1) úvodní přednáška. 3) mutageneze in vitro 4) cdna a genomové knihovny 5) sekvencování genomů 6) transgenoze rostlin
|
|
- Karla Horáčková
- před 7 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 KLONOVÁNÍ a GENOVÉ INŽENÝRSTVÍ KLONOVÁNÍ a GENOVÉ INŽENÝRSTVÍ 1) úvodní přednáška 2) PCR techniky 3) mutageneze in vitro 4) cdna a genomové knihovny 5) sekvencování genomů 6) transgenoze rostlin 7) genové čipy 8) transgenoze živočichů 9) genová terapie 10) klonovací strategie a expresní systémy 11) seminář nástroje molekulární biologie v praxi 1
2 Získávání bioinformací (dobrovolný seminář) NCBI (National Center for Biological Information) TIGR (The Institute for Genomic Research) SignalP, TargetP (predikce buněčné lokalizace proteinů) BIOEDIT (freeware pro manipulaci s DNA a proteiny) BLAST (basic local alighment and search tool) GENEVESTIGATOR (sledování exprese genů na úrovni celých genomů in silico) Glick R a Pasternak JJ LITERATURA Molecular Biotechnology 3th edition, ASM Press Ltd, Washington, USA, 2003 Sambrook J a kol. Molecular Cloning 1,2,3 3th edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA 2001 Rosypal S Úvod do Molekulární Biologie díl čtvrtý třetí vydání, Prof.RNDr. Stanislav Rosypal, DrSc, Brno 2002 Brown TA; překlad Fellner M a kol. Klonování genů a analýza DNA 1 české vydání, Olomouc UP
3 Centralníní dogma DNA RNA Protein DNA do DNA DNA do RNA REPLIKACE TRANSKRIPCE RNA do Protein TRANSLACE Fenotyp RNA do DNA REVERZNÍ TRANSKRIPCE Jeden gen jeden enzym (protein/polypeptid) Centralníní dogma Gen 9,200 bp 5 3 AAGCTCGACTAGCGCTAGCCTACCTAGCTCTCCCCTTCC zralá RNA 1,870 bp 5 AAA 3 (kodující sekvence ORF (open reading frame) a nepřekládané regiony 5 -UTR, 3 -UTR) N Protein 386 aa C CDS 1158 bp (coding sequence) 3
4 Struktura genu Introny a Exony Promotor Enhancer a Silencer Počátek transkripce Transkripční faktory Signální sekvence Introny aexony: Kodující sekvence (ORF) mnoha eukaryotických genů je přerušená sekvencí známou jako introny. Introny jsou úseky DNA jejichž transkripty nejsou přítomný ve zralé mrna. Exony jsou části sekvence přítomné ve zralé mrna a kodují produkt eukaryotického genu. Místo počátku transkripce: místo kde začíná syntéza mrna (pozice 0, - 30bp od TATA boxu). Promotor: Oblast genu (5 -konec) upstream od místa počátku transkripce sloužící jako templát pro navázání transkripční jednotky a iniciaci transkripce. Inducibilní promotor je závislý na přítomnosti induktoru (nízkomolekulární látka). Konstitutivní promotor nezávislý (provozní house keeping geny). Enhancer: Část sekvence genu která interaguje s transkripčními faktory a tak zvyšuje účinnost transkripce. Je umístěna upstream nebo downstream od kódující sekvence a může být stovky bází daleko od kódující sekvence kterou kontroluje. Silencer: Opak enhanceru. Transkripční faktory: Proteiny interagující se specifickou sekvenci DNA, většinou ovlivňující terciální strukturu DNA a tak regulují transkripční jednotku. Jsou buď aktivátory nebo represory viz výše. Koaktivátory: Proteiny interagující s transkripčními faktory (ale ne s DNA) regulující transkripci. Signální sekvence: kóduje signální peptid, který předurčuje zacílení proteinu na buněčné úrovni a následně se odštěpuje. 4
