5. OBSAH SOUPRAVY, PŘÍPRAVA K POUŽITÍ A UCHOVÁVÁNÍ Souprv pro stnovení kteriálníh ntigenů Wellogen TM Bteril Antigen Kit CS ZL26/R30859602...30 testů 1. POUŽITÍ Souprv pro stnovení kteriálníh ntigenů Wellogen TM Bteril Antigen Kit oshuje několik ryhlýh ltexovýh testů určenýh pro kvlittivní stnovení ntigenu streptokoků skupiny B, Hemophilus influenze typu, Streptoous pneumonie (pneumokok), Neisseri meningitiis (meningokok) skupiny A, B, C, Y neo W135 Esherihi oli K1 přítomnýh v mozkomíšním moku (CSF) v ůsleku infeke. Souprvu lze též použít pro testování lšíh tělesnýh tekutin neo superntntů hemokultur u většiny těhto ntigenů testování kultive n plotnáh pro N. meningitiis skupiny B neo Esherihi oli K1. (Inike položené klinikými úji nleznete v tule 1). 2. SHRNUTÍ Meningiti má elou řu možnýh příčin - infekčníh, či neinfekčníh. Poku není kteriální meningiti okmžitě účinně léčen, je prvěpooné, že ue smrtelná. Včsná ientifike infekčního gens může ýt vysoe přínosná při zjištění správné přiměřené hemoterpeutiké léčy pient. Meningitiu způsouje mnoho kteriálníh ruhů. Streptokok skupiny B E. oli K1 jsou věm nejčstějšími příčinmi neontální sepse, ztímo u stršíh věkovýh skupin jsou nejčstěji izolovány H. influenze typu, S. pneumonie N. meningitiis skupiny A, B, C, Y W135. Tyto mikroorgnizmy nesou speifiké polyshriové povrhové ntigeny. Velké množství těhto ntigenů ifunuje o kultivčníh pů neo tělesnýh tekutin, jko je mozkomíšní mok neo sérum, jsou vylučovány močí. Antigeny lze etekovt itlivými imunologikými metomi, jko je protisměrná imunoelektroforéz ltexová glutine 2,5,6,10. 3. PRINCIP TESTU Činil souprvy Wellogen TM sestávjí z polystyrenovýh ltexovýh části, které jsou potženy protilátkmi proti kteriálním ntigenům. Tyto ltexové částie glutinují v přítomnosti osttečného množství homologního ntigenu. Činil pro stnovení streptokok H. influenze jsou speifiká pro streptokok skupiny B, resp. H. influenze typu. Činilo pro S. pneumonie je senziilizováno protilátkmi purifikovnými z omnivlentního sér, polyvlentní činilo pro N. meningitiis reguje s ntigeny skupiny A, C, Y W135. Deteke ntigenu meningokok skupiny B je otížnější 6, kromě toho strukturně imunologiky souvisí s ntigenem E. oli K1 7. O tyto ntigeny regují s činilem pro N. meningitiis skupiny B. 4. DEFINICE SYMBOLŮ Ktlogové číslo Dignostiký zrvotniký prostřeek in vitro Oshuje činil pro n testů Čtěte návo k použití Teplotní omezení (skloví teplot) Kó šrže (číslo šrže) Dtum ukončení použitelnosti (tum exspire) Výroe Přiejte vou Souprv pro stnovení kteriálníh ntigenů Wellogen TM Bteril Antigen Kit oshuje činil postčujíí pro proveení 30 testů. Viz též Zvláštní upozornění, část 6. Všehny součásti souprvy je nutné sklovt při teplotě 2 ž 8 C. Při oržení těhto sklovíh pomínek si uhovjí rektivitu o t ukončení použitelnosti souprvy. Pře použitím vytemperujte všehn činil n pokojovou teplotu (18 30 C) promíhejte je. Po použití vrťte nepoužitá činil o hlničky. Návo k použití Jenorázové rekční krtičky (2 lení) Jenorázové míhí tyčinky (5 svzků) Jenorázová kpátk (1 kričk) Černý gumový lonek (1) Testoví ltexová činil Streptokok B (růžový uzávěr) H. influenze (světle morý uzávěr) S. pneumonie (žlutý uzávěr) N. meningitiis ACY W135 (šeý uzávěr) N. meningitiis B/E. oli K1 (hněý uzávěr) Pět lhviček s kpátkem, jen určená pro kžou z výše uveenýh skupin, které oshují 0,5% suspenze polystyrenovýh ltexovýh části v pufru oshujíím jko konzervční činilo 0,05 % příprvku Broniox /neo 0,1 % ziu soného. Ltexové částie jsou potžené příslušnou králičí protilátkou, která je uveen n štítku, kromě činil pro N. meningitiis skupiny B/ E. oli K1, jež oshuje myší monoklonální protilátku. Kontrolní ltexová činil Pět