Detekční set na chřipku A/H1N1

Transkript

1 Pouze pro výzkum živých organismů. Detekční set na chřipku A/H1N1 Set primerů a hydrolyzačních sond pro detekci chřipky typu A Matrix Proteinu 2 a Hemaglutininu H1 (Mexických) genů Kat. č Sada na reakcí Verze červen 2009 Skladujte při +2 až +8 C Chraňte před světlem! 1. K čemu je produkt určen Obsah/funkce lahvičky/uzávěru Úvod 4 Kontrola 1 lahvička,, lyofilizát; Červený Inf A/ H1 Chřipka typu A je negativní řetězec jednořetězového RNA viru z čeledi rozpusťte ve 40 µl vody, PCR-grade (lahvička ), orthomyxovirů, jenž napadá ptáky a savce. Charakterizují jej geny uzávěr Pozitivní kontrola obsahující kopie genu Inf A/H1 v množství 8 10 /40 µl. hemaglutinin (HA) a neuraminidaza (NA). V dubnu 2009 byl v Mexiku nahlášen virus H1N1. Tento H1N1 voda, 2 lahvičky chřipkový virus má gen NA podobný typu HN1, ale vykazuje velmi bezbarvý PCR-grade specifický gen HA, který může sloužit k identifikaci. RT-PCR detekce uzávěr chřipky typu A se zakládá na konzervovaném 2. genu matrix bílkoviny (M2). Identifikace daného subtypu je založena na detekci genu hemaglutininu Skladování a stabilita HA1. Skupina virologů vybrala a ověřila dva Souprava je přepravována při teplotě +1 C až +2 C. Soupravu skladujte mixy primerů/hydrolizačních sond pro detekci virových RNA genů v temnu při teplotách +2 C až +8 C. chřipky při použití klinických vzorků H1N1. Po rozpuštění mixu lyofilizátů primerů/prób (lahvička 1 a 3), Doporučený postup pro testování nového typu viru chřipky je skladujte při teplotě +2 C až +8 C v temnu. Tento roztok bude stabilní A/H1N1 je detekce genu M2 u chřipky typu A. Pozitivní vzorky jsou poté po dobu čtyř týdnů. Případně můžete roztok skladovat při teplotě -1 C až testovány na specifický gen H1 se provádí paralelní -2 C po dobu jednoho roku. Zmrzlý roztok může být rozmražen pouze testování obou cílů. jednou. Vyvarujte se opakovaného zmrazování a tání. Sada primerů/prób pro detekci chřipkového genu Matrix Proteinu 2 Po rozpuštění kontrolní lyofilizáty (lahvičky 2 a 4) skladujte při M2 (Ward et al., 2004) byla doporučena SZO na detekci teplotě +2 C až +8 C. viru ptačí chřipky (2007). Další požadované vybavení Sada primerů/prób na detekci chřipky typu A hemaglutininu HA1 (Panning et al., 2009, postoupeno) byla doporučena Institutem Nutné Roberta Kocha v Berlíně, Německu (Květen 2009). Standardní laboratorní vybavení pipetové špičky bez nukleáz Počet testů 1. ml microcentrifugační zkumavky bez RNáz pro přípravu master mixů a ředění. Sada je určena pro detekci dvou genů matrix proteinu chřipky typu A Pro minimalizaci kontaminace RNázou, autoklávujte všechny zkumavky. M2 a specifického genu H1 chřipky typu A/H1N1, Sada obsahuje 100 reakcí Po celou dobu používejte rukavice. každého cíle s celkovým reakčním objemem 20µl. Používá se LightCycler 480 LightCycler Carousel-Based. U qpcr: Real-Time PCR systém, jako je LightCycler 480 Instrument (96 well)* LightCycler 2.0 Instrument* and LightCycler Obsah sady 1.x Instrument*. LightCycler 480 Multiwell Plate 96* and LightCycler Capillaries lahvička/víčko štítek obsah/funkce (20 l)*. 