06656021 190 100 Pro USA: Stanovení Elecsys Česky Použití Imunologický test pro in vitro kvantitativní stanovení estradiolu v lidském séru a plazmě. Elektrochemiluminiscenční imunostanovení ECLIA je určeno pro použití na analyzátorech imunostanovení Elecsys a cobas e. Souhrn Estrogeny jsou odpovědné za vývoj ženských sekundárních pohlavních znaků. Spolu s gestageny řídí všechny důležité ženské reprodukční procesy. Biologicky nejaktivnějším estrogenem je 17β estradiol. Jedná se o steroidní hormon s molekulovou hmotností 272 daltonů. Estrogeny jsou primárně produkovány v ovariích (folikuly, corpus luteum), ale malé množství je rovněž vytvářeno ve varlatech a kůře nadledvinek. Během těhotenství jsou estrogeny produkovány především placentou. Přibližně 98 estradiolu je vázáno na transportní proteiny (SHBG = pohlavní hormon vážící globulin). 1 Vylučování estrogenů při menstruačním cyklu probíhá ve 2 fázích. Stanovení estradiolu se využívá klinicky k objasnění poruch fertility na ose hypothalamus hypofýza gonády, při detekci gynekomastie, estrogeny produkujících ovariálních a testikulárních tumorů a hyperplasie kůry nadledvin. Další klinickou indikací je monitorování průběhu léčení neplodnosti a určení termínu ovulace pro in vitro oplodnění (IVF). 2,3,4 Stanovení Elecsys využívá princip kompetice použitím 2 monoklonálních protilátek specificky směřovaných proti 17β estradiolu. Endogenní estradiol obsažený ve vzorku a uvolněný metrelonem soutěží s přidaným derivátem estradiolu, značeným rutheniovým komplexem a) o vazebná místa biotinylované protilátky. a) Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium(II)-komplex (Ru(bpy) ) Princip testu Princip kompetice. Celková doba stanovení: 18 minut. 1. inkubace: Při inkubaci vzorku (25 µl) 2 biotinylovanými protilátkami specifickými proti estradiolu se vytváří imunokomplexy, jejichž množství je závislé na koncentraci analytu ve vzorku. 2. inkubace: Po přidání streptavidinem potažených mikročástic a derivátu estradiolu, značeného rutheniovým komplexem, jsou obsazena dosud volná místa biotinylované protilátky a je vytvářen komplex protilátka hapten. Celý komplex se váže na pevnou fázi prostřednictvím interakce mezi biotinem a streptavidinem. Reakční směs je nasáta do měřící cely, kde jsou mikročástice s navázanými komplexy zachyceny prostřednictvím magnetu. Nenavázané složky jsou odstraněny roztokem ProCell/ProCell M. Přivedené napětí na pracovní elektrodě vyvolá chemiluminiscenční emisi fotonů, která je změřena fotonásobičem. Výsledky jsou zjištěny z kalibrační křivky, která je specificky vytvořena pro přístroj dvoubodovou kalibrací, a master křivky, která se do přístroje načte z čárového kódu reagencie. Reagencie - pracovní roztoky Reagenční rackpack je označen jako E2 III. M Mikročástice potažené streptavidinem (průhledné víčko), 1 nádobka, 6.5 ml: Streptavidinem potažené mikročástice, 0.72 mg/ml; konzervans. R1 R2 Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Anti estradiol Ab~biotin (šedé víčko), 1 nádobka, 9 ml: Dvě biotinylované monoklonální protilátky proti estradiolu (králičí) 2.5 ng/ml a 4.5 ng/ml; mesterolon 130 ng/ml; MES b) pufr 50 mmol/l, ph 6.0; konzervans. Estradiol peptid~ru(bpy) (černé víčko), 1 nádobka, 9 ml: Derivát estradiolu, značený rutheniovým komplexem 4.5 ng/ml; MES pufr 50 mmol/l, ph 6.0; konzervans. b) MES = 2-morfolino etansulfonová kyselina Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Pro USA: Pouze na předpis. U všech reagencií a druhů vzorků (vzorky, kalibrátory a kontroly) zabraňte vytvoření pěny. Zacházení s reagenciemi Reagencie v soupravě jsou sestaveny tak, že