5 DNA DNA DNA polymerasy blíže přednáška techniky PCR DNA RNA Transkripce (RNA syntéza): přenos informace z DNA do RNA (nestabilní) prostřednictvím enzymu RNA Polymerasy (DNA-dependentní RNA Polymerasa). Syntéza RNA je komplementární k templátovému DNA duplexu a je identická s netemplátovým vláknem duplexu (5-3 ). Netemplátový řetězec je proto nazýván kódující řetězec a je identický s mrna s výjimkou záměny U za T. Typy RNA: messenger RNA (mrna, polya + RNA).RNAkterájepřepisována do polypeptidů (1-5%). ribozomální RNA (rrna). strukturní složka ribozómů. (90%) transferová RNA (trna). přenašeč aminokyselin do místa syntézy proteinu. (5-10%) málá jaderná, jadérková, cytoplazmatická RNA (snrna/sno/scrna). sestřih mrna 5
6 Postranskripční úpravy mrna Čepička (capping). modifikovaný guanozin (m 7 G) je přidáván na 5'-konec většiny mrna. Stabilita mrna a podílí se na vazbě k ribozomu. Polyadenylace. l bp dlouhá sekvence polyadenozinu je přidávána na 3'-konec většiny eukaryotické pre-mrna. PolyA konec není kodován v DNA. Sestřih intronů a exonů. introny jsou vyštěpeny a exony spojeny dohromady ve struktuře zvané spliceozom. Y pyrimidinová báze Postranskripční úpravy mrna 6
7 RNA protein Translace (syntéza proteinů): Translace je proces přeměny informace z RNA do aminokyselinového řetězce (polypeptidu) probíhající v cytoplasmě. Zralá mrna je transportována do cytoplasmy k ribozomům (mnohdy vázané na endoplasmatickou retikulární síť). Ribozóm se skládá ze strukturní rrna a 80 různých proteinů, které tvoří malou a velkou podjednotku. Iniciace: Zachycení mrna a nalezení start kodonu AUG, který koduje methionin. (M je odštěpen během postranslačních úprav nebo společně se signálním peptidem) Elongace: Přidávání různých AK v aktivované formě vázané na trna a vytváření peptidové vazby mezi amino a karboxylovou skupinou. Terminace: STOP kodón (UAA, UAG nebo UGA) Posttranslační úpravy: Fosforylace, glykosylace, organelové cílení a odštěpení signálního peptidu, složení do aktivního stavu (vytvoření terciální a kvartérní struktury). RNA DNA Reverzní transkripce: Proces vytvoření DNA z RNA templátu za pomocí RNA-dependentní DNA polymerasy Reverzní transkriptasa (RT). RT je přítomná pouze v RNA virech avian myeloblastosis virus (AMV), Moloney murine leukemia virus (MMLV), nebo human immunodeficiency virus (HIV). Aplikace: tvorba cdna (komplementární DNA): přesná DNA kopie mrna. DNA sekvence proteinu bez přerušení introny. cdna knihovny RTPCR 7
8 PG2 Hybridizace Dva řetězce DNA mohou být k sobě komplementární. mrna syntetizována z genu je identická k jednomu vláknu svého genu a komplementární k druhému vláknu. Komplementární řetězce mohou být odděleny (denaturace) a znovu spojeny (renaturace hybridizace) na různém stupni specifity, mohou vznikat hybridní formace DNA-DNA, DNA-RNA, nebo RNA- RNA. Methody využívající těchto vlastnosti: Southern blot: Hybridizace DNA na DNA (v pevné fázi) Northern blot: Hybridizace DNA na RNA (v pevné fázi) RNAse protection assay: Hybridizace RNA na RNA (v roztoku) In situ hybridizace DNA-DNA nebo DNA-RNA (ve tkání, či vbuňce, např. FISH) izolace mrna: vazba polya konce na polyt sekvenci navázanou na pevný matrix. Stringence: podmínky zaručující stupeň specifity (komplementarity) PG1 Strigence hybridizace teplota koncentrace soli Denaturační činidla (formamid) za snížené teploty udržují vysokou strigenci 8
9 Snímek 15 PG2 RNAse protection assay multi Northern blot ve zkumavce: pripravi se in vitro transcrpipcí proby proti cilové mrna, necha se probehnout hybridizace, vsechny ssrna se pak rozstipou, reakce se hodí na gel a sleduje se intenzita (pomocí značení sondy) a velikost získaných bandu. galuszka; 18/02/2008 Snímek 16 PG1 foramid narušuje vodíkové vazby mezi bázemi a tím snižuje melting temperature, muze byt nahrazen mene toxickou močovinou galuszka; 18/02/2008
