvìtvích, dá se èekat vzrùstající èetnost tohoto problému. Roche se rozhodlo k vývoji nového konceptu s cílem vyšší kvality a spolehlivosti vydávaných výsledkù. V nové metodì je použita sulforutheniová znaèka, která stále mùže fungovat jako rutheniový komplex standardních metod Elecsys, ale není rozpoznávána interferujícími faktory, produkovanými organismem pøi environmentální zátìži (Obr. 7). Tento fakt byl potvrzen na souboru cca 50 tisíc rutinních stanovení. U všech z 10 vzorkù osob s potvrzenou interferencí byly stanoveny korektní výsledky. Èeho se nemusíte obávat? Mezi pùvodními a novými metodami je vynikající porovnatelnost. Referenèní rozmezí, která jsou v souèasnosti stanovena pùvodní soupravou, zùstávají nezmìnìna a platí i pro nové metody T3 III a T4 II. Máte pocit, že se takové interference v Èeské republice nevyskytují? Nepotøebujete takové novinky? Roche zlepšuje své produkty, i když se problém v kvalitì výsledkù mùže vyskytnout pouze u malé skupiny zákazníkù a/ nebo ve velice omezené míøe. S rozvojem využití ruthenia mùžeme èekat, že i v Èeské republice se najde èlovìk, který by mohl být nesprávnì diagnostikován. A pokud Vás ani tento argument nepøesvìdèil, pak Vás urèitì potìší, že stabilita po otevøení byla ze 3 týdnù na palubì, anebo 6 týdnù pøi kombinovaném skladování v lednici prodloužena na 4, respektive 8 týdnù. Roche soustavnì zlepšuje kvalitu svých produktù, což vede ke stále spolehlivìjším výsledkùm. Obr. 6: Interference rutheniové znaèky Obr. 7: Sulforutheniová znaèka nevytváøí vazbu s interferujícími faktory pøi zachování své funkce 7

8 Novinky - Product News è. 40 Zavedením Elecsys tyreoidálního panelu získáte: Vysokou diagnostickou hodnotu stanovení Elecsys l Pøesné referenèní rozmezí dané velkými a dobøe klinicky definovanými populaèními soubory. l Elecsys Anti-Tg a Anti-TPO: vysoká klinická specifiènost spoleènì s vysokou citlivostí umožòují dobré rozlišení mezi zdravými jedinci a pacienty. l Elecsys Anti-TSHR: vysoká korelace s klinickým obrazem, dokládá velká klinická studie: U Gravesovy choroby byla klinická senzitivita 97 % a specifiènost 99 %. napomáhá správnému a pøesnému posouzení stavu onemocnìní. Osvìdèená technologie Elecsys l Vynikající pøesnost stanovení napøíè celým mìøícím rozsahem vede ke spolehlivé a efektivní diagnostice a monitoringu léèby. l Výborná porovnatelnost šarží v rámci delších èasových úsekù umožòuje dlouhodobé sledování pacientù. pro vysokou kvalitu výsledkù - základ pøesné diagnostiky a monitoringu Úplné portfolio tyreoidálních markerù, vèetnì specialit l Plnì automatizované komplexní menu vèetnì Anti-Tg, Anti-TPO a Anti- TSHR l Všechny testy požadované v kaskádì diferenciální diagnostiky onemocnìní štítné žlázy je možno provést bez èasových prostojù a dalších operací na jedné platformì. pro zjednodušení a zefektivnìní provozu a a následné finanèní úspory 8