1 Primer/Prob 1 lahvička, lyofilizát, obsahuje 1 nmol primerů Standardní swing-bucket centrifuga s rotorem na multiwell plates. Modré víč. Mix na a 0. nmol FAM-označených sond; Volitelné Inf A/M2 rozpusťte ve 300 µl vody, PCR-grade (lahvička ) Pro purifikaci viru RNA: až po výslednou koncentraci 3.33 µm u MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit - High Perfor- primerů a 1.67 µm u sond. mance* MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit* 2 Kontrola 1 lahvička, lyofilizát; MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit Large Volume* Modré víč. Inf A/M2 rozpusťte ve 40µl vody, PCR-grade (lahvička ), MagNA Pure LC RNA Isolation Kit High Performance* Pozitivní kontrola obsahuje kopie genu Inf A/M2 MagNA Pure Compact Nucleic Acid Isolation Kit I* v počtu 8 10 /40 µl. MagNA Pure Compact Nucleic Acid Isolation Kit I Large Volume* 3 Primer/Prob 1 lahvička, lyofilizát, obsahuje 1 nmol primerů MagNA Pure Compact RNA Isolation Kit* Červené v. Mix na a 0. nmol FAM-označených sond; High Pure Viral RNA Kit* Inf A/ H1 rozpusťte ve 300 µl vody, PCR-grade (lahvička ) High Pure Viral Nucleic Acid Kit* až na výslednou koncentraci 3.33 µm u High Pure Viral Nucleic Acid Large Volume Kit* primerů a 1.67 µm u sond. Pro RT-PCR: RealTime ready RNA Virus Master*

2 Trvání testu RealTime ready Influenza A/H1N1 detekční set může být použit Zajistěte LightCycler 480 Multiwell Plate 96 plate adekvátním těšnícím filmem u LightCycleru 1.x 2.0 pro rychlé RT-PCR protokoly s dobou běhu 2 0 min za použití zajistěte každou LightCycler kapiláru uzávěrem. RealTime ready RNA Virus Masteru a LightCycleru 480 Umístěte multiwell plate do standardní swing-bucket centrifugy, LightCycler Carousel-Based System. která má rotor pro multiwell plates a vhodné adaptéry. Vyvažte jej vhodnou protiváhou tj., další multiwell 2. Jak se produkt používá plate), a centrifugujte po dobu 2 min při 1,00 g. Pro přístroj LightCycler 1.x 2.0 : Pokud máte LC Car- 2.1 Než začnete ousel Centrifugu, stočte kapiláry v LightCycler Sample Carouselu v LightCycler Carousel Centrifuze. Upozornění Případně umístěte kapiláry do chladících adaptérů do standardní Při technikách bez RNázy benchtop mikrocentrifugy, centrifugujte při 700 g (3,000 RNázou kontaminované reagencie a reakční cesty vedou k degradaci rpm) po dobu s, a přeneste kapiláry do vzorkového Light cycler vzorové RNA. K minimalizaci kontaminace dodržujte následující Sample Carouselu. pokyny: Umístěte adaptéry centrifugy do rovnováhy uvnitř centrifugy. Používejte jednorázové rukavice a často je měňte. Vyhněte se dotýkání se povrchů materiálů, které by mohly Umístěte multiwell plate do přístroje LightCycler nést stopy RNA Používejte pouze reagencie z této sady. Náhražky by mohly Nebo umístěte LightCycler Sample Carousel do obsahovat RNázu. LightCycler Carousel-Based systému. Vyčistěte a dezinfikujte pracovní plochy a nástroje, včetně Spusťte PCR program. pipet, dezinfekčními prostředky běžně dostupnými na trhu. Ve zkumavce o objemu 1. ml, na ledě, připravte mix RT-PCR na 20 µl Používejte pouze nové piketové špičky blokující aerosol a bez RNázy, reakce tak, že přidáte následující komponenty v pořadí uvedeném níže, totéž u centrifugačních zkumavek. a jemně je promícháte nahoru a dolů. Používejte pracovní