tvoří komplet připravený k použití a nemohou být odděleny. Všechny informace, potřebné pro správnou činnost, jsou načteny z příslušného čárového kódu reagencie. Uskladnění a stabilita Skladujte při 2 8 C. Nemrazit. Reagenční soupravu Elecsys skladujte ve vzpřímené poloze, aby byla zajištěna dostupnost všech mikročástic během automatického míchání před použitím. Stabilita: neotevřené při 2 8 C po otevření při 2 8 C v analyzátorech do uvedeného data exspirace 12 týdnů 8 týdnů Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné. Sérum odebrané standardní odběrovou soupravou nebo pomocí zkumavek se separačním gelem. Li heparinovaná, K 2 EDTA a K 3 EDTA plazma, jakož i zkumavky pro separaci plazmy. Kritérium: Sklon 0.9 1.1 + úsek na ose v rámci < ± 10 + korelační koeficient 0.95. Pro výtěžnost jednotlivých vzorků v rámci 70 130 hodnoty séra > 100, výtěžnost ± 20 hodnoty séra 100. Stabilní 12 hodin při 20 25 C, 2 dny při 2 8 C, 6 měsíců při -20 C. Zmrazit jen jednou. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn., že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech zásadní vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. 1 / 5
Vzorky obsahující precipitáty a zmrazené vzorky centrifugujte před provedením stanovení. Nepoužívejte teplem inaktivované vzorky. Nepoužívejte vzorky a kontroly stabilizované azidem. Před měřením zajistěte, aby vzorky, kalibrátory a kontroly měly teplotu 20 25 C. Vzhledem k možnému odparu roztoků by měly být vzorky, kalibrátory a kontroly v analyzátoru analyzovány/stanoveny do 2 hodin. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) 06656048190, CalSet, pro 4 x 1 ml 11731416190, PreciControl Universal, pro 2 x 3 ml každého z PreciControl Universal 1 a 2 11731416160, PreciControl Universal, pro 2 x 3 ml každého z PreciControl Universal 1 a 2 (pro USA) 03609987190, Diluent MultiAssay, 2 x 16 ml diluent vzorku Celkové vybavení laboratoře Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E170 nebo analyzátor cobas e Příslušenství pro analyzátory Elecsys 2010 a analyzátory cobas e 411: 11662988122, ProCell, 6 x 380 ml systémový pufr 11662970122, CleanCell, 6 x 380 ml čistící roztok pro měřící celu 11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 ml promývací přísada 11933159001, Adapter for SysClean 11706802001, Elecsys 2010 Assay Cup, 60 x 60 reakčních nádobek 11706799001, Elecsys 2010 Assay Tip, 30 x 120 pipetovacích špiček Příslušenství pro analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602: 04880340190, ProCell M, 2 x 2 L systémový pufr 04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L čistící roztok pro měřící celu 03023141001, PC/CC Cups, 12 kalíšků pro předehřátí ProCell M a CleanCell M před užitím 03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 ml čistícího roztoku pro finalizaci a mytí během změny reagencií 03004899190, PreClean M, 5 x 600 ml systémový čistící roztok 12102137001, AssayCup/AssayTip Combimagazine M, 48 palet x 84 reak. nádobek nebo pipet. špiček, odpadní vaky 03023150001, WasteLiner, odpadní vaky 03027651001, SysClean Adapter M Příslušenství pro všechny analyzátory: 11298500316, ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml systémový čistící roztok 11298500160, ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml systémový čistící roztok (pro USA) Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Promíchání mikročástic před použitím proběhne automaticky. Načtěte specifické parametry pro test z čárového kódu reagencie. Ve výjimečných případech, kdy čárový kód nemůže být načten, zadejte 15místnou sekvenci čísel. Analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602: Je vyžadován roztok PreClean M. Vytemperujte chlazené reagencie na přibl. 