ST AIA-PACK HCG ÚČEL POUŽITÍ SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU PRINCIP STANOVENÍ VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ DODÁVANÝ MATERIÁL

Transkript

1 EU rev. HCG Upozornění: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky z členských států Evropské unie. Pro zákazníky z členských států Evropské Unie: Přečtěte si prosím tento návod k použití v kombinaci s listem nazvaným EXTRA INFO HCG. ÚČEL POUŽITÍ ST AIA-PACK HCG ST AIA-PACK HCG je určen pro diagnostické použití in vitro pouze ke kvantitativnímu měření lidského choriogonadotropinu (intaktní hcg) v lidském séru nebo v heparinizované plazmě na analyzátorech systému Tosoh AIA. SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU Lidský choriogonadotropin (hcg) je glykoprotein, který se podobně jako LH, FSH a TSH skládá z alfa a beta řetězců. Přibližně 30 % hmotnosti tvoří sacharidy (1). Alfa řetězce jsou ve všech čtyřech hormonech prakticky totožné, zatímco beta řetězce se liší a určují specifickou biologickou aktivitu a imunologické vlastnosti každého hormonu (2,3). V případě hcg však sekvence aminokyselin beta řetězce vykazuje značný stupeň homologie s tou u LH (4), což činí obtížné dosáhnout požadovanou specificitu testu na základě konvenčních protilátkových technik. Použití technologie monoklonálních protilátek umožnila v podstatě neomezenou dodávku protilátky s přesně definovanou specificitou. HCG je krátce po implantaci tvořený placentou (5-7) a tvorba se zvyšuje geometrickou rychlostí, dokud nedosáhne vrcholu téměř na konci prvního trimestru. To ho činí výborným markerem pro potvrzení těhotenství anebo následně pro sledování jeho průběhu, pokud je to nutné (5,8). Ostatní stavy spojené se zvýšenými koncentracemi hcg v séru jsou nádory trofoblastového a netrofoblastového původu (9-12). PRINCIP STANOVENÍ Stanovení pomocí ST AIA-PACK HCG je dvoumístná imunoenzymometrická analýza, která je celá prováděná v testovacích kelímcích ST AIA-PACK HCG. HCG přítomný v testovaném vzorku je vázaný na monoklonální protilátku imobilizovanou na magnetických zrnech a enzymem označenou monoklonální protilátku v AIA-PACK. Magnetická zrna jsou promytím zbavena nenavázaných, enzymem značených monoklonálních protilátek a jsou pak inkubována s fluorogenním substrátem, 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značené monoklonální protilátky, která se váže na zrna, je přímo úměrné koncentraci hcg v testovaném vzorku. Je vynesena standardní křivka a neznámé koncentrace vzorků jsou vypočítány pomocí této křivky. DODÁVANÝ MATERIÁL Katalogové č ST AIA-PACK HCG 5 zásobníků x 20 testovacích kelímků Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn potažených myší monoklonální protilátkou anti-hcg a 100 µl myší monoklonální protilátky anti-hcg (proti HCG) konjugované s hovězí alkalickou fosfatázou s azidem sodným jako konzervační látkou. POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY Následující materiály jsou vyžadovány k provedení analýzy lidského choriogonadotropinu pomocí ST AIA-PACK HCG (kat. č ) na analyzátorech systému TOSOH AIA. Následující materiály společnost Tosoh dodává samostatně Materiály Kat. č. AIA Nex IA nebo AIA AIA Nex IA nebo AIA-21 LA AIA-1800 ST AIA-1800 LA AIA-2000 ST AIA-2000 LA AIA-600 II AIA-600 II BCR AIA AIA AIA-PACK SUBSTRATE SET II AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II AIA-PACK HCG CALIBRATOR SET AIA-PACK HCG ZERO CALIBRATOR 0 miu/ml AIA-PACK HCG POSITIVE CALIBRATOR 200 miu/ml (přibližně) AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE KELÍMKY NA VZORKY AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP Další požadavky pouze pro AIA Nex IA /AIA-21: PIPETOVACÍ ŠPIČKY PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY Další požadavky pouze pro AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000: PIPETOVACÍ ŠPIČKY STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY Používejte pouze materiály dodané společností Tosoh. Nepoužívejte náhradní materiály získané z jiných zdrojů, protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti Tosoh. