T regulačné lymfocyty v gravidite a ich význam v klinickej praxi

Transkript

1 Miroslav Hinďoš, Helena Kopřivová, Karin Malíčková Klinická imunologie a alergologie laboratoř, Ústav lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky Všeobecná fakultní nemocnice a 1. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze T regulačné lymfocyty v gravidite a ich význam v klinickej praxi

2 T regulačné bunky jedna z populácií CD4+ CD25+CD127dim/low konvenčný TCR tolerogénne pôsobenie o o o tolerancia voči vlastnému telu zabraňujú vzniku autoimunitných chorôb tolerancia k antigénom črevnej flóry orálna tolerancia aktívnaimunitnátoleranciaplodu inhibícia produkcie cytokínov CD4+ a CD8+ inhibícia proliferácie a produkcie protilátek u B lymfocytov inhibícia cytotoxického pôsobenia NK buniek Inhibícia maturácie a diferenciácie makrofágov a dendritických buniek v periferní krvi 5 až 10% z CD4+

3 Mechanismus suprese Treg Existují čtyři základní mechanismi suprese efektorvých T lymfocytů 1. Suprese cytolýzou K likvidaci cytolýzou používají granzym A aperforin komplex TRAIL/DR5 (apoptózu indukující ligand spojený s tumor nekrotizujícím) 2. Suprese cytokiny IL 10, TGF beta, IL Suprese metabolickým rozvratem Kompetice o interleukin 2 je nezbytný pro přežití efektorových T lymfocytů bez něj apoptóza Adenosin po navázání na svůj receptor A 2A R na povrchu efektorových T lymfocytů způsobuje výrazné snížení citlivosti na antigenní stimulaci inhibuje produkci interleukinu 6, který působí inhibičně na regulační T lymfocyty podporuje produkci TGF ß, který naopak působí na regulační T lymfocyty stimulačně Cyklický adenosinmonofosfát (camp) V regulačních T lymfocytech byly zjištěny vysoké koncentrace tohoto druhého posla (nezbytného pro intracelulární přenos signálu) vyznačuje inhibicí proliferace T lymfocytu a jejich syntézy IL 2 mezi regulačními a efektorovými buňkami prenášen pouze přímým kontaktem a to konkrétně za využití nexů 4. Suprese modulací funkce dendritických buněk ke kontrole dendritických buněk využívají povrchový CTLA4 (CD152) Ten interaguje s molekulami CD80 a CD86 na povrchu dendritických buněk Tímto kontaktem dochází k expresi indolamin 2,3 dioxygenázy (IDO) IDO iniciuje katabolické reakce tryptofanu tím ho z prostředí vyčerpává a důsledkem je suprese efektorových T lymfocytů

4 Suprese cytokiny IL 10 IL 10 Významný protizánětlivý cytokin působící převážně ve tkáních Treg nemusí být jediným producentem IL 10, ale je vyžadován pro jejich správnou funkci a udržení regulačních vlastností Zdrojem mohou být tako gama/delta T lyfomcyty (hojně zastoupené v deciduu )

5 Suprese cytokiny TGF beta TGF beta Transformující růstový faktor beta Zdrojem mohou být tako gama/delta T lyfomcyty Odpovědný za inhibici aktivace lymfocytů Je schopen inhibova Th1 imunitní odpověď Nezbytný pro vývoj itreg Může být i vázaný na povrchu Tregů tím jim propůjčuje schopnost suprese přímým kontaktem Snížená hladina TGF beta během těhotenství může naznačovat PE inhibitorem TGF beta je rozpustný endoglín

6 Suprese cytokiny IL35 IL35 IL 35 je produkován dvěma geny, z nihž jeden je pod kontrolou FOXP3 Snížené hodnoty IL 35 mají negativní vliv na regulační schopnosti Treg

7 T regulačné bunky Th1 IL 10, kontakt (CTLA 4) Tr1 Th17 itreg Tr1 like CD4 Treg ntreg Th3 Th2 IL 10, TGF β, kontakt (CTLA 4) TGFβ

8 T regulačné bunky CD4; CD25; FoxP3 Tr1 *IL 10 CD4+ Treg itreg Tr1 like Th3 *TGFβ ntreg CD4; CD25; FoxP3; Helios aktivačné a maturačné znaky

9 Th1/Th2/Th17/Treg paradigma

10 Subpopulácie lymfocytov vo fyziologickej gravidite Th1 Th2 Th17 Treg periférna krv maternica v patologickej gravidite periférna krv maternica Saito et al. Am J Reprod Immunol 2010; 63: upravené podľa Malíčková et al. Alergie 2014; 2:

11 predčasný pôrod cca 5 7 % infekcia uteroplacentárna ischémia deciduálna hemorágia zápal zmeny v myometriu, čípku, membránach plodu porucha maternálno fetálnej tolerancie cervikometria Romero et al. BJOG; 2006, 113 (Suppl. 3), 17 42

12 Popis projektu 60 pacientiek v týždni tehotenstva kontrakcie cervikálna inkompetencia dĺžka 25 mm a/alebo dilatácia cervikálneho kanálu 1cm Sledované parametre po cervikometrii a stanovení Treg v periférnej krvi: 1.) pôrod do 48 hodín 2.) pôrod pred 34. týždňom 3.) pôrod medzi týždňom 4.) pôrod v termíne Koucký et al. J.Reprod. Immunol Dec; 106: 110 7

13 Stanovenie T regulačných lymfocytov (CD4+ CD25hi CD127dim/low): Panel protilátok: CD4 APC Alexa Fluor 750; CD25 PE; CD127 PC7; CD45 Pacific Blue (Beckman Coulter) SS INT CD25 PE CD4 APC Alexa 750 CD127 PC7

14 Koucký et al. J.Reprod. Immunol Dec; 106: 110 7

15 pôrod OR interval do 48 h 4,7 2,5 9,3 dĺžka čípku < 17,5 mm pred 34 t. 5,5 1,9 13,7 medzi t. 3,8 1,2 8,7 T reg < 0,031*10 9 /l do 48 h 5,1 1,5 13,3 pred 34 t. 8,1 2,2 24 medzi t. 7 3,7 27,5 dĺžka čípku < 17,5 mm do 48 h 35,2 13, T reg < 0,031*10 9 /l pred 34 t. 29,6 15,1 179 medzi t. 42,1 4,3 282 dĺžka čípku > 17,5 mm do 48 h 5 1,3 25,4 + T reg < 0,031*10 9 /l pred 34 t. 3,9 3,1 25,8 medzi t. 3,1 1,4 23 dĺžka čípku < 17,5 mm do 48 h 4,1 2, T reg > 0,031*10 9 /l pred 34 t. 3,9 2,7 24,9 medzi t. 3,7 2,6 26

16 Záver stanovenie počtu T regulačných lymfocytov v periférnej krvi je vhodným pomocným nástrojom k predikcii predčasného pôrodu v kombinácii s ultrazvukovou cervikometriou je výpovedná hodnota vyšetrení výborná pomoc pri sledovaní rizikových pacientiek

17 Pokračovanie stanovenie rôznych populácií Treg u zdravých žien vo veku 20 až 35 rokov, ktoré otehotneli prirodzene; bazálne hodnoty Sledované v 6. až 12.tt 20. až 25. tt 35. až 38. tt pri pôrode Panel: CD45, CD4, CD45RA, CD25, CD127, CTLA 4, GARP, PD 1, FoxP3, Helios

18

19 Pokračovanie Dynamika subpopulácií Treg Rozdiely u žien s tehotenstvom fyziologickým x problémovým Možnosť predikcie

20 Ďakujem za pozornosť