lhviček s kpátkem (s tmvě morým uzávěrem), které oshují 0,5 % suspenze polystyrenovýh ltexovýh části v pufru oshujíím jko konzervční činilo 0,05 % příprvku Broniox /neo 0,1 % ziu soného. Ltexové částie jsou potžené příslušným králičím gloulinem v přípě ltexového činil N. meningitiis skupiny B/E. oli K1 myší monoklonální protilátkou proti Boretell ronhisepti. Ltexové suspenze se oávjí připrvené k použití je nutné je uhovávt při teplotě 2 ž 8 C ve vertikální poloze o t ukončení použitelnosti souprvy. Po elším uhovávání může ojít k gregi neo vyshnutí ltexového činil v horní části lhvičky. Poku k tomu oje, silně několik sekun ztřepejte lhvičkou s ltexovým činilem, oku se osh znovu zel nerozptýlí. NEZMRAZUJTE. Polyvlentní pozitivní kontrol Dvě lhvičky (s červeným uzávěrem) s lyofilizovnými kteriálními extrkty, které oshují ntigeny reprezenttivníh kmenů kžého kteriálního ruhu, pro nějž je ltexové činilo oáno. Oshuje 0,01% ronopolu pře rekonstituí 0,004 % po rekonstitui. Rekonstituujte pomoí 3,6 ml sterilní estilovné voy. Po přiání voy nehte lhvičku několik minut stát poté ji kroužením zmíhejte. Rekonstituovný ntigen uhovávejte při teplotě 2 ž 8 C ž po ou 6 měsíů. 1
6. ZVLÁŠTNÍ UPOZORNĚNÍ Negtivní kontrol Jen lhvičk s kpátkem (s ílým uzávěrem) oshujíí glyinem pufrovný fyziologiký roztok, ph 8,2. Jko konzervční činilo je použito 0,05 % příprvku Broniox. Činil jsou určen pouze pro ignostiké použití in vitro. Určeno pouze pro profesionální použití. Upozornění: Tento výroek oshuje suhý příroní kučuk. Informe o poteniálně neezpečnýh složkáh si prosím vyhleejte v příslušném ezpečnostním listu (MSDS) n oznčení výroku. ZDRAVOTNÍ INFORMACE A INFORMACE O BEZPEČNOSTI 6.1 Testoví kontrolní ltexová činil pro stnovení streptokoků skupiny B, H. influenze typu, S. pneumonie N. meningitiis ACY W135 oshují 0,1 % ziu soného, který je pltnými směrniemi Evropského hospoářského společenství (EHS) klsifikován jko školivý (Xn). Pro tuto souprvu pltí násleujíí věty popisujíí hrkter neezpečnosti hemikýh látek (R věty) stnrní pokyny pro ezpečné zházení s neezpečnými látkmi (S věty). Xn R22 Zrví školivý při požití. S36 Používejte vhoný ohrnný oěv. Aziy mohou regovt s měí olovem v některýh potruíh vytvářet výušné sole. Množství použitá v této souprvě jsou mlá, přesto při likvii mteriálů oshujííh ziy spláhněte tyto mteriály reltivně velkým množstvím voy. 6.2 V soulu s prinipy správné lortorní prxe se ůrzně oporučuje povžovt tělesné tekutiny z poteniálně infekční při mnipuli s nimi oržovt všehn nezytná ezpečnostní optření. 6.3 Při mnipuli s riometrikými hemokultivčními méii oržujte záklní prvil riční ezpečnosti. Jená se mimo jiné o tto prvil: ) Rioktivní mteriál uhovávejte n vyhrzeném místě v testovné náoě. ) S rioktivním mteriálem je nutné mnipulovt n vyhrzeném místě. ) Rioktivní mteriál niky nepipetujte ústy. ) V místě vyhrzeném pro mnipuli/uhovávání rioktivního mteriálu nejezte, nepijte ni nekuřte. e) Po použití rioktivního mteriálu si ůklně umyjte rue. f) Orťte se n místního provník riční ezpečnosti, který vám sělí požvky n likvii rioktivního mteriálu. 6.4 Přístroj určený pro opkovné použití je nutné po použití sterilizovt vhoným postupem. Nejvhonější metoou je sterilize v utoklávu po ou 15 minut při 121 C. Jenorázové prostřeky je nutné sterilizovt v utoklávu neo spálit. Rozlitý poteniálně infekční mteriál je nutné okmžitě ostrnit svými ppírovými urousky kontminovná míst omýt stnrním ntikteriálním ezinfekčním činilem neo 70% lkoholem. NEPOUŽÍVEJTE hlornn soný. Potřey použité pro čištění rozlitého mteriálu, včetně rukvi, je nutné likviovt jko iologiky neezpečný op. 6.5 Nepipetujte ústy. Při mnipuli se vzorky prováění stnovení používejte jenorázové rukvie prostřeky n ohrnu zrku. Po skončení práe si ůklně umyjte rue. 6.6 Jsou-li oná činil použit v soulu s prinipy správné lortorní prxe, správnými stnry hygieny práe pokyny uveenými v tomto návou k použití, nejsou neezpečná pro zrví. ANALYTICKÉ POKYNY 6.7 Nepoužívejte činil po uplynutí oy ukončení použitelnosti. 