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 1. ST AIA-PACK HCG je určen pouze pro diagnostické použití in vitro. 2. Před použitím zkontrolujte obal a vnější povrch hliníkového obalu, zda nejsou poškozeny. Pokud jsou patrná jakákoli poškození, kontaktujte vašeho místního obchodního zástupce společnosti Tosoh. 3. V rámci jednoho zásobníku nesmíte míchat testovací kelímky různých šarží nebo různých testů. 4. ST AIA-PACK HCG obsahuje azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku potenciálně výbušných azidů kovu. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu. 5. Při přípravě tohoto výrobku není používáno lidské sérum. Protože však pro přípravu vzorků budou používány lidské vzorky a další výrobky pro kontrolu kvality v laboratoři mohou být deriváty lidského séra, dodržujte prosím při manipulaci se všemi vzorky a kontrolními vzorky standardní laboratorní bezpečnostní opatření. 6. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace. 7. ST AIA-PACK HCG byl navržený tak, aby u převážné většiny vzorků nedocházelo k problémům způsobeným zakřivením kalibrační křivky při vysokých koncentracích, tzv. hook effect. Vzorky séra nebo heparinizované plazmy s koncentracemi hcg mezi 400 a miu/ml budou odečteny jako 2-12

2 >400 miu/ml. Vzorky moči s koncentracemi hcg mezi a miu/ml budou při doporučeném 5násobném ředění odečteny jako > miu/ml. Tzv. hook effect se může objevit u koncentrací hcg > miu/ml v séru nebo heparinizované plazmě a > miu/ml v moči. 8. Pro bezpečnou likvidaci odpadu se doporučuje, aby každá laboratoř dodržovala zavedené laboratorní postupy a místní, národní či federální nařízení. 9. Po otevření musí být lahvička s roztokem na ředění vzorků těsně uzavřena pomocí čisté gumové zátky. Uzávěr znečistěným materiálem může způsobit znehodnocení činidla. 10. Zbývající roztok na ředění vzorků nesmí být smícháván s další lahvičkou, ale musí být znehodnocen, aby se zabránilo další kontaminaci. 11. Sérum, prach, kov nebo kontaminace mikroogranismy mohou způsobovat rozpad rekonstituovaného roztoku substrátu. Uchovávejte v čistém prostředí, mimo přímé sluneční záření a ultrafialové světlo. 12. TOSOH doporučuje, aby byl pro kalibraci použit nový obal testovacích kelímků. SKLADOVÁNÍ A STABILITA Veškeré neotevřené materiály jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány při specifikované teplotě. Materiály Kat. č. 2 8 C: ST AIA-PACK HCG AIA-PACK HCG CALIBRATOR SET AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK SUBSTRATE SET II AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP Po otevření hliníkového sáčku lze testovací kelímky ST AIA-PACK HCG ponechat v analyzátorech systému TOSOH AIA (18 25 C) po dobu maximálně 10 dnů (10 x 24 hodin). Pokud jsou přes noc uchovávány při teplotě 2 8 C, lze testovací kelímky použít až po dobu 30 dnů (30 cyklů při 8 hodinách v systému a 16 hodinách v chladničce). Jakmile otevřete hliníkový sáček, musí se testovací kelímky spotřebovat do 30 dnů. - AIA-PACK HCG CALIBRATOR SET musí být vždy těsně uzavřený a skladovaný při teplotě 2 8 C. Po otevření se doporučuje kalibrační roztoky použít do jednoho dne. - Po otevření může být AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION ponechán v analyzátorech systému TOSOH AIA (18 25 C) po dobu maximálně 3 dny (3 x 24 hodin). Pokud se uchovává přes noc při teplotě 2 8 ºC, lze roztok na ředění vzorků použít po dobu maximálně 9 dny (9 cykly každý trvající 8 hodin v analyzátoru a 16 hodin v chladničce). Roztok na ředění vzorků by se neměl používat déle než 90 dnů po otevření, i když je uzavřený a uložený v chladničce. - Rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při teplotě C nebo 30 dnů při teplotě 2 8 C. - Pracovní ředidlo a promývací roztoky budou stabilní po dobu 30 dnů při teplotě C. - Činidla nesmí být užívána, když se jeví zakalená či zabarvená. ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI Pro test je nutno použít sérum, heparinizovanou plazmu nebo moč. NESMÍ BÝT POUŽITA EDTA nebo citrátová plazma. Vzorky moči je nutné odebírat bez konzervačních látek Používá-li se sérum, vzorek žilní krve se odebírá asepticky bez aditiv. Uchovávejte při teplotě C než se vytvoří sraženina (obvykle minut), pak odstředěním získejte vzorek séra pro test. Používá-li se heparinizovaná plazma, vzorek žilní krve se odebírá asepticky s určeným aditivem. Co nejdříve odstřeďte a oddělte plazmu od sedimentovaných buněk. Neadekvátní centrifugace nebo přítomnost fibrinu nebo částic ve vzorku může způsobit chybný výsledek. Vzorky obsahující inhibitory alkalické fosfatázy mohou způsobovat chybné výsledky. Zkontrolujte všechny vzorky na přítomnost vzduchových bublinek a pěny. Odstraňte všechny bubliny před provedením analýzy. Během sériového sledování jednotlivého pacienta nestřídejte druhy vzorků. U určitých pacientů se mohou koncentrace naměřené v různých druzích vzorků poněkud lišit. Všechny vzorky moči musí být naředěny více než 5násobně pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION. Vzorek moči bez ředění může mít nízkou výtěžnost. Před provedením analýzy mohou být vzorky uloženy při teplotě 2 8 C po dobu maximálně 24 hodin. Nelze-li analýzu provést do 24 hodin, musí být vzorek uchováván zmražený při teplotě -20 C nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků. Zakalené vzorky séra nebo vzorky, které obsahují částice hmoty, musí být před analýzou odstředěny. Před analýzou pomalu ponechte vzorky dosáhnout teploty C a jemně je promíchejte. Objem vzorku potřebný pro analýzu je 50 µl. POSTUP Podrobné pokyny pro AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800, AIA-2000 a AIA-360 naleznete v jejich uživatelském manuálu. I. Příprava činidla A. Substrátový roztok Před přípravou roztoku pracovního substrátu ponechte všechna činidla dosáhnout teploty C. Přidejte jednu lahvičku AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II k lyofilizovanému AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II a důkladně promíchejte, aby se všechny pevné materiály rozpustily. B. Promývací roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) do přibližně 2,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS), důkladně promíchejte a upravte na konečný objem 2,5 l. C. Ředicí roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) do přibližně 4,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS), důkladně promíchejte a upravte na konečný objem 5,0 l. II. Postup kalibrace A. Kalibrační křivka Kalibrační roztoky pro použití s ST AIA-PACK HCG byly standardizovány podle WHO 3rd IS 75/537 (1975). Kalibrační křivka pro ST AIA-PACK HCG bude stabilní až 90 dnů. Stabilita kalibrace je sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulaci s činidlem a na řádné údržbě systému Tosoh AIA podle pokynů výrobce. 4-12

3 Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). Další informace o provozu přístroje naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu výsledků. Rozsah koncentrací kalibrační křivky je zobrazen v 1/5 rozsahu testu pro vzorky moči. Koncentrace vzorků moči jsou vypočítány vynásobením koncentrací získaných z kalibrační křivky a faktorem ředění. AIA Nex IA /AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky vypočítají koncentrace vzorků moči pomocí faktoru ředění a ohlásí výsledky. B. Postup kalibrace 1. Pokyny k postupu viz příslušný uživatelský manuál systému Tosoh AIA. 2. Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru. 3. AIA-PACK HCG CALIBRATOR SET je dodávaný připravený k použití. 4. Společnost TOSOH doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo. C. Kritéria přijatelnosti kalibrace 1. Průměrná rychlost pro AIA-PACK HCG ZERO CALIBRATOR má být < 3,0 nmol/(l s). 2. Vzhledem k tomu, že existuje přímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, musí rychlost vzrůstat s narůstající koncentrací. 3. Opakující se hodnoty musí být v rozmezí 10%. D. Kontrola kalibrace a přijetí 1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace a použijte výše uvedená kritéria. 2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte. Další informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. III. Postup kontroly kvality A. Komerčně dostupné kontroly Komerčně dostupné kontroly musí být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby byly použity nejméně dva stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento určitý test specifikuje následující: Kontrolní materiál: Frekvenci: 5-12 Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravná opatření v případě, že kontroly nesplní laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je v laboratoři. B. Postup kontroly kvality 1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu pro váš analyzátor. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou laboratoře. IV. Zpracování vzorků A. Příprava Vzorky séra nebo heparinizované plazmy nevyžadují před analýzou ředění. Vzorky moči musí být před analýzou naředěny nejméně 5násobně pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION. Naředěné nebo nenaředěné vzorky pacientů jsou umístěny na příslušné pozice analyzátorů systému TOSOH AIA. Pro AIA-360 musí být vzorky moči naředěny manuálně v testovacích kelímcích a testovací kelímky musí být vloženy do AIA-360. Další informace o přípravě vzorků a provozu přístroje naleznete v kapitole ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY a konzultujte specifický uživatelský manuál systému Tosoh AIA. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky kódované čárovým kódem lze použít v AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA B. Postup analýzy 1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků ST AIA-PACK HCG pro počet vzorků, které mají být analyzovány. 2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze. Poznámka: AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP bude v případě použití vestavěných ředění vyžadován systémem AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA POZNÁMKY K POSTUPU 1. Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn. 2. Analýzy ligand prováděné na analyzátorech systému TOSOH AIA vyžadují, aby laboratoř používala vodu reagenční čistoty třídy I dle CAP nebo reagenční vodu pro klinické laboratoře dle CLSI. Voda musí být testována nejméně jednou měsíčně a nesmí obsahovat částicovou hmotu včetně bakterií. ph vody by mělo být také rutinně testováno. Další informace naleznete v dokumentu CLSI C3-A4, Příprava a testování reagenční vody v klinické laboratoři ; schválené 4. vydání směrnice. 3. Pokud je koncentrace lidského choriogonadotropinu ve vzorku séra nebo heparinizované plazmy větší než 400 miu/ml či větší než miu/ml v moči, musí být vzorek naředěn pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzován v souladu s postupem procedury. Doporučené ředění pro vzorky obsahující více než 400 miu/ml (v séru nebo heparinizované plazmě) nebo miu/ml (v moči) je 1:10 nebo 1:100. Je žádoucí naředit vzorky tak, aby byly naředěné vzorky odečteny mezi 5 a 400 miu/ml v séru nebo heparinizované plazmě a mezi 25 a miu/ml ve vzorku moči. 4. Faktor ředění je nutné zadat do softwaru. Další informace o ředění vzorků naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 5. V analyzátorech systémů Tosoh AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků ST AIA-PACK HCG. 6. Nejsou-li pro tento test specifikace analýzy připraveny v softwaru systému, musí být specifikace zadány pod kódem testu