9 è. 40 Novinky - Product News Klinická chemie Tina-quant Lipoprotein (a) Gen. 2 Vylepšení metody In vitro test pro kvantitativní mìøení lipoproteinu (a) v lidském séru a plazmì na systémech Roche/Hitachi cobas c Pro analyzátory cobas c 311/501/502, COBAS INTEGRA: u Tina-quant Lipoprotein (a) Gen. 2 (Latex) balení 150 testù kat. è nahrazuje LPA LX kat. è Pro analyzátory cobas c 701/702: u Tina-quant Lipoprotein (a) (Latex) balení 200 testù kat. è nahrazuje LPA LX kat. è Pro analyzátory MODULAR P: u Tina-quant Lipoprotein (a) (Latex) MODULAR P small balení 100 testù kat. è nahrazuje pùvodní kat. è u Tina-quant Lipoprotein (a) (Latex) MODULAR P large balení 1440 testù kat. è nahrazuje pùvodní kat. è Pro kalibraci použijte: u Preciset Lp(a) Gen. 2 (5 x 1 ml) kat. è nahrazuje C AS LPA kat. è Pro kontrolu kvality použijte: u PreciControl Lp(a) Gen. 2 2x (2 x 1 ml) kat. è nahrazuje LPA control set kat. è Úvod Kardiovaskulární onemocnìní (CVD) pøedstavují významný zdravotní problém, který neustále narùstá. Celosvìtovì CVD zpùsobují více úmrtí než kterákoli jiná nemoc a pøedpovídá se, že obrovská zátìž, kterou klade na zdravotní systémy a spoleènost, se ještì zvìtší. K 30 % úmrtí spojených s kardiovaskulárním onemocnìním dochází u osob bez zvýšených bìžných rizikových faktorù. Proto je velkým klinickým požadavkem rozšíøení poètu dostupných diagnostických prostøedkù k vyhodnocení individuálního rizika vzniku CVD. Èetné rozsáhlé studie dokázaly, že jako vynikající a klinicky užiteèný rizikový faktor pro kardiovaskulární onemocnìní mùže sloužit koncentrace lipoproteinu (a) (Lp(a)). Pøijetí odbornou veøejností je však omezené kvùli tomu, že je složité porovnávat výsledky Lp(a) mezi rùznými klinickými studiemi. Použitá stanovení totiž vykazovala výrazné rozdíly a rùzné úrovnì standardizace. O užiteènosti stanovení Lp(a) není Standardizace v nmol/l: Nejde jen o jednotky 9

10 Novinky - Product News è. 40 Klinická chemie Obr. 8 sporu. Z analytického pohledu ale spolehlivou laboratorní diagnostiku znesnadòuje velká biologická variabilita vlastního analytu. Polymorfismus je opravdu znaèný - je známo asi variant Lp(a) a jen molekulová hmotnost molekuly se intraindividuálnì mùže lišit až 3x! Tento analytický problém v koneèném dùsledku limitoval použití Lp(a) jako cenného prognostického faktoru. Soupravy, obsahující protilátky proti variabilní èásti molekuly Lp(a) budou podhodnocovat hodnoty pacientù s apo (a) menšími než kalibrátor a nadhodnocovat koncentrace vzorkù pacientù s èásticemi vìtšími než kalibrátor. Z klinického pohledu je ale dùležitý skuteèný poèet molekul (molární koncentrace, vyjádøená v nmol/l), nikoliv jejich celková hmotnost, vyjádøená hmotnostní koncentrací. Obr. 9 Obr. 10 Standardizace v porovnání s metodou nezávislou na velikosti apo (a) Vlastnosti metody Hlavní problém hodnot Lp(a) souvisí s nepøesností metod jeho stanovení, která má pùvod v biologické variabilitì apo (a) a je dùsledkem špatné hodnotitelnosti individuálního rizika onemocnìní koronárních arterií. Lp(a) mezi jednotlivými osobami a etnickými skupinami se mohou výraznì lišit díky obrovskému polymorfismu molekuly, z pøevážné èásti díky genu pro apo (a). Evropská spoleènost pro atero- sklerózu (EAS) proto doporuèuje ke klinickému posouzení takové výsledky stanovení, které jsou nezávislé na velikosti apo (a). Preferencí molární koncentrace (nmol/l) pro vyjádøení Lp(a) pøed hmotnostní (mg/l) lze pouze èásteènì vyhovìt požadavkùm. Kromì zmìny vyjádøení výsledkù (jednotek) byla proto provedena standardizace metod vùèi standardu WHO/I CC International Reference Reagent (SRM2B). Hodnota v tomto materiálu byla pøiøazena použitím 2 rùzných stanovení ELISA, na základì monoklonálních protilátek, specifických pro 2 rùzné unikátní epitopy pøítomné v apo (a). Provedením všech uvedených opatøení dochází k významným zmìnám, které je potøeba komunikovat s ošetøujícím lékaøem. Výsledkem ale budou korektní, klinicky významné a akceptovatelné výsledky. 10