20 C a umístěte je do reagenčního kotouče (20 C) analyzátoru. Zabraňte tvorbě pěny. Systém automaticky reguluje teplotu reagencií a otvírá a zavírá nádobky. Kalibrace Návaznost: Tato metoda byla standardizovaná dle CRM 6004a pomocí ID GC/MS (plynová chromatografie s hmotnostní spektrometrií a s izotopovým zřeďováním). 5 Každá reagenční souprava Elecsys je opatřena štítkem s čárovým kódem obsahujícím specifické informace pro kalibraci dané šarže reagencií. Předdefinovaná master křivka je uzpůsobena pro analyzátor pomocí příslušného CalSet. Frekvence kalibrace: Kalibrace musí být provedena jednou pro celou šarži reagencií novými reagenciemi (tj. ne více než 24 hodin od registrace reagenční soupravy v analyzátoru). Obnovení kalibrace je doporučeno: po 1 měsíci (28 dní) při používání stejné šarže reagencií po 7 dnech (při používání stejné reagenční soupravy v analyzátoru) dle potřeby: např. výsledky kontroly kvality jsou mimo definované rozmezí Kontrola kvality Pro kontrolu kvality používejte PreciControl Universal. Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontroly pro rozdílné koncentrační rozmezí by měly být jednotlivě stanoveny nejméně jednou za 24 hodin při používání testu, alespoň 1x na soupravu reagencií a po každé kalibraci. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátor automaticky počítá koncentraci analytu pro každý vzorek (buď v,, ng/l nebo navíc v nmol/l u analyzátorů MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602). Převodní faktory: x 0.272 = (ng/l) x 3.67 = x 0.00367 = nmol/l Omezení - interference Stanovení není ovlivněno ikterem (bilirubin 1129 µmol/l nebo 66 mg/dl), hemolýzou (Hb 0.621 mmol/l nebo 1.0 g/dl), lipémií (Intralipid 1000 mg/dl) a biotinem ( 147 nmol/l nebo 36 ng/ml). Kritérium: Výtěžnost v rámci ± 10 počáteční hodnoty. Vzorky by neměly být odebrány pacientům podstupujícím léčbu s vysokými dávkami biotinu (tj. > 5 mg/den) po dobu nejméně 8 hodin od podání poslední dávky biotinu. U revmatoidních faktorů nebyla interference pozorována do koncentrace 1200 IU/mL. In vitro testy byly prováděny na 17 běžně užívaných lécích. Nebyla zjištěna žádná interference. Chybné výsledky mohou být zaznamenány u pacientů, kteří se dostali do styku s vakcínou, obsahující sérum králíka nebo chovají králíka jako domácího mazlíčka. Ve vzácných případech je možné pozorovat interferenci způsobenou velmi vysokým titrem protilátek proti test specifickým protilátkám, streptavidinu nebo rutheniu. Tyto účinky jsou minimalizovány vhodným navržením testu. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. Meze a rozmezí Měřící rozsah 18.4 11010 (5 3000 ) (definováno mezí detekce a maximem master křivky). Hodnoty pod mezí detekce jsou vykazovány jako < 18.4 nebo < 5. Hodnoty nad měřícím rozsahem jsou vykazovány jako > 11010 nebo > 3000 (nebo až 110100 nebo 30000 při 10násobném ředění vzorku). Dolní meze měření Mez blanku (LoB), mez detekce (LoD) a mez stanovitelnosti (LoQ) Mez blanku = 11 (3 ) 2 / 5