plochu specificky určenou na práci s RNA, a pokud možno používejte reakční prostředky a pipety určené pouze pro Objem komponent na 20 µl reakce práci se vzorkovou RNA. Pipetovací protokol: Vzorkový materiál Objem na Výsl. konc. 20 µl reakce Použijte jakoukoliv virovou vzorovou RNA vhodnou na RT-PCR co se týká čistoty, koncentrace a absence RT-PCR inhibitorů. Pro opakovatelnou voda, PCR-grade 7.6 µl Izolaci nukleových kyselin použijte: Enzymatická směs, 0-krát konc. 0.4µl 1-krát buď přístroj MagNA Pure LC * přístroj MagNA Pure Com- RealTime ready RNA Virus pact* a příslušnou soupravu MagNA Pure Nucleic Acid Isolation Masteru Kit (pro automatizovanou izolaci), Reakční pufr, -krát konc. 4µl 1-krát soupravu High Pure Nucleic Acid Isolation Kit (pro manuální izolaci). of the RealTime ready RNA Virus Více v katalogu Roche Applied Science na stránkách: Master Primer/Probe Mix lahv µl 0. µm primery Vyšší koncentrace virových částic mohou vést k inhibici reakce 6 (3.33 M primery, 1.67 M 0.2 M próby proby) 6 Virová RNA vzorek µl 10 až 10 kopií na Negativní kontrola virové RNA vzorky Vždycky udělejte se vzorky negativní kontrolu. K přípravě negativní Pozitívní kontrola 10 až 10 kopií na kontroly vyměňte virovou vzorovou RNA za PCR-grade vodu. Při pozitivní kontrolu použití negativní kontroly můžete zaznamenat kontaminační problém. Negativní kontrola Pozitivní kontrola K přípravě RT-PCR mixu pro více než jednu reakci násobte U Inf A/M2 a/ Inf A/ H1 vždy proveďte se vzorky množství uvedené ve sloupci objem shora počtem reakcí. pozitivní kontrolu. Uvědomte si, že v průběhu pipetování spotřebujete určité množství S tímto roztokem zacházejte opatrně, abyste předešli kontaminaci. tekutiny a připočítejte extra objem pro RT-PCR tak, že přidáte do mixu Doporučujeme připravit ředící řadu 10 až 10,000 kopií na jednu reakci navíc. µl objemu vzorku. Roztok pozitivní kontroly je třeba Na 20 µl reakce: pipetujte 1 µl RT-PCR mixu do každé předchlazené LightCycler připravit vždy čerstvý. kapiláry do LightCycler 480 Multiwell Plate 96, a přidejte µl vzorku pozitivní kontroly negativní kontroly. 2.2 Postup Postup pro one-step RT-PCR A) LightCycler 480 Systém - protokol Následující postup je optimalizován pro použití s LightCyclerem Postupujte podle návodu uvedeného níže, k přípravě jedné 20µl standardní 480. reakce při použití RealTime ready RNA Virus Masteru: Naprogramujte LightCycler 480 před přípravou reakčních mixů. Nedotýkejte se povrchu LightCycleru 480 Multiwell Plate LightCycler kapilár. LightCycler 480 protokol, který používá RealTime ready RNA Rozmrazte lahvičky 1 až 4 tohoto detekčního setu na testování vzorků Virus Master obsahuje následující programy: Reverzní transkripce virové vzorové RNA na influenza A Matrix Protein 2 a Hemagglutinin H1 (Mexiko) Denaturace: cdna/rna hybridu genů. K otestování pouze Influenza A Matrix Proteinu 2, roz- Amplifikace cdna mrazte pouze lahvičku 1 a kontrolu pro Influenza A /M2 (lahvička 2). rotoru a termální komory. Dále rozmrazte 3 lahvičky RealTime ready RNA Virus Více informací o tom, jak programovat zkušební protokol naleznete v Masteru: enzymatické směsi, reakčního pufru a vody, PCR- LightCycler 480 Software operačním manuálu, verze 1.. grade. K zajištění plnohodnotnosti všeho obsahu, rychle promíchejte lahvičky 1 a 2 (pipetováním nahoru a dolů) a stočte v mikrocentrifuze Protokol pro použití na LightCycler před jejich otevřením. 