6.8 Pře použitím nehte ltexová činil vytemperovt n pokojovou teplotu (18 ž 30 C). Ltexová činil, která pře použitím vykzují známky grege neo jsou v nih hruky, mohl ýt zmrzen nesmí ýt použit. 2 6.9 Lhvičky s kpátkem je ůležité při použití ržet svisle, y se kpk vytvořil n špiče ústí kpátk. Poku se ústí kpátk nmočí, vytvoří se kpk nesprávné velikosti okolo jeho kone nikoli n jeho špiče; poku k tomu oje, nejříve ústí kpátk otřete teprve poté pokrčujte ále. 6.10 Činil oná s kžou souprvou mjí slěné funkční hrkteristiky nesmí ýt použit s činily ze souprvy s jiným číslem šrže. 6.11 Neotýkejte se rekčníh ploh n krtičkáh. 6.12 Při tomto stnovení lze použít mehnikou rotční třepčku. Bylo zjištěno, že jsou postčujíí násleujíí provní hrkteristiky: i) Stolní třepčky při 100 ž 150 otáčkáh z minutu s průměrem kruhového pohyu 3,0 ž 3,4 m. Pře oečtením výsleku je nutné krtičku vyjmout z rotční třepčky kráte s ní ztřept. ii) Oritální rotční třepčky (též známé jko imenzionální třepčky) při 25 otáčkáh z minutu s přiližným úhlem rote 9 ž 10,5 stupňů neo při 18 otáčkáh z minutu s úhlem rote 16 ž 17,5 stupňů. 6.13 Zrňte mikroiální kontmini činiel, neoť y mohl způsoit hyné výsleky. 7. ODBĚR A UCHOVÁVÁNÍ VZORKŮ 7.1 Vzorky tělesnýh tekutin (npř. mozkomíšní mok, sérum, moč) je nutné poroit stnovení o nejříve po oěru. Poku u tělesné tekutiny nelze provést stnovení okmžitě, lze ji sklovt přes no při teplotě 2 ž 8 C neo éle zmrzenou při teplotě 15 ž 25 C. Poku je nutné u vzorků provést kteriologiký rozor, je nutné tk učinit pře proveením ltexového testu, y neošlo ke kontmini vzorku. 7.2 Vzorky pro hemokultury lze oert testovt po 18 ž 24hoinové inkui při 37 C neo jkmile je zjištěn kteriální růst. 7.3 Kultive n plotnáh (pouze N. meningitiis B/E. oli K1). Izolovné kolonie rostouí n ooheném grovém méiu (npř. krevní, čokoláový gr) lze testovt po inkui přes no při teplotě 37 C. Proveďte Grmovo rvení, které npomůže při interpreti výsleků ltexového testu. 8 POSTUP TESTU POTŘEBNÉ DODANÉ MATERIÁLY Viz Osh souprvy, část 5. POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY Vrouí voní lázeň Lortorní entrifug neo memránové filtry (0,45 µm) Rotční třepčk (volitelné viz Zvláštní upozornění, část 6) PŘÍPRAVA KLINICKÝCH VZORKŮ 8.1 Vzorky tělesnýh tekutin je nutné pře proveením stnovení postupem Wellogen TM zhřát, y se n minimum omezily nespeifiké reke 4,6. Doporučují se ále uveené postupy: ) U stnovení z mozkomíšního moku moči zhřívejte vzorek 5 minut ve vrouí voní lázni. Ohlďte vzorek n pokojovou teplotu (18 ž 30 C) pře proveením stnovení jej purifikujte ostřeěním neo memránovou filtrí (0,45 µm). Pro zjištění mximální itlivosti je možné vzorky moči ž 25krát konentrovt v konentrátoru Minion B-15. Pře proveením stnovení vzorek purifikujte postupem uveeným výše. ) Při stnovení ze sér přiejte 3 íly 0,1molárního ethylenimintetretátu isoného (EDTA), ph 7,4 n 1 íl sér. Vzorek zhřívejte 5 minut ve vrouí voní lázni, ohlďte n pokojovou teplotu (18 ž 30 C) purifikujte postupem uveeným výše. Vhoný roztok EDTA (10 ml) je k ispozii (kó č. ZL29/ R30164501). 8.2 Hemokultury. Centrifugujte vzorek o ojemu 1 ž 2 ml, y se ostřeil pelet erytroytů, npříkl při 1000 g po ou 5 ž 10 minut. Proveďte ltexový test superntntu. Poku u superntntu hemokultury nstne nespeifiká reke (viz Interprete výsleků, část 10), zhřívejte vzorek ve vrouí voní lázni po ou 5 minut, ohlďte jej n pokojovou teplotu (18 ž 30 C), purifikujte jej entrifugí test zopkujte. 8.3 Kultive n plotnáh (pouze N. meningitiis B/E. oli K1). Prováějte stnovení přímo n kultivční plotně.
