Papillomaviry a HPV typizace (nejen) v roce 2015

Transkript

1 Papillomaviry a HPV typizace (nejen) v roce 2015 D. Konvalinka, J. Mazurová, I. Urbanovská, R. Měch, B. Kubová, J. Šimová, M. Uvírová, J. Dvořáčková CGB laboratoř a.s., Ostrava Aktuální otázky gynekologické cytologie, Praha,

2 evolučně stará a rozsáhlá skupina virů > 200 PV Papillomaviry (PV) nalezeny u lidí, dalších savců, ptáků, plazů klasifikace na základě podobnosti (homologie) ORF sekvence L1 genu v genomu PV 29 rodů (homologie ORF L1: 60%) druhy (60-70%) typy (71-89%)

3 Papillomaviry (PV, pokračování)

4 Lidské papillomaviry (Human Papillomaviruses, HPV) více než 130 typů HPV 5 rodů (α, β, γ, μ, ν) druhově specifické striktně epiteliotropní tkáňově specifické typy kožní a slizniční

5 HPV (pokračování) nízce rizikové typy (low risk, LR) HPV: 6, 11, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81 vysoce rizikové typy (high risk, HR) HPV: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 (73, 82)

6 www: openi.nlm.nih.gov α, β, γ, μ, ν papillomaviry

7 Leden 2015: HPV: 5 rodů 49 druhů 202 typů

8 μ ν

9 HPV typy a asociované tumory

10 představy : Jak HPV vypadá?

11 Skutečný vzhled:

12 Lidský papillomavirus typ 16, kompletní genom (7904 bp)

13 HPV infekce nejběžnější virová STI incidence: cca 6 *10 6 /rok prevalence: cca 20 *10 6 celoživotní riziko: % clearance: 70% po 1 roce, 90% po 2 letech

14 Infekce HPV v epitelu infekce kožního epitelu diferenciace buněk na keratinocyty; virový genom v epizomální formě infekce slizničního epitelu vývoj lézí; možná integrace genomu HPV do buněčného genomu

15 HPV replikace: Lowy D.R. et Schiller J.T.: Prophylactic human papillomavirus vaccines, J.Clin.Invest. 116: (2006)

16 Interakce E6 p53 E 6 protein

17 Interakce E7 prb E 7 protein

18 HPV a nádory I Skupina LR HPV benigní nádory: 1. verruca plana, v. plantaris, v. vulgaris ruce a nohy (chodidla) 2. condylomata accuminata vulva, vagina, cervix, penis, anální oblast; 3. epiglotis a hlasivky rekurentní (laryngeální) papilomatóza 4. fokální epiteliální hyperplázie dutina ústní

19 HPV a nádory II Skupina HR HPV Skvamocelulární ca (80 90 %) hrdlo děložní, vulva, vagina, anus, penis oropharynx (mandle, báze jazyka), jícen adenokarcinom (10 20 %) nejagresivnější HPV 18

20 HPV a nádory III IARC a WHO označily HPV za karcinogeny HR HPV (HR typy 16 a 18) jsou původcem: 25 % nádorů hlavy a krku > 50 % nádorů vulvy a vaginy cca 90 % nádorů anální oblasti a > 70 % karcinomů děložního hrdla Muńoz et al, N. Engl. J. Med. 2003;348: Bernard H.U. et al, IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans; vol 64

21 HPV a nádory IV DNA lidských papillomavirů byla nalezena téměř u všech karcinomů (85 99,7 %) a jim předcházejících lézí děložního hrdla

22 Karcinom děložního hrdla (cervikální karcinom, CxCa) 2. nejčastější nádorové onemocnění u žen (ihned po nádorech prsu) v EU (věk. skupina let) případů ročně / úmrtí na CxCa v Evropě časná stádia jsou většinou asymptomatická klinické projevy se objevují u pokročilých stádií cíl: detekce preinvazivních stádií časná detekce: 5-leté přežívání > 90%

23 Karcinogeneze skin to skin přenos (sexuální / genitální kontakt) 70% clearance po 1 roce, 90% po 2 letech od inf. perzistence: predikuje CIN3+ progrese invaze Lowy D.R. et Schiller J.T.: Prophylactic human papillomavirus vaccines, J.Clin.Invest. 116: (2006)

24 Lowy D.R. et Schiller J.T.: Prophylactic human papillomavirus vaccines, J.Clin.Invest. 116: (2006)

25 Incidence a mortalita na ZN děložního hrdla v ČR

26 Zastoupení klinických stádií CxCa

27 1 Srbsko a Černá Hora Dánsko Rumunsko Ruská federace Bosna a Hercegovina Rakousko Albánie Německo Polsko Francie Bulharsko Norsko Slovensko Belgie Litva Itálie Lotyšsko Švýcarsko Česká Republika 22,1 10 Česká republika Lucembursko Moldavsko Švédsko Estonsko Řecko Slovinsko Velká Británie Maďarsko Španělsko Bělorusko Nizozemsko Ukrajina Island Portugalsko Irsko Chorvatsko Malta Makedonie Finsko 6.2 Zdroj dat: GLOBOCAN 2002 C53 - Hrdlo děložní cervix uteri, ženy srovnání incidence v ČR s ostatními zeměmi Evropy, přepočet na osob 38 Finsko 6,2

28 Globocan 2008: incidence CxCa ČR: 11. místo; 18,9 / osob Finsko: 40. místo; 5,6 / osob

29 Globocan 2012: incidence / mortalita CxCa Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, Dikshit R, Eser S, Mathers C, Rebelo M, Parkin DM, Forman D, Bray, F. GLOBOCAN 2012 v1.0, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11 [Internet]. Lyon, France: International Agency for Research on Cancer; Available from: accessed on day/month/year.