480 Multiwell Plate 96 Připravte RT-PCR master mix, podívejte se do pipetovacího protokolu Následující tabulka ukazuje RT-PCR parametry, které je potřeba naprogramovat pro LightCycler 480 System RT-PCR běh s Uvedeného níže. Vložte stejné množství reakčního mixu a roztoků RealTime ready RNA Virus Masterem na LightCycleru 480 Multiwell vzorku do příslušných jamek u LightCycleru 480 Multiwell Plate 96. Plate 96 na LightCycler kapilárách ( µl objemu každého vzorku pro reakční objem 20µl). 2

3 2.2.2 Two-step RT-PCR postup Kromě one-step RT-PCR postupu, při využití RealTime Detekční formát Block Type ready RNA Virus Masteru, je možné provést i two-step RT- PCR. Použije se Transcriptor First Strand cdna Synthesis Kit* Mono Color Hydrolysis Probe / 96 s LightCycler 480 Probes Master* na LightCycleru 480 UPL Probe LightCycler TaqMan Master* na LightCycler Programs Carousel-Based přístrojích. Detailní protokoly uvádíme níže: Program Name Cycles Reverzní transkripce (RT) s využitím Transcriptor First Strand cdna Reverzní transkripce 1 Synthesis Kit: Počáteční denaturace 1 Rozmrazte před použitím všechny zmrzlé reagencie. Před zahájením postupu je krátce centrifugujte. Cyklus 4 Mějte při přípravě reakce všechny reagencie na ledě. 1 V 1. ml reakční zkumavce v ledu si připravte RT Mix na 20 Vµl reakce tak, že přidáte následující komponenty tak, jak je uvedeno dále. Cílové teploty Cíl Akviziční Hold Ramp Rate Akvizice Objem na Výsledná [ C] Mód [hh:mm:ss] [ C/s] [n/ C)] 20 µl reakce koncentrace Random Hexamer Primer 2µ l Reverzní transkripce 600 M (lahvička 6) žádná 00:08: Transkriptor reverzní trans- 4µ l 1-fold Pre - denaturace kriptázy reakční pufr, (8 mm MgCl2) konc. (lahvička 2) 9 žádná 00:00: Protektor RNázy Inhibitor, 0. µl 1-fold Amplifikace 40 U/ l (lahvička 3) 9 žádná 00:00: Deoxynucleotid - Mix, 2 µl 1 mm každý 60 single 00:00: mm každý (lahvička 4) Transkriptor reverzní 0.µl 10 U 72 žádná 00:00: transkriptáza 20 U/ l voda, PCR-grade 1 µl 6 RNA vzor (zpravidla 1:4 10 µl 10 to 10 kopií na ředěná ve vodě, PCR-grade) vzorky virové RNA 40 žádné 00:00: positivní kontrola 10 to 10 kopií na B) LightCycler Carousel-Based System - Protokol vzorky virové RNA Následující postup je optimalizován pro použití LightCycler negativní kontrola Carousel-Based systému. Naprogramujte LightCycler x přístroj před přípravou K přípravě RT mixu pro více než jednu reakci násobte množství uvedené reakčních mixů. ve sloupci objem shora počtem reakcí. LightCycler x protokol, který využívá RealTime ready Uvědomte si, že během pipetování využijete více tekutiny a připočítejte RNA Virus Master obsahuje následující programy: jednu reakci abyste měli dostatečný objem RT mixu. Reverzní transkripci vzorové virové RNA Denaturaci hybridu cdna/rna Centrifugujte krátce zkumavku, aby se tekutina usadila na jejím dně. Amplifikaci cdna rotoru a termální komory Umístěte PCR zkumavku do termálního blokového cycleru s vyhřívaným víkem Více informací o programování zkušebního protokolu