11 è. 40 Novinky - Product News Klinická chemie Význam testování Lp(a) cobas c 501: Mezilehlá preciznost Vysoké koncentrace Lp(a) v séru korelují s èasnými projevy aterosklerózy a mrtvice. Pokud koncentrace Lp(a) pøesahuje 75 nmol/l, koronární riziko se zdvojnásobuje. V kombinaci se zvýšenou koncentrací LDL-cholesterolu narùstá riziko pøibližnì 6krát. Zvýšená hladina Lp(a) je považována za velmi citlivý parametr pro vývoj onemocnìní koronárních cév, bez závislosti na ostatních plazmatických lipoproteinech. Lp(a) by mìl být mìøen spolu s celkovým cholesterolem, HDL-cholesterolem a LDL-cholesterolem, jakož i triglyceridy, aby mohlo být posouzeno celkové riziko aterosklerózy a mìlo by být podle spoleènosti European Atherosclerosis Society doporuèeno u vybraných pøípadù s vysokým rizikem a u subjektù s výskytem èasných kardiovaskulárních onemocnìní v rodinì. cobas c 501: Opakovatelnost Oèekávané hodnoty Na základì vyhodnocení údajù z raminghamské studie se hodnoty nad 75 nmol/l považují za rizikové. Hladiny Lp(a) jsou silnì ovlivnìny dìdiènými faktory a liší se mezi etnickými skupinami. Z tìchto dùvodù se doporuèuje, aby si každá laboratoø ustanovila vlastní oèekávané hodnoty pro vlastní populaci. 11

12 Novinky - Product News è. 40 Obr. 11: Výsledky porovnání Tina-quant Lipoprotein (a) Gen. 2 s referenèní metodou ELISA Porovnatelnost k referenèní metodì l Metoda Tina-quant Lipoprotein (a) Gen. 2 vykazuje vynikající porovnatelnost (Obr. 11) s referenèní metodou ELISA (Prof. Marcovina, Northwest Lipid Metabolism and Diabetes Research Laboratories, Seattle) a získala i certifikát této organizace. Pozor: Hodnoty koncentrací pacientù budou rùzné! Pøi porovnání metod Tina-quant Lp(a) Gen. 1 a Tina-quant Lp(a) Gen. 2 je patrný posun hodnot u vzorkù pacientù o cca 20 % smìrem k nižším hodnotám (pokud budeme porovnávat ve stejných jednotkách), viz Obr. 12. Dùvodem je provedená nová standardizace, která již nebude ovlivnìna velikostí apo(a). Proè je Tina-quant Lipoprotein (a) Gen. 2 lepší než jiné metody stanovení? l Standardizace vyjádøením v molární koncentraci (nmol/l) je doporuèovaná EAS a umožòuje laboratoøím mìøit správnou a porovnatelnou hodnotu. To vede k pøesnìjšímu hodnocení rizika kardiovaskulárního onemocnìní. hodnoty Lp(a) uvádìné v nmol/l nejsou ovlivòovány velikostí izoforem a poskytují tedy správnìjší hodnocení rizika kardiovaskulárního onemocnìní. l Tina-quant Lipoprotein (a) Gen. 2 je první metoda na svìtì, která pøesnì a spolehlivì stanovuje Lp(a) a to na platformì, umožòující souèasné stanovení dalších více než 150 klinickochemických parametrù. konsolidace zlepšuje efektivitu pracovištì a výraznì zkracuje dobu k vydání výsledku. l Vysoká stabilita na palubì, nízká citlivost k interferencím, nízká frekvence kalibrací umožòuje maximálnì úsporné využití reagencií. l Reagencie pøipravené k použití ekonomické a èasové úspory, na pracnost nenároèné postupy pomáhají zvýšit efektivitu provozu. Obr. 12: Porovnání Tina-quant Lp(a) Gen. 1 a Tinaquant Lp(a) Gen. 2 12