10 PG3 Princip Southern a Northern blotu Hybridizační sondy jsou značené: chemiluminiscenčně BIOTIN detekce AVIDIN-HRP, DIGOXYGENIN fluorescenčně FLUORESCEIN, RHODAMIN radioaktivně dat 32 P, 3 H Příprava sond: 5 a 3 koncové značení nízká citlivost pomocí RANDOM HEXAMERů a DNA polymerasy (Klenowův fragment) PCR nick translace DNasa I a DNA polymerasa in vitro transkripce (RNA próby) FISH fluorescent in situ hybridization příklad nukleotidu značeného digoxygeninem 9
11 Snímek 17 PG3 rozdělit typy sond RNA a DNA galuszka; 18/02/2008
12 PG1 PG4 Příprava hybridizačních sond značení pomocí náhodných hexameru značení pomocí nick translation (posun jednořetězcového zlomu) RESTRIKČNÍ ENDONUKLEASY (restrikční enzymy II třídy) rozpoznávají specifické sekvence dsdna a štípou jí ve stejném místě rozpoznávací místo je 4-8 bp dlouhé štípou dlouhé fragmenty dsdna na kratší štípou vždy znovu opakovatelným způsobem pocházejí především z bakterií ochrana před cizorodou DNA především bakteriofágovou modifikačně-restrikční enzymový systém (RE + specifická modifikační metylasa) Přes 120 rozpoznávacích míst dodnes popsaných více než 800 RE 10
13 Snímek 19 PG4 PG1 Klenowuv fragment: postráda 5-3 exonukleasovou aktivitu, polymerasa nedegraduje jiz nasedly primer a zastavuje se polymerizace galuszka; 18/02/2008 Labeling principle The nick translation method (1) is based on the ability of DNase I to introduce randomly distributed nicks into DNA at low enzyme concentrations in the presence of Mg2+. E. coli DNA polymerase I synthesizes DNA complementary to the intact strand in a 5' 3' direction using the 3'-OH termini of the nick as a primer (2). The 5' 3' exonucleolytic activity of DNA polymerase I simultaneously removes nucleotides in the direction of synthesis (3). The polymerase activity sequentially replaces the removed nucleotides with isotope-labeled or haptenlabeled deoxyribonucleoside triphosphates (1). At low temperature (15 C), the unlabeled DNA in the reaction is thus replaced by newly synthesized labeled DNA. DNA The DNA must be in low-salt concentration solution. Radioactive dntp for labeling [α-32p] dctp is preferentially used due to its greater stability in comparison to other labeled deoxyribonucleoside triphosphates. [α-32p] deoxyribonucleoside triphosphates with a specific activity of 3000 Ci/mmol give better incorporation and higher levels of labeling than those with a specific activity of 400 Ci/mmol under identical reaction conditions. Specific activity The level of specific labeling and the incorporation rate are dependent on the ratio of substrate DNA to labeled Petr Galuszka; 11/02/2006
14 RESTRIKČNÍ MíSTA MAJÍ BOD SYMETRIE RE mohou na DNA vytvářet TUPÉ nebo LEPIVÉ konce restrikční sekvence jsou většinou symetrické. nukleotidy vytvářejí PALINDROM EcoRI LEPiVÉ KONCE specifické spojení Palindrom: sekvence se čte stejně v obou směrech jak ve 5 3 tak ve směru 5 3 na komplementárním řetězci. TUPÉ KONCE nespecifické spojení Existují RE se stejnou restrikční sekvencí lišící se pouze typem vzniklých konců (5 - či 3 - lepivé) KpnI vs. Asp718 - izoschizomery Lepivé konce: každý DNA fragment (jakéhokoli původu) tvoří štěpením stejnou RE dvě jednovláknové identické sekvence (čtené ve směru 5-3 ). Kompatibilní konce: BamHI GˇGATCC GATCC BglII AˇGATCT 11