POSTUP Doporučujeme vám, yste si pře proveením testu ůklně přečetli Zvláštní upozornění, část 6. Vzorky tělesnýh tekutin superntnty hemokultur: POZNÁMKA: Máte-li k ispozii pouze omezené množství vzorku pro proveení stnovení, nejříve jej použijte s testovími ltexovými činily poku získáte pozitivní výsleek, proveďte test s příslušným kontrolním ltexovým činilem. Poku máte k ispozii osttečné množství vzorku, proveďte test s testovími i kontrolními ltexovými činily součsně. Krok 1 Zprujte vzorek způsoem popsným v části Příprv klinikýh vzorků. Krok 2 Protřepejte ltexová činil. Krok 3 Návkujte 1 kpku kžého ltexového 1 kpk testovího činil neo kontrolního ltexového činil o smosttného kroužku n rekční krtiče. Ujistěte se, že ržíte lhvičku s kpátkem ve svislé poloze, yste návkovli přesnou kpku. (Viz Zvláštní upozornění, část 6.) Krok 4 Jenorázovým kpátkem návkujte 1 kpku 1 kpk ( 40 µl) testovného vzorku vele kžé kpky ltexového činil. Krok 5 Promíhejte osh kžého kroužku míhí tyčinkou rozetřete jej tk, y pokrývl elou plohu kroužku. Pro kžý kroužek použijte smosttnou tyčinku po použití ji ezpečně zlikviujte. Krok 6 Kývejte pomlu krtičkou 3 minuty pozorujte, 3 minuty z oje k glutini. Držte při tom krtičku v normální čteí vzálenosti (25 ž 35 m) o očí. Nepoužívejte lupu. Lze použít mehniké otáčení (3 minuty) (Viz Zvláštní upozornění, část 6.) Získné orze jsou zřetelné lze je rozpoznt z všeh normálníh světelnýh pomínek. Krok 7 Bezpečně zlikviujte rekční krtičku. Kultive n plotnáh: (Pouze N. meningitiis B/E. oli K1 Wellogen TM ): Krok 1 Protřepejte ltexová činil. Krok 2 U kžé kultury, jejíž stnovení má ýt 1 kpk proveeno, kápněte 1 kpku testovího ltexového činil o jenoho kroužku n rekční krtiče 1 kpku kontrolního ltexového činil o smosttného kroužku. POZNÁMKA: Pro suspektní kultury E. oli je nutné použít kontrolní ltexové činilo. Krok 3 Uhopte míhí tyčinku nerte trohu Vzorek kultury tím, že se jí otknete plohým konem tyčinky. Nerte množství opovíjíí zhru 1 velké kolonii. Krok 4 Vytvořte ze vzorku kultury emulzi v kpe testovího ltexového činil tím, že ji rozetřete plohým konem tyčinky. Rozetřete vzorek ůklně, le ne tk silně, yste poškoili povrh krtičky. Rozetřete ltex tk, y pokrývl o největší část kruhu. Bezpečně míhí tyčinku zlikviujte. Krok 5 Dlší tyčinkou vytvořte emulzi z ooného vzorku kultury v kontrolním ltexovém činile. Krok 6 Kývejte pomlu krtičkou 20 sekun 20 sekun pozorujte, z oje k glutini. Držte při tom krtičku v normální čteí vzálenosti (25 ž 35 m) o očí. Nepoužívejte lupu. Získné orze jsou jsně zřetelné lze je rozpoznt z všeh normálníh světelnýh pomínek. Krok 7 Bezpečně zlikviujte rekční krtičku. 9. KONTROLA KVALITY Násleujíí postup je nutné provést zpočátku u kžé zásilky souprv testů u kžé série stnovení testovnýh vzorků. V prxi lze sérii efinovt jko ou proveení testu v éle ž 24 hoin. Kžé ohýlení o přepoklánýh výsleků nznčuje, že mohl nstt prolém s činily, jenž je nutné vyřešit pře lším použitím klinikýh vzorků. VIZUÁLNÍ KONTROLA Ltexové suspenze je vžy nutné kontrolovt, z při jejih kápnutí n testoví krtičku neohází k gregi, poku je pře přiáním testovného vzorku ptrné shlukování, nesmí ýt suspenze použit. Po elším uhovávání může ojít k gregi neo vysyhání v horní 3 části lhvičky. Poku tomu tk je, s lhvičkou několik sekun silně ztřepejte, oku se osh znovu zel nerozptýlí. POSTUP POZITIVNÍ KONTROLY Rektivitu testu lze potvrit přiáním polyvlentní pozitivní kontroly o rekčního kroužku, v němž po 3minutovém otáčení neošlo k glutini