4 VÝPOČET VÝSLEDKŮ Analyzátory systémů Tosoh AIA provádějí všechny operace manipulací se vzorky a činidly automaticky. Analyzátory systémů Tosoh AIA odečítají míru fluorescence generovanou reakcí a automaticky ji převádějí na koncentraci lidského choriogonadotropinu v miu/ml. U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Další informace týkající se provozu zařízení získáte v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ Kontrola kvality Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje, že se v souladu s místními nařízeními musí analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky. Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je: Po kalibraci je spuštěna třístupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována kalibrační křivka. Tři stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). K ověření celkového výkonnosti analyzátorů systému TOSOH AIA musí být po denní údržbě provedeny nejméně dva stupně kontroly. Je-li jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku(ů) mimo přípustné rozmezí, bude před ohlášením výsledků pacientů nutné prošetřit validitu kalibrační křivky. Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na provoz laboratoře dohlíží. OMEZENÍ Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např. symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.). Pomocí ST AIA-PACK HCG je nejvyšší koncentrace lidského choriogonadotropinu měřitelná ve vzorcích séra nebo heparinizované plazmě bez ředění nebo ve vzorcích moči naředěných 5násobně pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION 400 miu/ml, což odpovídá miu/ml v původních vzorcích moči a nejnižší měřitelná koncentrace ve vzorcích séra nebo heparinizované plazmy bez ředění nebo ve vzorcích moči naředěných 5násobně pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION je 0,5 miu/ml (citlivost testu), což odpovídá 2,5 miu/ml v původních vzorcích moči. Přestože přibližná hodnota nejvyššího kalibračního roztoku je 200 miu/ml, přesná koncentrace se může poněkud lišit. Přestože hemolýza nemá významný vliv na test, mohou hemolyzované vzorky poukazovat na špatné zacházení se vzorkem před analýzou a výsledky je nutno interpretovat opatrně. Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové interferenci. Vzorky pacientů, kteří užívají léky a/nebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné výsledky. Vzorky od pacientů, kterým byly podány přípravky myších monoklonálních protilátek k diagnostice nebo terapii, mohou obsahovat lidské protilátky proti myším (HAMA). Takové vzorky mohou dávat falešně zvýšené hodnoty, pokud jsou testovány na lidský choriogonadotropin. Bylo hlášeno (14,15), že látky podobné hcg se mohou někdy nacházet v krvi zdravých dospělých jedinců, zejména u žen po menopauze a u mužů v pokročilém věku Bylo hlášeno, že koncentrace hcg ve vzorcích sera od netěhotných žen byly menší než 5 miu/ml a, během prvního týdne těhotenství, byla koncentrace hcg 5 až 50 miu/ml(16). I když byl HCG detekován, nemůžete potvrdit těhotenství jen samotným výsledkem. Diagnóza těhotenství by měla být stanovena spolu s dalšími klinickými údaji, jako jsou výsledky ultrazvukového vyšetření. Pro úplnější pochopení omezeních tohoto postupu, si laskavě přečtěte oddíly ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a POZNÁMKY K POSTUPU této příbalové informace. PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY Každá laboratoř by měla stanovit referenční interval, který odpovídá charakteristikám testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky interpretovány s ohledem na léky, které jsou současně podávány pacientovi (13). I. Referenční rozmezí Zde uvedený interval byl stanoven ve vzorcích séra a moči od zjevně zdravých Asiatů. miu/ml (IU/l) n Referenční interval Zdraví muži (sérum) < 0,5 137 Zdravé, netěhotné Ženy (sérum) < 0,5 24 (moč) < 2,5 24 Předpokládané koncentrace hcg v průběhu těhotenství Gestační věk (sérum) 4-7 týdnů týdnů týdnů týdnů (moč) 4-7 týdnů týdnů týdnů týdnů II. Konverzní faktory Koncentrace HCG v této aplikaci jsou vyjádřeny v jednotkách miu/ml. Konverze na jednotky SI soustavy IU/l může být provedena s použitím následující rovnice: IU hcg/l = miu hcg/ml x 1,0 VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY PŘESNOST a.1. Výtěžnost (sérum): Tři vzorky byly označeny třemi rozdílnými hladinami hcg a testovány před a po označení. Vzorek Původní hcg Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota Výtěžnost (miu/ml) (miu/ml) (miu/ml) (miu/ml) (%) Sérum A1 0,00 77,0 77,0 66,6 86,5 0, ,4 0, ,2 Sérum B1 0,00 77,0 77,0 68,8 89,4 0, ,5 0, ,6 8-12

5 Vzorek Původní hcg Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota Výtěžnost (miu/ml) (miu/ml) (miu/ml) (miu/ml) (%) Sérum C1 4,14 77,0 81,1 76,3 94,0 4, ,3 4, ,7 a.2. Výtěžnost (moč): Dva sdružené vzorky moči byly označeny třemi rozdílnými hladinami hcg a testovány před a po označení. Vzorek Původní hcg Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota Výtěžnost (miu/ml) (miu/ml) (miu/ml) (miu/ml) (%) Moč A1 1,19 97,3 98,5 92,8 94,3 1, ,0 1, ,3 Moč B1 1,26 97,3 98,6 99,5 101,0 1, ,0 1, ,3 b.1. Ředění (sérum): Tři vzorky séra obsahující vysoké koncentrace hcg byly sériově naředěny pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány. Vzorek Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota Výtěžnost (miu/ml) (miu/ml) (%) Sérum A2 žádný 358 7,5/ ,9 5,0/ ,5 2,5/10 89,6 89,1 99,5 1,0/10 35,8 36,7 102,4 Sérum B2 žádný 374 7,5/ ,4 5,0/ ,7 2,5/10 93,6 94,5 100,9 1,0/10 37,4 39,6 105,8 Sérum C2 žádný 385 7,5/ ,0 5,0/ ,1 2,5/10 96,1 99,1 103,1 1,0/10 38,5 40,6 105,6 b.2. Ředění (moč): Dva vzorky moči obsahující vysoké koncentrace hcg byly sériově naředěny pomocí AIA-PACK HCG SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány. Vzorek Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota Výtěžnost (miu/ml) (miu/ml) (%) Moč A2 žádný 394 7,5/ ,1 5,0/ ,2 2,5/10 98, ,5 1,0/10 39,4 40,0 101,6 Vzorek Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota Výtěžnost (miu/ml) (miu/ml) (%) Moč B2 žádný 393 7,5/ ,2 5,0/ ,6 2,5/10 98,2 92,6 94,2 1,0/10 39,3 38,5 97,8 PŘESNOST a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí tří kontrolních vzorků v celkem 20 cyklech. V rámci jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (CV). Vzorek Průměr Sdružená směrodatná Variační koeficient (miu/ml) odchylka (miu/ml) (%) Sérum A3 5,20 0,154 3,0 Sérum B ,71 3,5 Sérum C ,03 3,2 b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením tří kontrolních vzorků ve 20 samostatných cyklech. Průměrné hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu sdružené směrodatné odchylky (SD) a variačního koeficientu (CV). Vzorek Průměr Sdružená směrodatná Variační koeficient (miu/ml) odchylka (miu/ml) (%) Sérum A3 5,20 0,163 3,1 Sérum B ,73 3,5 Sérum C ,71 3,1 KORELACE Korelace mezi sérem (x) a heparinizovanou plazmou (y) v ST AIA-PACK HCG byla provedena s použitím 159 pacientských vzorků. Směrnice 0,983 Průsečík s osou y 0,002 Korelační koeficient 0,999 Rozmezí vzorků 0,5 397,6 Počet vzorků 159 SPECIFICITA Zkřížená reaktivita byla testována u následujících látek. Zkřížená reaktivita (%) je procento látky, které bude identifikováno jako hcg. Jsou-li ve vzorku přítomny tyto látky ve stejné koncentraci jako hcg, bude konečný výsledek zvýšen o tato procenta