15 dvě odlišné DNA mající stejné rozpoznávací místo pro danou RE se mohou vzájemně spojit v rekombinantní DNA molekulu rekombinantníní DNA molekula kula: je nová kombinace nukleotidů v DNA která se nevyskytuje volně v přírodě Počet nukleotidů v restrikčním místě dané RE determinuje průměrnou délku fragmentů DNA získaných naštípaním danou RE Pravděpodobnost že dané restrikční místo bude nalezeno v genomu: 1) 4 4 = 256 bp 2) 4 6 = 4096 bp 3) 4 8 = bp průměrná vzdálenost mezi restrikčními sekvencemi v DNA = 4 n n = # bází v restrikčním místě GTAC Působení RE je velmi citlivé na iontovou sílu roztoku a charakter přítomných solí. Pokud nejsou zachovány specifické podmínky pro danou RE ta může mít tzv. star aktivitu STAR AKTIVITA nespecifické náhodné štěpení 12
16 T4 DNA ligasa enzym izolovaný z T4 bakteriofága infikujícího E.coli, katalyzuje tvorbu fosfodiesterové vazby mezi 5 fosfátovou skupinou jednoho a 3 OH skupinou sousedního nukleotidu. reakce vyžaduje energii jednoho ATP používá se ke spojování lepivých i tupých konců dvou restrikčních fragmentů DNA, připojování různých adaptorových sekvencí k DNA a cirkulizaci DNA Reakce se provádí většinou za snížené teploty (15-16 C) aby se snížila kinetická energie molekul a zabránilo se tak nekomplementárnímu spárování lepivých konců. zápor: nízká aktivita enzymu dlouhý reakční čas. Další enzymy používané v molekulární biologii: Alkalická fosfatasa Mung Bean nukleasa KLONOVÁNÍ Molekulární klonování: multi-krokový proces který vytvoří kolekci definovaných fragmentů dané DNA pomocí restrikčních endonukleas spojení vybraných DNAfragmentů (většinou jednoho genu) se speciálním nosičem vektor pomocí T4 DNA ligasy přenos vzniklého konstruktu do živých buněk (často baktérie) mnohonásobné namnožení vložených DNA fragmentů replikaci v živé buňce DNA KLONY Buněčné klonování: vytváření geneticky identických buněk (organismů) v živé přírodě přirozené: kolonie baktérii řízkování rostlin jednovaječná dvojčata umělé 13
17 KLONOVACÍ VEKTORY A) Bakteriální a kvasinkové PLASMIDY - přirozené součástí bakteriálních buněk nesoucí vlastní genetickou informaci ve formě dsdna (rezistence k antibiotikům, metabolismus nezvyklých substrátů ) 1-100kb - replikují se nezávisle na baktérii - vlastní plasmidové vektory vznikly úpravou přirozených high copy plasmidy pbr (Bolivar a Rodriguez) kb menší než je přirozeně se vyskytující v E.coli - ori vlastní počátek replikace - rezistence k Amp a Tc - unikátní restrikční místa - kapacita pro inzertovou DNA 1-5 kb kopií v buńce MCS multiple cloning site (polylinker) ori KLONOVACÍ VEKTORY B) Virové - BAKTERIOFÁGY - bakteriální viry s dvouřetězcovou lineární DNA - klonovací kapacita 2-25kb25kb inzertu - mnohonásobné množení v závislosti na hostitelské bakterii cos cos BAKTERIOFÁG lambda 49kb Střední část genomu není důležitá pro lytický růst a lze ji nahradit inzertovou DNA snadná manipulace díky cos místům (lepivé konce) na koncích λ DNA, které umožňují její cirkulaci Zacirkuluje se pouze bakteriofág, který má vzdálenost mezi cos místy 37-52kb tvorba cdna a genomových knihoven 14
18 PG5 KLONOVACÍ VEKTORY C) bakteriálně-virové - KOSMIDY odvozené z plasmidu do kterého byly naklonovány cos místa bakteriofága λ Inzertová DNA je naklonována do lineárního kosmidu a sbalena in vitro virovým mechanismem a infikována do bakterie v bakterii je pak cirkulována a replikuje se dál jako plasmid malá velikost cca 5kb není potřeba infekčních lytických λ proteinů, pouze selekční marker k antibiotiku, velikost inzertové DNA se může pohybovat až k 47kb D) bakteriálně-virové - FASMIDY (phagemid) odvozené od bakteriofága M13 s malou ssdna (6.4kb), který se po infekci do bakterie replikuje jako kruhovitá dsdna (plasmid, snadná manipulace, restrikce) infekční fágové částice však opět obsahují pouze ssdna (vhodný zdroj pro izolaci ssdna např. pro hybridizaci) do infekčních částic mohou být sbaleny částice až dvakrát větší než je fágová DNA 15
