laboratoři i s podobnými záhadami?

Transkript

1 Setkáváte te se ve Vaší laboratoři i s podobnými záhadami? Doris Vokurková 1, Pavlína Králíčkov ková 1, Eva Malá 1, Jakub Novosad 1, Pavel Rozsíval 2, Eva Pařízkov zková 2 vokurkovad@lfhk lfhk.cuni.czcz 1 Ústav klinické imunologie a alergologie, FN Hradec Králov lové a LF UK Hradec Králov lové 2 Dětská klinika, FN Hradec Králov lové a LF UK Hradec Králov lové

2 Stanovení T, B, NK tetrachrom, 2lasery, Cytomics FC500, Beckman Coulter 1.zkumavka CD45-FITC, CD4-PE, CD8-ECD, CD3-PC5 2.zkumavka CD45-FITC, CD56+16-PE, CD19-ECD, CD3-PC5

3 MODIFIKACE

4 pac.a pac.b pac.b+serum pac.a pac.a 2x proprano

5 PŘÍČINA??? Vliv léků l (kortikoidy, cytostatika) Hypergamaglobulinémie mie Vysoké CRP Krevní skupina???? podle přítomnosti p antigenu na membráně erytrocytu jsou rozlišeny 4 krevní skupiny A, B, AB a 0. V plazmě se pak vyskytují protilátky tky proti těmto t krevním m skupinám m a to vždy v protilátka tka proti té t krevní skupině,, která není přítomná na membráně erytrocytu. - krevní skupina A - na membráně erytrocytu antigen A a v plazmě přítomnu protilátku tku anti B, krevní skupina B - na povrchu erytrocytu antigen B a v plazmě protilátku tku anti A, krevní skupinu AB, jež má na membráně erytrocytu přítomnp tomné oba antigeny a v plazmě žádnou z protilátek tek

6 březen 2012 květen 2012 HIV pacient, muž, 38let září 2012 prosinec 2012 prosinec 2012 březen 2013

7 PBS Sorensenův fosfátový pufr Roztok A: KH 2 PO g ad 1000ml H 2 O pro inj Roztok B: Na 2 HPO 4 x12 H 2 O.. 240g ad 1000ml H2O pro inj 20% DIHYDROGENFOSFOREČNAN DRASELNÝ Reklamace 10% roztok je zakalený, zastaven prodej šarže

8 46,9% Závada v laseru 77.9%

9 METABOLICKÉ VZPLANUTÍ Měření respiračního vzplanutí granulocytů po jejich stimulaci inakt.bakteriemi E.coli aktivace NADPH-oxid oxidázy Vznikající reaktivní meziprodukty uvnitř fagocytů oxidují DHR123 na fluorescenční produkt rhodamin123 detekován n průtokovým cytometrem (modrý laser 488nm)

10 METABOLICKÉ VZPLANUTÍ Chybějící nebo snížen ená tvorba oxidativních produktů fagocytujících ch buněk - vážné onemocnění chronické granulomatózy Mutace genu kódujk dujícího enzym fagocytárn rní NADPH- oxidazu na chromozomu X ( enzym má m sníženou nebo nulovou aktivitu) Aktivovaná NADPH-oxidaza katalyzuje reakci - vzniká singletový kyslík, peroxid vodíku ku, hydroxylový radikál, chlornan. Tyto reaktivní oxidační meziprodukty jsou zodpovědn dné za ničen ení patogenů uvnitř fagocytů po jejich ingesci

11 METABOLICKÉ VZPLANUTÍ muž 51let, obézn zní-150kg, 185cm recidivující infekce HCD, hraniční IgM imunoprofylaxe, Avamys u nás n s od r.1995 burstest v r. březen b 2012

12 cympo ZK PACIENT

13 granulocyty granulocyty granulocyty ZK PACIENT

14 eo - pacient leuko - ZK leuko - pacient

15 METABOLICKÉ VZPLANUTÍ Příčinou snížen eného respiračního vzplanutí může e být i nepřítomnost enzymu myeloperoxidázy (MPO) Monocyty ve srovnání s neutrofily obsahují jen velmi malé množstv ství tohoto enzymu. Eosinofily disponují příbuzensky poměrn rně blízkou peroxidázou zou,, která se vyznačuje ve srovnání s neutrofilní myeloperoxidázou 69.8 % homologií v sekvenční úrovni aminokyselin. V eozinofilech eozinofilní MPO, tvoří normáln lní DHR signál

16 Aktivace NK buněk vyšet etření vlivu buněč ěčné složky imunity na neplodnost u žen a mužů - součást stí imunologické reaktivity je také buněč ěčná imunita, představovp edstavována NK buňkami test doplňuje komplexnejší vyšet etření buněč ěčné imunity vůčv ůči antigenům m spermií a trofoblastu metodou inhibice migrace detekce buňkami zprostředkovan edkované imunologické reaktivity, která je namířena proti spermiím či i buňkám m trofoblastu ženy s diagnózou opakovaného potrácen cení po neúsp spěšných IVF zákrocz krocíchch jiný neobjasněný ný důvod d neplodnosti U těchto t žen - vyšší podíl l aktivovaných NK buněk k in vivo i po kultivaci s antigeny spermií či i trofoblastu V případě mužů může e zvýšen ená aktivace NK buněk k po kultivaci s antigeny spermií vypovídat o zvýšen ené cytotoxické reaktivitě vůči spermiáln lním antigenům

17 Žena trofoblast spermie NK ko NKT NEGATIVNÍ

18 Žena trofoblast spermie ko NK NKT POZITIVNÍ na antigeny spermií i trofoblastu

19 trofoblast spermie ko NK NKT Pacientka 35let, kdysi vrcholově gymnastika, nyní posilovna, anabolika neguje, zřejmě kouří marihuanu

20 BAZOTEST detekce bazofilů z plné krve pomocí průtokov tokové cytometrie využívá značen ení CD203c a aktivačního znaku CD63 lidské bazofily aktivované in vitro prostřednictv ednictvím m jejich vysokoafinitního receptoru pro IgE,, nově exprimují znak CD63 také na své membráně tato exprese velmi dobře e koreluje s jejich degranulací neg.ko poz.ko

21 BAZOTEST Muž 34let Obtížně léčitelné astma, polyvalentní alergie Recidivující infekce HCD neg.ko poz.ko

22 Promytá periferní krev pacienta + nativní sérum zdravé kontroly Promytá periferní krev pacienta + inaktivované sérum zdravé kontroly periferní krev zdravého dárce + nativní sérum pacienta periferní krev zdravého dárce + inaktivované sérum pacienta

23 BAZOTEST Z důvodu d vyšší odpovědi di v negativní kontrole hůřh ůře hodnotitelné U pacienta byl dále d proveden bazotest s autologním sérem vzhledem k podezřen ení na autoprotilátky tky proti IgE nebo receptoru IgE na bazofilech Při i testování vlivu pacientova séra s na kontrolní bazofily zdravého jedince nebyla prokázána jeho schopnost aktivovat bazofily Navíc c bylo zjištěno, že bazofily pacienta jsou aktivovány v bazotestu i po promytí Výskyt autoprotilátek tek proto nebyl ani prokázán, ale ani vyloučen Mohlo by se jednat o autoprotilátky tky vázané na povrch pacientových bazofilů???

24 Děkuji za pozornost Setkáváte se ve Vaší laboratoři s podobnými záhadami???