30 Screening CxCa Pap test identifikuje dysplázie / prekancerózy / CxCa specificita / sensitivita HPV test identifikuje ženy v riziku negativní prediktivní hodnota (CIN, CxCa) reproducibilita Kombinovaný přístup co-testing spolu s cytologií ( 30 let) ASCUS-triage: sledovací interval ( 21 let) Am J Clin Pathol 2012; 137:516

31 2012: Cervical Screening Guidelines

32 Hlavní body: žádný každoroční screening Věk: < 21 let: bez screeningu let: cytologie 1x 3 roky let: co-testing 1x 5 let nebo cytologie 1x 3 roky > 65 let: bez CIN2+ během posledních 20 let = STOP > 65 let: CIN2+ během posledních 20 let = rutinní scr. nejméně dalších 20 let

33 Zdůvodění intervalu pro co-testing: cytologie 1x rok co-testing 1x 5 let BMJ 2008;377:a1754

34 Situace v ČR? Vyhláška č. 70/2012 Sb., 7 obsah a časové rozmezí gynekologické preventivní prohlídky v oboru gynekologie a porodnictví 1x ročně, zpravidla po 11 měsících: a) k) f) odběr materiálu z děložního čípku k cytologickému, případně bakteriologickému nebo virologickému vyšetření; neprovádí se u virgo žen, Vyšetření přítomnosti NK HR HPV v cervikálním stěru pro screening ca děložního hrdla - u žen se sporným cytologickým nálezem (odhad: cca 4 % všech klientek ve screeningu)

35 Jak zjistit přítomnost původce těchto nádorových onemocnění lidských papillomavirů v lidském organismu?

36 Metody detekce HPV NEPŘÍMÉ - kolposkopie, cytologie, histologie a metody sérologické PŘÍMÉ - elektronmikroskopické, imunohistochemické a metody molekulárně biologické

37 Nepřímý průkaz cytologické potvrzení HPV infekce (v Pap nátěru)

38 Přímý průkaz elektronová mikroskopie

39 Molekulárně biologické metody pro detekci HPV DNA Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test (Qiagen) - přímá hybridizace HPV DNA s RNA sondou cobas 4800 HPV Test (Roche) - izolace DNA a následná real-time PCR; HPV16, HPV18 Cervista HPV HR (Hologic) - Invader; HPV16, HPV18 APTIMA HPV Assay (Gen-Probe / Hologic) - TMA

40 Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test (Qiagen) určení HPV pozitivity (HR) nebo HPV negativity přímá hybridizace virové DNA s RNA sondou, užití protilátek, chemiluminiscenční detekce amplifikace signálu 13 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 bez izolace DNA bez amplifikace virové DNA bez interní kontroly (pouze kalibrátory)

41 cobas 4800 HPV Test (Roche) specifická detekce HPV 16 a HPV 18 izolace virové DNA z odebraného vzorku v transportním médiu, real time PCR výhoda: možnost genotypizace, tj. stanovení přítomnosti konkrétního typu HR HPV 16 a HR HPV 18 (kromě ostatních HR HPV) 14 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 amplifikace virové DNA interní kontrola (lidský β-globin)

42 Cervista HPV HR (Hologic) určení HPV pozitivity (HR) nebo HPV negativity INVADER technologie, hybridizace virové DNA s FRET sondou amplifikace signálu 14 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 izolace DNA bez amplifikace virové DNA interní kontrola (lidský HIST2H2BE)

43 APTIMA HPV Assay detekce mrna E6 a E7 virových onkogenů (detekce exprese) plně automatická izolace a detekce virové mrna z odebraného vzorku v transportním médiu stanovení exprese virových onkogenů E6 a E7, tj. jejich integrace do genomu hostitelské buňky = riziko maligní transformace buňky 14 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 interní kontrola amplifikace cílové RNA RUO assay: HPV 16 vs. HPV 18/45

44 Vakcinace Silgard vakcína proti vysoce rizikovým typům HPV 16, 18 a nízce rizikovým typům HPV 6, 11 ženy ve věku 9-26 let, k prevenci CxCa, prekanceróz a genitálních bradavic muži ve věku 9-26 let, k prevenci genitálních bradavic Cervarix vakcína proti vysoce rizikovým typům HPV 16, 18 ženy ve věku let, k prevenci CxCa a prekanceróz není schválená pro použití u mužů k prevenci genitálních bradavic

45 Prosinec 2014:

46 Gardasil 9 vakcína proti typům vysoce rizikovým typům HPV 16, 18, 31, 33, 45, 52, 58 a nízce rizikovým typům HPV 6, 11 ženy ve věku 9-26 let, k prevenci CxCa, vaginálního, vulvárního a análního ca, prekanceróz a genitálních bradavic muži ve věku 9-15 let, k prevenci análního ca, prekanceróz a genitálních bradavic

47 Závěrem: Detekce HPV a jeho vysoce rizikových genotypů NENÍ soupeřem cytologického vyšetření. Dle názorů expertů a současných poznatků k sobě patří a vzájemně se doplňují.

48 Děkuji za pozornost