19 Snímek 29 PG5 KOSMIDY nemají lytické geny, replikují se jako bakteriofág ale nelýzují bakterii, s prazdnýma se manipuluje jako s plasmidy. Replikuji se pomaleji než plasmidy KONKATEMERY - cirkularní kosmid se naštípe jedním lepivým a jedním tupym aby nedochazelo k cirkulaci galuszka; 18/02/2008
20 KLONOVACÍ VEKTORY E) kvasinkové - YAC umělé kvasinkové chromosomy (yeast artificial chromosomes) patří mezi kyvadlové vektory (shuttle vector) v bakterii jako kruhová dsdna (plasmid) vedle sekvencí bakteriálního plasmidu obsahují části kvasinkového chromozomu (centromera, počátek replikace,dvě telomery) linearizací se chromozom aktivuje (oddělení telomer od sebe) obrovská klonovací kapacita až 2000kb nestabilita a složitá manipulace (protoplasty) KYVADLOVÉ VEKTORY umožňující existenci a replikaci ve dvou rozdílných organismech: pyes bakterie kvasinka - počátek replikace z přirozeného kvasinkového vektoru 2μ Ti-plazmid bakterie rostlina viz přednáška transgenoze rostlin KLONOVACÍ VEKTORY F) bakteriální - BAC umělé bakteriální chromosomy (bacterial artificial chromosomes) Odvozené od E.coli F-plasmidu (fertility plasmid), low copy 1-2 kopie na buńku VÝHODY oproti YAC: - stabilita (cirkulární) - snadná manipulace - potlačení rekombinace Vhodné fragmenty genomické DNA pro ligaci jsou získány pulsní gelovou elektroforesou VELKÝ VÝZNAM PŔI MANIPULACI S CELÝMI GENOMY INVITROGEN 16
21 Obecný princip molekulárního klonování klonovací vector + DNA obsahující požadovaný gen (izolace) restrikce tik ligace transformace selekce pomocí selekčních markerů reprodukce a syntéza cílového proteinu izolace Využití molekulárního klonování uchovávání, zmnožení a manipulace s genetickou informací (cdna a genomové knihovny) produkce proteinů pro různorodé využití vnášení nových či pozměněných genů do organismů (GMO, genová terapie) farmaceutika zemědělství základní výzkum průmysl medicína 17
22 SELEKČNÍ MARKERY geny nesené na klonovacím vektoru, exprimované současně s transgenem, na jejichž fenotypovém projevu lze transformované buňky snadno selektovat 1) geny kódující degradaci ANTIBIOTIKA INHIBITORY SYNTÉZY BAKTERIÁLNÍ BUNĚČNÉ STĚNY AMPICILIN gen Amp koduje β-laktamasu která štěpí β-laktámový kruh penicilinových antibiotik CEFOTAXIM INHIBITORY SYNTÉZY PROTEINů CHLORAMFENIKOL, KANAMYCIN (vážou se na ribozomální podjednotky) gen Cml kóduje chloramfenikol acyltransferasu gen Kan kóduje aminoglykosid fosfotransferasu AMPICILIN SELEKČNÍ MARKERY 1) geny kódující degradaci ANTIBIOTIKA INHIBITORY SYNTÉZY PROTEINů TETRACYKLIN (zabraňuje vazbě aminoacyl trna k ribozomu) gen Tet kóduje membránový protein, který aktivně transportuje TC ven z buňky HYGROMYCIN B (interferuje s velkou ribozomální podjednotkou a zabraňuje elongaci syntetizovaného peptidu) gen způsobující rezistenci hgh kóduje fosforylasu inaktivující toto antibiotikum. PůSOBÍ I NA EUKARYOTICKÉ BUŇKY!!! (selekce transgenních rostlin) INHIBITORY TRANSKRIPCE A REPLIKACE ACTINOMYCIN D (inhibuje transkripci tím, že se váže na specifické úseky DNA) RIFAMPICIN (inhibuje prokaryotní RNA polymerasu, ale i chloroplastovou a mitochondriální, proto je toxicky i pro člověka) ZEOCIN glykopeptid izolovaný ze Streptomyces, který štěpí po vstupu do buňky jakoukoliv DNA. Rezistentní gen Sh ble kóduje inhibiční protein (13.6 kda) tohoto glykopeptidu. koncentrace účinné pro selekci: Baktérie μg/ml Kvasinky μg/ml Savčí buňky μg/ml ZEOCIN 18