Mez detekce = 18.4 (5 ) Mez stanovitelnosti = 91.8 (25 ) s celkovou přípustnou chybou 30 Pro LoQ byla provedena studie použitím vzorků lidských sér naředěných a měřených v 6 sériích po dobu 3 dnů na 2 analyzátorech. Při celkové přípustné chybě 30 byla LoQ 61.3 (16.7 ). Mez blanku, mez detekce a mez stanovitelnosti byly měřeny v souladu s požadavky CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) EP17 A. Mez blanku je hodnotou 95. percentilu z n 60 měření vzorku bez obsahu analytu v průběhu několika nezávislých sérií. Mez blanku odpovídá koncentraci, pod kterou jsou vzorky bez analytu zjištěny s pravděpodobností 95. Mez detekce se měří na základě meze blanku a standardní odchylky vzorků s nízkou koncentrací. Mez detekce odpovídá nejnižší koncentraci analytu, kterou lze detekovat (hodnota nad mezí blanku s pravděpodobností 95 ). Mez stanovitelnosti je definovaná jako nejnižší množství analytu ve vzorku, které lze přesně kvantifikovat s celkovou přípustnou chybou 30. Ředění Vzorky s koncentrací estradiolu nad měřícím rozsahem lze ředit s Diluent MultiAssay. Doporučený poměr ředění je 1:10 (automaticky analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 nebo cobas e). Koncentrace ředěného vzorku musí být > 881 (> 240 ). Po naředění analyzátorem software MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 a cobas e automaticky počítá s ředěním při výpočtu koncentrace vzorku. Endogenní koncentrace analytu v diluentu (< 220 nebo < 60.0 ) není zahrnuta do výpočtu ředění vzorků nad měřícím rozsahem. Očekávané hodnoty Referenční rozmezí bylo zjišťováno v bělošské populaci. (90 CI*) Zdraví muži 146 94.8 Zdravé ženy (57.0-97.5) Folikulární fáze 146 45.4 (22.8-61.2) Ovulační fáze 150 151 (105-158) Luteální fáze 151 81.9 (28.2-127) Po menopauze 142 < 18.4 Zdravé těhotné ženy (< 18.4-< 18.4) 1. trimestr 136 563 (467-636) 2. trimestr 140 5729 (4173-7457) 3. trimestr 136 31287 * CI = interval spolehlivosti (27151-34175) (90 CI) Zdraví muži 146 25.8 Zdravé ženy (15.5-26.5) (90 CI) 133 (129-135) 196 (183-213) 462 (416-533) 370 (335-419) <18.4 (< 18.4-19.2) 3133 (2703-4004) 28402 (24207-32090) 64684 (62353-68189) (90 CI) 36.1 (35.3-36.7) (90 CI) 223 (194-232) 854 (633-1154) 1461 (1162-1925) 1251 (1077-2759) 505 (189-1150) 11902 (9891-15271) 78098 (69143-92227) > 110100 (107164-> 110100) (90 CI) 60.7 (52.9-63.3) (90 CI) Folikulární fáze 146 12.4 (6.2-16.7) Ovulační fáze 150 41.0 (28.6-43.2) Luteální fáze 151 22.3 (7.69-34.6) Po menopauze 142 < 5 Zdravé těhotné ženy (< 5-< 5) 1. trimestr 136 154 (127-173) 2. trimestr 140 1561 (1137-2032) 3. trimestr 136 8525 (7398-9312) (90 CI) 53.4 (49.8-58.1) 126 (113-145) 101 (91.2-114) <5 (< 5-5.24) 854 (737-1091) 7739 (6596-8744) 17625 (16990-18580) (90 CI) 233 (173-315) 398 (317-525) 341 (294-752) 138 (51.6-314) 3243 (2695-4161) 21280 (18840-25130) > 30000 (29200-> 30000) Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena použitím reagencií Elecsys, vzorků a kontrol podle protokolu (EP5 A2) CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 2 série denně v duplikátech každý pro 21 dní (n = 84). Byly získány následující výsledky: Analyzátory Elecsys 2010 a cobas e 411 Lidské sérum 1 93.3 7.91 8.5 11.1 11.9 Lidské sérum 2 166 7.75 4.7 11.4 6.8 Lidské sérum 3 605 18.8 3.1 20.4 3.4 Lidské sérum 4 5021 97.7 1.9 125 2.5 Lidské sérum 5 10760 253 2.4 297 2.8 PC U c) 1 316 11.0 3.5 14.1 4.5 PC U2 1514 47.8 3.2 53.7 3.5 c) PC U = PreciControl Universal Analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602 Lidské sérum 1 101 6.79 6.7 10.6 10.6 Lidské sérum 2 173 6.46 3.7 9.8 5.7 Lidské sérum 3 584 9.62 1.6 14.4 2.5 Lidské sérum 4 4661 53.2 1.1 86.2 1.9 Lidské sérum 5 9982 189 1.9 295 3.0 PC U1 329 7.82 2.4 12.4 3.8 PC U2 1497 18.0 1.2 30.8 2.1 3 / 5