testovího ltexového činil testovným vzorkem. Krok 1 Jenorázovým kpátkem přiejte 1 kpku 1 kpk pozitivní kontroly o kroužku oshujíí testoví ltexové činilo vzorek. Krok 2 Promíhejte pomoí míhí tyčinky ezpečně zlikviujte. Krok 3 Protřepejte krtičku ručně neo ve třepče 3 minuty lší 3 minuty. Po uplynutí této oy y měl ýt n testovím ltexovém činile viitelná jsná glutine. Krok 4 Bezpečně zlikviujte rekční krtičku. POSTUP NEGATIVNÍ KONTROLY Poku lespoň jeen testovný vzorek v rámi série poskytne negtivní výsleek s testovími kontrolními ltexovými činily (neo pouze s testovím ltexovým činilem v přípeh, ky neylo použito kontrolní ltexové činilo), jená se o pltnou negtivní kontrolu činiel není nutné prováět lší testy. Poku testovný vzorek glutinuje s testovím ltexovým činilem neglutinuje s kontrolním ltexovým činilem, je nutné testoví ltexové činilo testovt pole potřey uď s negtivní kontrolou, neo s neinokulovnými hemokultivčními méii (viz níže). Krok 1 Kápněte jenu kpku testovího ltexového 1 kpk činil o jenoho kroužku n rekční krtiče. Krok 2 Návkujte jenu kpku negtivní kontroly neo 1 kpk neinokulovného hemokultivčního méi vele testovího ltexového činil. Krok 3 Promíhejte pomoí míhí tyčinky tyčinku ezpečně zlikviujte. Krok 4 Protřepejte krtičku ručně neo ve třepče 3 minuty lší 3 minuty. Po uplynutí této oy y nemělo oházet k význmné glutini testovího ltexového činil. Krok 5 Bezpečně zlikviujte rekční krtičku. U testů vzorků tělesnýh tekutin používejte negtivní kontrolu onou se souprvou. U testů hemokultur použijte jko negtivní kontrolu vzorek neinokulovného hemokultivčního méi ze stejného zroje jko vzorek. Poznámk: Testování neinokulovného méi je ůležité, neoť u některýh forem hemokultivčníh méií se mohou projevit flešně pozitivní výsleky. Poznámky: ) Pozitivní negtivní vzorky, u nihž již ylo proveeno stnovení, lze rozělit n likvotní íly uhovávt při teplotě 15 ž 25 C neo nižší lze je pole potřey použít jko pozitivní negtivní kontroly. Pozitivní kontrolu lze též použít místo testovného vzorku. ) U ientifikčníh testů kolonií (pouze u N. meningitiis B/E. oli K1 Wellogen TM ) lze potvrit hrkteristiky testovíh kontrolníh ltexovýh činiel pomoí čerstvýh kultur referenčníh kmenů kterií inkuovnýh přes no metoou popsnou v části Postup stnovení. Jsou vhoné násleujíí referenční kmeny: ATCC 13090 N. meningitiis skupiny B (pozitivní rektivit) ATCC 23503 E. oli typ K1 (pozitivní rektivit) ATCC 13077 N. meningitiis skupiny A (negtivní rektivit) Kmeny ATCC 13090 ATCC 23503 y měly glutinovt s testovím ltexovým činilem neměly y význmně glutinovt s kontrolním ltexovým činilem. Kmen ATCC 13077 y neměl význmně glutinovt s testovím ni kontrolním ltexovým činilem. 10. VÝSLEDKY ODEČET VÝSLEDKŮ Pozitivní reke je vyjářen vznikem glutinovného orze ěhem 3 minut (20 sekun při testu kolonie) o promíhání ltexového činil s testovným vzorkem, n němž je jsně ptrné shluknutí ltexovýh části (or. 1). Ryhlost ojevení kvlit glutine závisí n konentri ntigenu pohyuje se o velkýh shluků, které se ojeví o několik sekun o promíhání, po mlé shluky, které vznikjí poměrně pomlu. Při ientifiki uou nejpozitivnější reke téměř okmžité.
U negtivní reke ltexové činilo neglutinuje mléčný vzhle zůstává ěhem elého testu v posttě nezměněný (or. 2). Pozor: U negtivníh orzů všk lze etekovt mírné stopy zrnitosti v závislosti n zrkové ostrosti lornt. Při ientifiki kultury některé kmeny mohou způsoit vláknitou gregi ltexového činil s mléčným pozím, ož je nutné interpretovt jko negtivní reki. POZNÁMKA: Ltexové částie použité v suspenzíh testovího kontrolního ltexového činil Wellogen TM pro stnovení N. meningitiis B/E. oli K1 nejsou stejné jko ty, jež jsou použity pro osttní činil, poskytují jemnější glutini. Orázek 1 Orázek 2 11.4 Pozitivní výsleek testu závisí n přítomnosti etekovtelné hliny ntigenu v tělesné tekutině neo hemokultivčním méiu. 11.5 Pro eteki ntigenu v moči neo séru pomoí činiel Wellogen TM pro stnovení N. meningitiis B/E. oli K1 (tulk 6) jsou k ispozii omezené kliniké úje. Pro eteki ntigenu v moči pomoí činiel Wellogen TM pro stnovení N. meningitiis ACY W135 (tulk 5) nejsou k ispozii žáné kliniké úje. Antigen yl všk hlášen v moči u vzorků oshujííh ACY W135 5. 