23 SELEKČNÍ MARKERY 2) geny kódující enzymy narušující NUTRIČNÍ NEDOSTATEČNOST (ztráta autotrofie) - používají se především pro selekci transgenních kvasinek Gen URA3 kóduje enzym orotidin 5 -fosfát dekarboxylasu, enzym metabolické dráhy uracilu LYS2 kóduje aminoadipát reduktasu (bisyntéza lyzinu) ADE2 (C1-tetrahydrofolát syntasa), LEU2 (β- izopropylmalát dehydrogenasa), TRP1 (fosforibozylanthranilát izomerasa) Princip selekce: pro transformaci daného plasmidu se použijí specifické kmeny kvasinek deficientní pro daný gen, selekce se pak provádí na minimálním médiu (bez živin). Příklad: kmen Saccharomyces cerevisiae INVSc1 genotyp: MATa his3δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 /MATλ his3δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 fenotyp: His -, Leu -, Trp -, Ura - tzn. že tento kmen je autotrofní na histidin, leucin, tryptofan a uracil a na médiu bez těchto živin neporoste kyvadlový vektor pro transformaci kvasinek SELEKČNÍ MARKERY 3) blue/white screening test - pomocný test pro selekci transformovaných bakterií či bakteriofágu - klonovací vektor nese gen lacz + který kóduje enzym β-galaktosidasu (štěpí laktosu na galaktosu a glukosu) - MCS je umístěn uvnitř tohoto genu, a po vložení inzertu se tento gen stává neaktivní X-GAL HOCH 2 HO H O O OH galaktosa O N H Cl Ampicilin (zabije netransformované bakterie) Br X-GAL (5-Bromo-4-chloro-3-indolyl b-d-galactopyranoside) umělý substrát IPTG (isopropyl-1-thio-β-d-galaktopyranoside) induktor exprese lacz genu modré barvivo 19
24 lytický a lysogenní cyklus virů struktura lambda bakteriofága 20
25 SELEKČNÍ MARKERY 4) lysogenní selekce bakteriofágových vektoru red/gam- LAMBDA FIX II VEKTOR (λ bakteriofágový vektor) - selekce se provádí na speciálním kmeni E.coli (lysogenní pro P2 bakteriofága, tzn. že hostitelská buňka je již napadená jiným bakteriofágem) - Pokud má λ vektor genotyp red/gam+ na daném kmeni neroste je tzv. Sensitivní k P2 interferenci (Spi + fenotyp) - redagamgeny se nacházejí ve střední části (stuffer) a jsou nahrazeny inzertem. Bakteriofág s inzertem je tudiž Spi- a může být vyselektován na P2 lysogenním kmeni příliš malý nesbalí se do kapsidy red/gam+ 12 kb inzert (genomová knihovna) 21
Klonování DNA a fyzikální mapování genomu
Klonování DNA a fyzikální mapování genomu. Terminologie Klonování je proces tvorby klonů Klon je soubor identických buněk (příp. organismů) odvozených ze společného předka dělením (např. jedna bakteriální
Více2. Z následujících tvrzení, týkajících se prokaryotické buňky, vyberte správné:
Výběrové otázky: 1. Součástí všech prokaryotických buněk je: a) DNA, plazmidy b) plazmidy, mitochondrie c) plazmidy, ribozomy d) mitochondrie, endoplazmatické retikulum 2. Z následujících tvrzení, týkajících
VíceMolekulární základy dědičnosti. Ústřední dogma molekulární biologie Struktura DNA a RNA
Molekulární základy dědičnosti Ústřední dogma molekulární biologie Struktura DNA a RNA Ústřední dogma molekulární genetiky - vztah mezi nukleovými kyselinami a proteiny proteosyntéza replikace DNA RNA
VíceExprese genetické informace
Exprese genetické informace Tok genetické informace DNA RNA Protein (výjimečně RNA DNA) DNA RNA : transkripce RNA protein : translace Gen jednotka dědičnosti sekvence DNA nutná k produkci funkčního produktu
VíceMolekulární biotechnologie č.8. Produkce heterologního proteinu v eukaryontních buňkách