naleznete ( pro minimalizaci odpařování). V LightCycler Software 4.1 operačním manuálu. Reverzní transkripce protokol pro použití s Thermal Block Cycler: Protokol k použití LightCycler Carousel-Based Inkubujte RT reakci po dobu 10 min při +2 C, a potom 30 min při systému + C. Inaktivujte transkriptor reverzní transkriptázy zahříváním při Následující tabulka ukazuje parametry PCR, které musí být +8 C po dobu min. naprogramovány pro LightCycler Carousel-Based PCR pro použití s RealTime ready RNA Virus Masterem na LightCycler kapilárách (20 µl). Zastavte reakci okamžitým umístěním zkumavky na led. Nyní může být reakční zkumavka skladována při teplotě 1 C až 2 C po dobu několika týdnů. Reverzní transkripce žádné 1-00:08:00 20 žádné Pre - denaturace žádná :00:30 20 žádná Amplifikace Kvantifikace 4x Denaturace 9 00:00:01 žádná Amplifikace 60 00:00:20 single Extense 72 00:00:01 žádná žádné :00:30 20 žádné 3

4 A) Objem komponent na 20 µl reakce na B) Objem komponent na 20 µl reakce na LightCycler LightCycler 480 Probes Master: TaqMan Master: Pipetovaní protokol: Pipetovaní protokol: Objem na 20 µl Výsledná Objem na 20µ l Výsledná reakce koncentrace reakce koncentrace voda, PCR-grade - voda, PCR-grade 6 µl Primer/Probe Mix (lahvička 1 ze 3 l µ l +1 µ l 0. µm primery Primer/Probe Mix (lahvička 1 ze 3) l +1 µ l 0. µm primerů Influenza A/H1N1 1 µ l 0.2 µm sonda Influenza A/H1N1 detekční detekční sada, 3.33 µm prim- sada, 3.33 M primerů, 1 µ l 0.2 µm sonda erů, 1.67 M sonda) 1.67 M probů) LightCycler 480 Probes 10µ l 1-krát LightCycler TaqMan 4 µl 1-krát Master 2-krát Master -fold cdna vzorové RNA 7 µl cdna vzorové RNA 7 µl cdna pozitivní kontroly cdna pozitivní kontroly negativní kontroly negativní kontroly K přípravě PCR mixu na více než jednu reakci, násobte množství K přípravě PCR mixu na více než jednu reakci, násobte množství ve sloupci objem shora počtem reakcí. ve sloupci objem shora počtem reakcí. Uvědomte si, že pipetováním přijdete o část tekutiny a připočítejte Uvědomte si, že pipetováním přijdete o část tekutiny a připočítejte pro PCR objem navíc tak, že do mixu přidáte jednu reakci. pro PCR objem navíc tak, že do mixu přidáte jednu reakci. PCR Protokol pro LightCycler 480 Probes Master : PCR Protokol pro použití LightCycler TaqMan Masteru: Detekční formát Block Type Jednobarevné hydrolyzační próby 96 vícebarevné hydrolyzační próby Programy Prvotní denaturace Program Název cyklu žádná :10:00 20 žádná Prvotní denaturace 1 Amplifikace Cykly 4 Kvantifikace 4x 1 Denaturace 9 00:00:10 žádná Annealing 60 00:00:30 žádná Cílové teploty Extenze 72 00:00:01 single Cíl Akviziční Stání Rychlost ramp Akvizice [ C] mód [hh:mm:ss] [ C/s] [n/ C)] Prvotní denaturace žádné :00:30 20 žádné 9 žádná 00:10: Kontrola kvality Amplifikace Každá šarže RealTime ready Influenza A/H1N1 detekčního setu se testuje na splnění specifikací qrt-pcr za použití LightCycleru 9 žádná 00:00: žádná 00:00: jediná 00:00: žádné 00:00:

5 3. Výsledky 4. Doplňující informace Následující výsledky byly získány s použitím RealTime ready Influenza A/H1N1 detekčního setu a RealTime ready RNA Virus Masteru na přístroji LightCycler 480 s 1,000 kopiemi plasmid control DNA pro H1 a M2 a jedním pozitivním virovým vzorkem. Změny předešlé verze Detailní protokoly na two-step RT-PCR postup jsou popsány. Editační změny. Textové zkratky Aby byly informace konsistentní a lépe pochopitelné, používáme v tomto instrukčním manuálu následující textové zkratky: Použití textových zkratek: Očíslované instrukce Kroky v postupu musí být provedeny označené, atd. v uvedeném pořadí. Hvězdička * znamená, že je produkt k dostání u Roche Applied Science. Symboly Symboly používáme v instrukčním manuálu ke zvýraznění důležitých informací. Popis symbolů Informační značka: Další informace o daném tématu postupu. Důležitá poznámka: Informace nezbytná pro úspěšný průběh operace pro správné použití produktu.. Obr. 1: Real-time PCR amplifikační křivka získaná s použitím 1,000 kopií na jamku Informace k objednávkám kontroly H1 Roche Applied Science nabízí širokou škálu reagencií a systémů pro výzkum (, Cp = 28.71); a kontroly M2,(Cp=31,08) živých organizmů. Kompletní nabídku produktů a manuály naleznete plasmidu DNA, a jednoho pozitivního virového vzorku. RT-PCR byla na stránkách provedena v reakčním objemu 20 µl na jamku v LightCycleru 480 Multiwell plate, 96. a na těchto specializovaných stránkách: Influenza Hemaglutinin H1 virus RNA byl detekován ve virovém vzorku LightCycler Carousel-Based System: s použitím H1 primer/prób sady, (Cp = 23.99) a M2 primer/prób sady,( Cp = 26.21). LightCycler 480 System: Automatizován příprava vzorků (MagNAPure LC System a MagNAPure Compact System): DNA a RNA příprava různé nástroje pro purifikaci nukleových kyselin: Interpretace údajů Možné výsledky detekce Influenza A Matrix Proteinu 2. Produkt Velikost balení Kat. č. Influenza A Pozitivní kontr. Negativní Výsledek Analyzátor a LightCycler 480 Instru- 1 přístroj Matrix obsahující kontrola příslušenství ment II, 96 well (96 well) Protein 2 Inf A/M2 gen LightCycler 480 Block Kit 1 block kit na (vzorek) 96 Silver 96-well PCR Žádný signál po Detekovatelný Negativní Negativní Multiwell Plates LightCycler PCR 480 Multi- 0 destiček a well Plate 96, white fólie Signál po PCR Detekovatelný Negativní Pozitivní LightCycler 480 Sealing 0 fólií Žádný signál po Nedekovatelný Nerelevantní chyba v PCR Foil PCR opakujte test LightCycler 480 Software, 1 balení Version 1. softwaru Signál po PCR Nerelevantní Pozitivní Kontaminace opakujte test LightCycler přístroj Instrument a příslušenství LightCycler 1. 1 přístroj Možné výsledky detekce genů Hemaglutininu H1 (Mexiko) Instrument a související produkty a datová stanice Hemaglutinin Pozitivní Negativní Výsledek LC Carousel Centrifuge centrifuga H1 (Mexiko) kontrola kontrola s rotorem a (11 V) geny (vzorek) obsahující nástavcem Inf A/H1 gen (230 V) LightCycler Žádný signál po Detekovatelný Negativní Negativní Software balení softwaru PCR LightCycler Capillaries 1 balení (obsa Signál po PCR Detekovatelný Negativní Pozitivní (20 l) hující krabic, Žádný signál po Nedekovatelný Nerelevantní chyba v PCR každá s 96 PCR opakujte test kapilárami a zátkami) Signál po PCR Nerelevantní Pozitivní Kontaminace, MagNA Pure LC 2.0 Instrument 1 přístroj s příslušenstvím opakujte test MagNA Pure Compact 1 přístroj Instrument s příslušenstvím