11.6 U několik vzorků yl hlášen výskyt nesouvisejííh kterií, které mjí společné ntigeny, stejně jko u jkéhokoli systému pro imunologiká stnovení nelze u ltexového testu vyloučit možnost zkřížené reke 1,3,8,9. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Pozitivní výsleek Doje ke zřetelné glutini jenoho testovího ltexového činil, která je oprovázen negtivními rekemi, se všemi lšími ltexovými testovími činily, kontrolní ltexové činilo inikuje přítomnost ientitu kteriálního ntigenu v testovném vzorku. Pltí oené prvilo, že pozitivní výsleek s činilem Wellogen TM pro stnovení N. meningitiis B/E. oli K1 u vzorků novorozenů svěčí o infeki E. oli K1. U stršíh pientů je prvěpoonější infeke meningokokem skupiny B. Negtivní výsleek Negtivní reke se všemi testovími ltexovými činily inikuje nepřítomnost etekovtelné úrovně kteriálníh ntigenů v testovné tělní tekutině - nevylučuje všk možnost infeke způsoené těmito mikroorgnizmy poku příznky přetrvávjí, může ýt žáouí provést test lšíh neo jinýh vzorků neo test moči po zkonentrování vzorku. U kultur pltí, že poku neoje k glutini činiel Wellogen TM pro stnovení N. meningitiis B/E. oli K1, znmená to, že se prvěpooně neue jent o N. meningitiis skupiny B neo E. oli K1. Neinterpretovtelné výsleky Aglutine víe než jenoho testovího ltexového činil neo opovííh testovíh kontrolníh ltexovýh činiel inikuje nespeifikou reki. Ve většině přípů lze nespeifiké reke s tělesnými tekutinmi vyloučit zhřátím purifikí vzorku 4 (viz Příprv klinikýh vzorků, část 8). Poku u superntntu hemokultury nstne nespeifiká reke, zhřívejte vzorek ve vrouí voní lázni po ou 5 minut, ohlďte jej n pokojovou teplotu (18 ž 30 C), purifikujte jej entrifugí test zopkujte. POZNÁMKA: Testy proveené přímo z klinikýh vzorků jsou určeny pro sreeningové účely měly y oplnit, le nikoli nhrit stnovení z kultur. Výsleky musejí ýt použity společně s lšími úji, npř. příznky, výsleky lšíh testů, klinikým ojmem t. 11. FUNKČNÍ OMEZENÍ TESTU 11.1 Pltí pro tělesné tekutiny kojenů (pouze streptokoky skupiny B) Flešně negtivní výsleky testu mohou vzniknout u vzorků, v nihž je hlin ntigenu nižší než etekční mez tohoto stnovení. Po oržení negtivníh výsleků y měl ýt proveen selektivní kultive v ujonu. Pozitivní výsleek nznčuje přítomnost streptokokového ntigenu skupiny B. Výsleek nemusí nutně inikovt přítomnost životshopnýh mikroorgnismů. 11.2 Pltí pro tělesné tekutiny kojenů (pouze streptokoky skupiny B) Použití tohoto prostřeku y nemělo nhrit mikroiologikou kultivi. Účinnost tohoto prostřeku při preiki onemonění způsoeného streptokoky skupiny B při stnovení z kojeneké moči neyl zjištěn. 11.3 Infeke způsoené streptokokem skupiny B se projevují přeevším u novorozenů. Pozitivní výsleky získné ze vzorků tělesnýh tekutin pientů stršíh než šest měsíů je nutné interpretovt optrně. Pozitivní výsleky získné ze superntntů hemokultur pientů jkéhokoli věku mohou ýt význmné. 