Molekulární biotechnologie č.8 Produkce heterologního proteinu v eukaryontních buňkách Eukaryontní buňky se využívají v případě, když Eukaryontní proteiny syntetizované v baktériích postrádají biologickou
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován
Více19.b - Metabolismus nukleových kyselin a proteosyntéza
19.b - Metabolismus nukleových kyselin a proteosyntéza Proteosyntéza vyžaduje především zajištění primární struktury. Informace je uložena v DNA (ev. RNA u některých virů) trvalá forma. Forma uskladnění
VíceExprese genetické informace
Exprese genetické informace Stavební kameny nukleových kyselin Nukleotidy = báze + cukr + fosfát BÁZE FOSFÁT Nukleosid = báze + cukr CUKR Báze Cyklické sloučeniny obsahující dusík puriny nebo pyrimidiny
VíceExprese genetického kódu Centrální dogma molekulární biologie DNA RNA proteinu transkripce DNA mrna translace proteosyntéza
Exprese genetického kódu Centrální dogma molekulární biologie - genetická informace v DNA -> RNA -> primárního řetězce proteinu 1) transkripce - přepis z DNA do mrna 2) translace - přeložení z kódu nukleových
VíceMolekulárn. rní. biologie Struktura DNA a RNA
Molekulárn rní základy dědičnosti Ústřední dogma molekulárn rní biologie Struktura DNA a RNA Ústřední dogma molekulárn rní genetiky - vztah mezi nukleovými kyselinami a proteiny proteosyntéza replikace
VíceHybridizace nukleových kyselin
Hybridizace nukleových kyselin Tvorba dvouřetězcových hybridů za dvou jednořetězcových a komplementárních molekul Založena na schopnosti denaturace a renaturace DNA. Denaturace DNA oddělení komplementárních
VíceMIKROBIOLOGIE V BIOTECHNOLOGII
Biotechnologie MIKROBIOLOGIE V BIOTECHNOLOGII Využití živých organismů pro uskutečňování definovaných chemických procesů pro průmyslové nebo komerční aplikace Organismus je geneticky upraven metodami genetického
VíceZdrojem je mrna. mrna. zpětná transkriptáza. jednořetězcová DNA. DNA polymeráza. cdna
Obsah přednášky 1) Klonování složených eukaryotických genů 2) Úprava rekombinantních genů 3) Produkce rekombinantních proteinů v expresních systémech 4) Promotory 5) Vektory 6) Reportérové geny Zdrojem
VíceMIKROBIOLOGIE V BIOTECHNOLOGII
Biotechnologie MIKROBIOLOGIE V BIOTECHNOLOGII Termín biotechnologie byl poprvé použit v roce 1917 Procesy, při kterých se na tvorbě výsledného produktu podílejí živé organismy Širší definice: biotechnologie
VíceZáklady molekulární biologie KBC/MBIOZ
Základy molekulární biologie KBC/MBIOZ Mária Čudejková 2. Transkripce genu a její regulace Transkripce genetické informace z DNA na RNA Transkripce dvou genů zachycená na snímku z elektronového mikroskopu.
VíceSyntéza a postranskripční úpravy RNA
Syntéza a postranskripční úpravy RNA 2016 1 Transkripce Proces tvorby RNA na podkladu struktury DNA Je přepisován pouze jeden řetězec dvoušroubovice DNA templátový řetězec Druhý řetězec se nazývá kódující
VíceProteiny Genová exprese. 2013 Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D.
Proteiny Genová exprese 2013 Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D. Bílkoviny (proteiny), 15% 1g = 17 kj Monomer = aminokyseliny aminová skupina karboxylová skupina α -uhlík postranní řetězec Znát obecný vzorec
VíceGenové knihovny a analýza genomu
Genové knihovny a analýza genomu Klonování genů Problém: genom organismů je komplexní a je proto obtížné v něm najít a klonovat specifický gen Klonování genů Po restrikčním štěpení genomové DNA pocházející
VícePříprava vektoru IZOLACE PLASMIDU ALKALICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLACE DNA GELOVÁ ELEKTROFORÉZA RESTRIKČNÍ ŠTĚPENÍ. E. coli. lyze buňky.