6 Látka Zkřížená reaktivita (%) hcg 100 Podjednotka β volného hcg 0,04 hfsh 0,06 hlh 0,70 htsh 0,06 SENZITIVITA Minimální detekovatelné koncentrace (MDC) lidského choriogonadotropinu je odhadnuta na 0,5 miu/ml, což odpovídá 2,5 miu/ml v původním vzorku moči (faktor ředění 5). Minimální detekovatelná koncentrace (MDC) je definována jako taková koncentrace hcg, která odpovídá míře fluorescence, jež je dvě směrodatné odchylky od průměrné míry fluorescence 10 opakovaných stanovení pomocí AIA-PACK HCG ZERO CALIBRATOR. INTERFERENCE Interference je v rámci této studie definována jako výtěžnost přesahující 10 % známé koncentrace vzorku po přidání následujících látek k lidským vzorkům. Hemoglobin (až do 390 mg/dl), volný bilirubin (do 17 mg/dl) a konjugovaný bilirubin (do 18 mg/dl) neinterferují s testem. Lipémie indikovaná koncentrací triglyceridů (do 1600 mg/dl) neinterferuje s testem. Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem. Bílkoviny, jak ukazuje koncentrace lidského albuminu (až do 5,0 g/dl), neinterferují s tímto testem. Heparin (do 100 U/ml) neinterferuje s testem. REFERENCE 1. Swaminathan, N., Bahl, O. P., Dissociation and Recombination of the Subunits of Human Chorionic Gonadotropin. Biochem. Biophys. Res. Commun. 40: (1970). 2. Pierce, J. G., Eli Lilly Lecture: The Subunits of Pituitary Thyrotropin -Their Relationship to Other Glycoprotein Hormones. Endocrinology 89: (1971). 3. Pierce, J. G., et al., Biologically Active Hormones Prepared by Recombination of the Alpha Chain of Human Chorionic Gonadotropin and the Hormone-Specific Chain of Bovine Thyrotropin or of Bovine Luteinizing Hormone. J. Biol. Chem. 246: (1971). 4. Reuter, A. M., et al., Serum Concentrations of Human Chorionic Gonadotropin and its Alpha and Beta Subunits. 1. During Normal Singleton and Twin Pregnancies. Clin. Endo. 13: (1980). 5. Braunstein, G. D., et al., Serum Human Chorionic Gonadotropin Levels Throughout Normal Pregnancy. Am. J. Obstet. Gynecol. 126: (1976). 6. Krieg, A. F., Pregnancy Tests and Evaluation of Placental Function In: Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 16th ed., Henry J. B. (ed) W. B. Saunders Co., Philadelphia p (1979). 7. Brody, S., Carlstrom, G., Immunoassay of Human Chorionic Gonadotropin in Normal and Pathologic Pregnancy. J. Clin. Endocrinol. Metab. 22: (1962). 8. Batzer, F., Hormonal Evaluation of Early Pregnancy. Fertility and Sterility 34, 1-11 (1980). 9. Braunstein, G. D., First-trimester Chorionic Gonadotropin Measurements as an Aid in the Diagnosis of Early Pregnancy Disorders. Am. J. Obst. Gynec. 131: (1978). 10. DiPietro, D. L., Ectopic Pregnancy: Interpreting HCG Levels. Laboratory Management 19:11 (1981). 11. Kosasa, T. S., Measurement of Human Chorionic Gonadotropin. J. Reprod. Med. 26: (1981). 12. Lenton, E., et al., Plasma Concentrations of Human Chorionic Gonadotropin From the Time of Implantation Until Second Week of Pregnancy. Fertility and Sterility 37: (1982). 13. Young, D., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 3rd Edition, Washington, DC, American Association for Clinical Chemistry Press (1990) Hartree, A. S., Shownkeen, R. C., Stevens, V. C., et al., Studies of the human chorionic gonadotropin-like substance of human pituitary glands and its significance., J. Endocrinol., 96: (1983). 15. Stenman, U-H, Alfthan, H., Ranta,T., et al., Serum levels of human chorionic gonadotropin in nonpregnant women and men are modulated by gonadotropin-releasing hormone and sex steroids., J. Clin.Endocrinol. Met., 64: (1987). 16. Tietz, N. W., Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd Ed. p (1995). TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba, Minato-ku TOKYO (JAPONSKO) Tel.: +81 (0) Fax: +81 (0) TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO BELGIE Tel.: +32 (0) Fax: +32 (0) TOSOH BIOSCIENCE, INC Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: Objem netto (po rekonstituci pro lyofilizovaný materiál) 12-12