4 12. PŘEDPOKLÁDANÉ VÝSLEDKY Vzorky oshujíí etekovtelnou hlinu streptokokového ntigenu skupiny B, ntigenu H. influenze typu, kpsulárního ntigenu S. pneumonie, ntigenů N. meningitiis A, C, Y, W135 neo ntigenu N. meningitiis B / E. oli K1 poskytnou s příslušným testovím ltexovým činilem glutinční reki. 13. FUNKČNÍ CHARAKTERISTIKY 13.1 Tělesné tekutiny hemokultury Byly proveeny kliniké stuie n 15 provištíh, při nihž yly použity vzorky tělesnýh tekutin (čerstvé vzorky vzorky, které yly uhovávány zmrzené) superntnty hemokultur. Při honoení hemokultur yly použity triční i riometriké kultivční tehniky. Sklovné vzorky tělesnýh tekutin neyly tepelně zprovány postupem popsným v části 8, Příprv klinikýh vzorků. Rozsáhlé lortorní testování neprokázlo při tomto postupu význmný úytek ntigenu po zhřátí. kžého ltexového činil v souprvě yl stnoven z testů vzorků kultur pozitivníh n homologní mikroorgnizmus neo těh, u nihž existovly lší ůkzy infeke (kliniká ignóz plus lší pozitivní test n ntigen). Tulky 2 ž 6 ukzují počet kžého typu vzorku testovného s jenotlivými ltexovými činily společně s počtem získnýh pozitivníh výsleků. kžého ltexového činil při eteki kteriálního ntigenu v mozkomíšním moku činil 67% (12/18) u stnovení Wellogen TM streptokok B, 97% (87/90) u Wellogen TM H. influenze, 88% (45/51) u Wellogen TM S. pneumonie, 71% (29/41) u Wellogen TM N. meningitiis ACY W135 65% (11/17) u Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1. kžého činil Wellogen TM yl honoen při použití vzorků tělesnýh tekutin (čerstvýh zmrzenýh) hemokultur pientů s kteriální neo septikou meningitiou lšími nesouvisejíími onemoněními. Z infikovnýh vzorků yly izolovány tyto mikroorgnizmy: H. influenze, S. pneumonie, N. meningitiis včetně skupin A, B, C, Y, E. oli, Stphyloous ureus, Enteroter erogenes, Klesiell pneumonie, Myoterium tuerulosis, Proteus mirilis, Stphyloous epiermiis, lf hemolytiký streptokok, et hemolytiký streptokok skupiny A, Klesiell oxyto, Pseuomons, Streptoous snguis, Toxoplsm gonii koliformní kterie. všeh pěti ltexovýh činiel Wellogen TM ve stnoveníh z mozkomíšního moku yl větší než 98%. Poroné úje o počtu testovnýh vzorků speifičnosti kžého testu Wellogen TM u kžého typu vzorku jsou uveeny v tulkáh 2 ž 6. 13.2 Kultive n plotnáh (N. meningitiis B/E. oli K1). Kultury N. meningitiis E. oli pěstovné n ooheném grovém méiu yly testovány v nemoničníh lortoříh interně. Všehny kultury N. meningitiis skupiny B E. oli K1 yly správně ientifikovány. Neošlo ke zkřížené rektivitě s lšími skupinmi N. meningitiis ni lšími ntigeny E. oli K (tulk 7). Vysoké proento kultur E. oli s jinými ntigeny K, které yly testovány, poskytlo nespeifiké reke (tulk 7).
Vzorek Tulk 1 Vzorky, které yly honoeny jenotlivými ltexovými činily Wellogen TM Wellogen TM Strep. B H. influenze S. pneumonie N. meningitiis N. meningitiis B/ ACY W135 E. oli K1 Mozkomíšní mok + + + + + Sérum + + + + +* Moč + + + +* +* Hemokultur + + + + + Bkteriální kolonie + Legen + K ispozii jsou úje oklájíí tuto pliki. +* K ispozii jsou omezené úje. Úje nejsou k ispozii. Tulk 2 Výsleky klinikýh stuií stnovení streptokok B souprvou Wellogen TM Mozkomíšní mok 18 12 58 1 Sérum 19 13 7 0 Moč 20 17 22 1 Hemokultur 9 9 369 4 e Izolovný/projevený et hemolytiký streptokok skupiny B (kliniká ignóz/jiný ntigenový test). Jiné kterie než streptokok skupiny B/nulový růst. Izolován E. oli. Izolován P. mirilis. e Izolován Stph. epiermiis; et hemolytiký streptokok skupiny A; E. oli + Enteroous; Stph. epiermiis + Enteroous. Tulk 3 Výsleky klinikýh stuií stnovení H. influenze souprvou Wellogen TM Mozkomíšní mok 90 87 375 2 Sérum 21 20 21 0 Moč 10 10 236 0 Hemokultur 54 54 1566 5 Jeen lší vzorek mozkomíšního moku poskytl nespeifikou reki. Jeen vzorek yl septiký, z lšího vzorku yl izolován E. oli. Dv lší vzorky superntntu hemokultury poskytly nespeifiké reke. Jeen vzorek yl septiký. V lšíh vzoríh yly vykultivovány: Stph. ureus; E. oli + Stph. epiermiis; K. oxyto; lf hemolytiký