6 Produkt Velikost balení Kat. č. RNA Virus MagNA Pure LC Total 1 sada na až izolační sady Nucleic Acid Isolation Kit izolací High Performance MagNA Pure LC Total 1 sada (192 izola Nucleic Acid Isolation Kit cí) MagNA Pure LC Total 1 sada (192 izola Nucleic Acid Isolation Kit - cí) Large Volume MagNA Pure LC RNA Iso- 1 sada (192 izola lation Kit - High Perfor- cí) mance MagNA Pure Compact Nucleic Acid Isolation Kit I 1 sada na 32 izo lací MagNA Pure Compact 1 sada na 32 izo Nucleic Acid Isolation Kit I lací - Large Volume MagNA Pure Compact RNA Isolation Kit 1 sada na 32 izo lací High Pure Viral RNA Kit 1 sadda na až purifikací High Pure Viral Nucleic 1 sada na až Acid Kit 100 purifikací High Pure Viral Nucleic Acid Large Volume Kit 1 sada na až 40 purifikací Přidružené RealTime ready 1 sada sady a RNA Virus Master reagencie Transcriptor First Strand 1 sada na cdna Synthesis Kit 100 reakcí LightCycler 480 Probes Master 1ml LightCycler TaqMan Master 1 sada na 480 reakcí Informace o licenci POZNÁMKA ODBĚRATELI; OMEZENÍ LICENCE: Licence k provádění patentovaných ' nukleázových procesů ve výzkumu je obdržena nákupem (i) obou autorizovaných ' Nuclease Core Kit a licencovaných sond, (ii) a licencovanou sadou ' Nuclease Kit, (iii) licenčních práv od Applied Biosystems. Tento produkt je autorizovanou sadou ' Nuclease Core Kit. Použití tohoto produktu je chráněno jedním více následujícími americkými patenty a příslušnými patenty mimo území USA:,079,32,,789,224,,618,711, 6,127,1,,677,12,,773,28,,407,800,,322,770,,310,62,,210,01,,487,972, a mimo území USA relevantní k americkému patentu č. 4,889,818. Nákup tohoto produktu zahrnuje limitovanou, nepřenosnou imunitu před soudními procesy ohledně patentových práv k použití pouze tohoto množství produktu pro interní výzkum nákupčího. Zvláštní nákup licencovaného próbu by obsahoval práva k aplikovatelným americkým patentům č.,38,848,,723,91,,876,930, 6,030,787, 6,28,69,,804,37 (pouze body 1-12), a 6,214,979, a relevantní práva mimo území USA. Je jasně dáno, ať implikací či dřívějším soudním procesem že neexistuje právo provádění komerční služby jakéhokoliv druhu, včetně neomezeného reportování výsledků aktivit objednatele za poplatek jiné komerční výhody. Tento produkt je určen pouze pro účely výzkumu. Diagnostické použití podle patentů Roche vyžaduje zvláštní licenci od Roche. Více informací o nákupu licencí obdržíte od ředitele licencí, Applied Biosystems, 80 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA. Ochranné značky MAGNA PURE, REALTIME READY, LIGHTCYCLER, LC, TAQMAN a HIGH PURE jsou ochrannými značkami firmy Roche. FAM je ochranná známka firmy Applera Corporation jejích filiálek v USA a/ některých dalších zemích. Ostatní značky a produkty jsou ochranné známky jejich relevantních vlastníků. Kontakt a podpora Ptejte se, řešte problémy, navrhujte zlepšení reportujte nové aplikace na našich stránkách Online Technical Support /support Volejte, faxujte pište, navštivte Roche Applied Science stránky,, a vyberte si svou zemi. Zobrazí se vám kontaktní informace přímo u vás. V sekci Product Search function naleznete příbalové letáky a bezpečnostní listy.. Roche Diagnostics GmbH Roche Applied Science Mannheim Germany