Analyzátory Elecsys 2010 a cobas e 411 Lidské sérum 1 25.4 2.16 8.5 3.03 11.9 Lidské sérum 2 45.3 2.11 4.7 3.10 6.8 Lidské sérum 3 165 5.14 3.1 5.55 3.4 Lidské sérum 4 1368 26.6 1.9 34.1 2.5 Lidské sérum 5 2932 68.9 2.4 80.9 2.8 PC U1 86.1 2.99 3.5 3.83 4.5 PC U2 413 13.0 3.2 14.6 3.5 Analyzátory MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 a cobas e 602 Lidské sérum 1 27.4 1.85 6.7 2.90 10.6 Lidské sérum 2 47.1 1.76 3.7 2.67 5.7 Lidské sérum 3 159 2.62 1.6 3.92 2.5 Lidské sérum 4 1270 14.5 1.1 23.5 1.9 Lidské sérum 5 2720 51.5 1.9 80.5 3.0 PC U1 89.6 2.13 2.4 3.37 3.8 PC U2 408 4.91 1.2 8.39 2.1 Porovnání metod Porovnání stanovení Elecsys (y) s ID GC/MS (x), použitím klinických vzorků, poskytlo následující korelace (): Počet naměřených vzorků: 25 Passing/Bablok 6 Lineární regrese y = 0.993x + 1.26 y = 1.00x + 2.07 τ = 0.987 r = 0.999 Koncentrace vzorků byly v rozmezí 37.4 až 10768 (10.2 až 2934 ) (koncentrace ID GC MS). Analytická specifičnost Pro stanovení byla zjištěna následující křížová reaktivita (v ): a) Látka přidána v koncentraci 0.001 μg/ml: 6-alfa-hydroxy-Estradiol 74.1 b) Látka přidána v koncentraci 0.01 μg/ml: 4-hydroxyestradiol 0.754 c) Látka přidána v koncentraci 0.1 μg/ml: Aldosteron 0.005 Androstendion 0.005 Equilin 0.057 Estriol 0.233 Estron 0.757 Estron 3β glukuronid 0.003 Estron 3 sulfát 0.002 Ethisteron 0.002 Norethindron acetát n. d. d) Pregnenolon 0.007 Progesteron 0.004 2 Metoxyestradiol 0.121 17β Estradiol 3,17 sulfát 0.002 17β Estradiol 3 β D glukuronid 0.008 17β Estradiol 17 β D glukuronid 0.001 17β Estradiol 3 glukuronid 17 sulfát n. d. 17β Estradiol 3 sulfát 17 glukuronid 0.004 17β Estradiol 3 sulfát 0.009 17β Estradiol 17 valerat 0.163 17β Estradiol 17 sulfát 0.003 2 Hydroxyestradiol 0.045 17-Hydroxyprogesteron n. d. d) n. d. = nedetekovatelné d) Látka přidána v koncentraci 0.2 μg/ml: 17 α Ethinylestradiol 0.334 Kortisol 0.003 Kortison 0.001 Tamoxifen 0.001 e) Látka přidána v koncentraci 0.25 μg/ml: Chlomifen 0.001 f) Látka přidána v koncentraci 1.0 μg/ml: Prednisolon n. d. g) Látka přidána v koncentraci 10 μg/ml: Danazol 0.001 DHEA S n. d. Mesterolon n. d. Testosteron n. d. 5 α Dihydrotestosteron (DHT) n. d. 5 Androsten 3β,17β diol n. d. Odkazy 1 Iqbal MJ, Dalton M, Sawers RS. Binding of testosterone and oestradiol to sex hormone binding globulin, human serum albumin and other plasma proteins: evidence for non-specific binding of oestradiol to sex hormone binding globulin. Clin Science 1983;64:307-314. 2 Johnson MR, Carter G, Grint C, et al. Relationship between ovarian steroids, gonadotropin and relaxin during the menstrual cycle. Acta Endocrinol 1993;129/2:121-125. 3 Lichtenberg V, Schulte-Baukloh A, Lindner Ch, et al. Discrepancies between results of serum 17β-Oestradiol E2 determinations carried out using different immunoassay kits in women receiving oestrogen replacement therapy. Lab med 1992;16:412-416. 4 Kronenberg HM, Melmed S, Polonsky KS, et al: Williams Textbook of Endocrinology. Saunders Elsevier 2008; Edition 11. ISBN 9781416029113. 5 Thienpont LM, Verhseghe PG, Van Brussel KA, et al. Estradiol-17-beta quantified in serum by isotope dilution-gas chromatography-mass spectrometry. Clin Chem 1988(34);10:2066-2069. 6 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790. Pro více informací čtěte prosím příslušný návod k použití daného analyzátoru, jednotlivé aplikační listy, informace o produktu a metodické listy všech potřebných komponent (jsou-li dostupné ve Vaší zemi). 4 / 5
Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá následující symboly a znaky, včetně uvedených v normě ISO 15223 1. GTIN Obsah soupravy Analyzátory/přístroje, na kterých lze reagencie použít Reagencie Kalibrátor Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Doplnění, odstranění nebo změny textu jsou označeny pruhem podél textu. 2015, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com Distribuce v USA: Roche Diagnostics, Indianpolis, IN Zákaznická podpora v 1-800-428-2336 5 / 5