streptokok. Tulk 4 Výsleky klinikýh stuií stnovení S. pneumonie souprvou Wellogen TM Mozkomíšní mok 51 45 483 2 Sérum 6 6 13 0 Moč 105 46 320 0 Hemokultur 113 109 1512 7 Jeen lší vzorek mozkomíšního moku poskytl nespeifikou reki. Enteroter erogenes; koliformní kterie. Tři lší vzorky moči poskytly nespeifikou reki. Pseuomons; Strep. snguis; Stph. epiermiis + Enteroous; Strep. virins - izolovány ze 4 vzorků. Tulk 5 Výsleky klinikýh stuií stnovení N. meningitiis ACY W135 souprvou Wellogen TM Mozkomíšní mok 41 29 423 2 Sérum 5 3 36 0 Moč 0 229 0 Hemokultur 7 7 1615 2 Zhrnuje 8 skupin A, 25 skupin C 1 skupinu Y (zývjíí část neyl shluknut o skupin). K. erogenes; E. oli. Pět lšíh vzorků moči poskytlo nespeifikou reki. Strep. snguis; Stph. epiermiis + Enteroous. Tulk 6 Výsleky klinikýh stuií stnovení N. meningitiis B/E. oli K1 souprvou Wellogen TM Mozkomíšní mok N. meningitiis B 11 7 128 0 E. oli K1 6 4 128 0 Sérum: N. meningitiis B 2 1 3 0 Moč: N. meningitiis B 2 1 7 0 Hemokultur: N. meningitiis B 7 5 461 3 Vzorky yly uhovávány zmrzené. Všehny osttní vzorky yly testovány v čerstvém stvu. Aeroní neroní kultury (et hemolytiký streptokok A) stejného pient; koguláz negtivní stfylokok. Tulk 7 Ientifike kultur stnovením N. meningitiis B/E. oli K1 souprvou Wellogen TM Kultur + N. meningitiis skupin A 0 16 N. meningitiis skupin B 10 0 N. meningitiis skupin C 0 18 N. meningitiis skupin 29E 0 8 N. meningitiis skupin W135 0 7 N. meningitiis skupin X 0 4 N. meningitiis skupin Y 0 5 N. meningitiis skupin Z 0 3 E. oli K1 7 0 E. oli osttní ntigeny 0 13 Kultury ientifikovné sklíčkovou glutinční metoou. Dlšíh 10 kultur poskytlo nespeifiké reke. 14. SEZNAM LITERATURY 1. Argmn, M., Liu, T.Y., et l (1974). Polyriitol-phosphte: n ntigen of four grm-positive teri rossretive with the psulr polyshrie of Hemophilus influenze type. J. Immunol., 112, 649. 2. Bker, C.J. n Renh, M.A. (1983). Commeril ltex gglutintion for etetion of group B streptool ntigen in oy fluis. J. Peitr., 102, 393. 3. Bovre, K., Bryn, K., et l (1983). Surfe polyshrie of Morxell non-liquefiens ientil to Neisseri meningitiis group B psulr polyshrie. A hemil n immunologil investigtion. NIPH Annls, 6, 65. 4. Doskeln, S.O. n Berl, B.P. (1980). Bteril ntigen etetion in oy fluis: methos for rpi ntigen onentrtion n reution of nonspeifi retions. J. Clin. Miroiol., 11, 380. 5
5. Feigin, R.D., Wong, M., et l (1976). Counterurrent immunoeletrophoresis of urine s well s of CSF n loo for ignosis of teril meningitis. J. Peitr., 89, 773. 6. Klor, J., Asznowiz, R., et l (1977). Ltex gglutintion in ignosis of teril infetions, with speil referene to ptients with meningitis n septiemi. Amer. J. Clin. Pth., 68, 284. 7. Ksper, D.L., Winkelhke, J.L., et l (1973). Immunohemil similrity etween polyshrie ntigens of Esherihi oli 07:K1(L):NM n group B Neisseri meningitiis. J. Immunol., 110, 262. 8. Lee, C.J. n Koizumi, K. (1981). Immunohemil reltions etween pneumool group 19 n Klesiell psulr polyshries. J. Immunol., 127, 1619. 9. Roins, J.B., Myerowitz, R.L., et l (1972). Enteri teri ross-retive with Neisseri meningitiis groups A n C n Diploous pneumonie types I n III. Infet. Immun., 6, 651. 10. Whittle, H.C., Tugwell, P., et l (1974). Rpi teriologil ignosis of pyogeni meningitis y ltex gglutintion. Lnet, ii, 619. Broniox je registrovná ohrnná známk společnosti Cognis UK Lt. Minion je ohrnná známk společnosti Millipore Corportion. Výroe: Remel Europe Lt Clipper Boulevr West, Crosswys Drtfor, Kent, DA2 6PT UK Vyroeno pro: Oxoi Lt We Ro Bsingstoke, Hnts, RG24 8PW UK Máte-li zájem o tehnikou sisteni, orťte se prosím n místního istriutor. IFU X7713-CS, ktulizováno 3. květn 2011 Vytištěno ve Velké Británii 6