Příprava vektoru IZOLCE PLSMIDU LKLICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLCE DN E. coli plasmidová DN proteiny proteiny + + vysrážená plasmidová lyze buňky + snížení ph chromosomální DN centrifugace DN chromosomální
VíceImplementace laboratorní medicíny do systému vzdělávání na Univerzitě Palackého v Olomouci. reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/
Implementace laboratorní medicíny do systému vzdělávání na Univerzitě Palackého v Olomouci reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/28.0088 Hybridizační metody v diagnostice Mgr. Gabriela Kořínková, Ph.D. Laboratoř molekulární
VíceAUG STOP AAAA S S. eukaryontní gen v genomové DNA. promotor exon 1 exon 2 exon 3 exon 4. kódující oblast. introny
eukaryontní gen v genomové DNA promotor exon 1 exon 2 exon 3 exon 4 kódující oblast introny primární transkript (hnrna, pre-mrna) postranskripční úpravy (vznik maturované mrna) syntéza čepičky AUG vyštěpení
VíceStruktura a funkce nukleových kyselin
Struktura a funkce nukleových kyselin ukleové kyseliny Deoxyribonukleová kyselina - DA - uchovává genetickou informaci Ribonukleová kyselina RA - genová exprese a biosyntéza proteinů Složení A stavební
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti. Vztah struktury a funkce nukleových kyselin. Replikace, transkripce
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti Vztah struktury a funkce nukleových kyselin. Replikace, transkripce Nukleová kyselina gen základní jednotka informace v živých systémech,
VíceZáklady molekulární biologie KBC/MBIOZ
Základy molekulární biologie KBC/MBIOZ Ivo Frébort 4. Metody molekulární biologie I Izolace DNA a RNA Specifické postupy pro baktérie, kvasinky, rostlinné a živočišné tkáně U RNA nutno zabránit kontaminaci
VíceMetody molekulární biologie
Metody molekulární biologie 1. Základní metody molekulární biologie A. Izolace nukleových kyselin Metody využívající různé rozpustnosti Metody adsorpční Izolace RNA B. Centrifugační techniky o Princip
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/
Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Genomika (KBB/GENOM) Fyzické mapování Fyzické cytogenetické a fyzické molekulární mapy Ing. Hana Šimková, CSc. Cíl přednášky
VíceZáklady molekulární biologie KBC/MBIOZ
Základy molekulární biologie KBC/MBIOZ 4. Metody molekulární biologie I Izolace DNA a RNA Specifické postupy pro baktérie, kvasinky, rostlinné a živočišné tkáně U RNA nutno zabránit kontaminaci RNasami
VícePříprava rekombinantních molekul pro diagnostické účely
1 Příprava rekombinantních molekul pro diagnostické účely doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2014 2 Obsah přednášky 1) Pojem rekombinantní DNA 2) Historické milníky
VíceREKOMBINACE Přestavby DNA
REKOMBINACE Přestavby DNA variace v kombinacích genů v genomu adaptace evoluce 1. Obecná rekombinace ( General recombination ) Genetická výměna mezi jakýmkoli párem homologních DNA sekvencí - často lokalizovaných
VíceGarant předmětu GEN: prof. Ing. Jindřich Čítek, CSc. Garant předmětu GEN1: prof. Ing. Václav Řehout, CSc.
Garant předmětu GEN: prof. Ing. Jindřich Čítek, CSc. Garant předmětu GEN1: prof. Ing. Václav Řehout, CSc. Další vyučující: Ing. l. Večerek, PhD., Ing. L. Hanusová, Ph.D., Ing. L. Tothová Předpoklady: znalosti
VíceExprese rekombinantních proteinů
Exprese rekombinantních proteinů Exprese rekombinantních proteinů je proces, při kterém můžeme pomocí různých expresních systémů vytvořit protein odvozený od konkrétního genu, nebo části genu. Tento protein
Více25.2.2014. Genomika. Obor genetiky, který se snaží. stanovit úplnou genetickou informaci. organismu a interpretovat ji v. termínech životních pochodů.
Genomika Obor genetiky, který se snaží stanovit úplnou genetickou informaci organismu a interpretovat ji v termínech životních pochodů. 1 Strukturní genomika stanovení sledu nukleotidů genomu organismu,
VíceTRANSLACE - SYNTÉZA BÍLKOVIN
TRANSLACE - SYNTÉZA BÍLKOVIN Translace - překlad genetické informace z jazyka nukleotidů do jazyka aminokyselin podle pravidel genetického kódu. Genetický kód - způsob zápisu genetické informace Kód Morseovy
VíceBílkoviny a rostlinná buňka
Bílkoviny a rostlinná buňka Bílkoviny Rostliny --- kontinuální diferenciace vytváření orgánů: - mitotická dělení -zvětšování buněk a tvorba buněčné stěny syntéza bílkovin --- fotosyntéza syntéza bílkovin
VíceNukleové kyseliny. DeoxyriboNucleic li Acid
Molekulární lární genetika Nukleové kyseliny DeoxyriboNucleic li Acid RiboNucleic N li Acid cukr (deoxyrobosa, ribosa) fosforečný zbytek dusíkatá báze Dusíkaté báze Dvouvláknová DNA Uchovává genetickou
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Investice do rozvoje vzdělávání Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Investice do rozvoje vzdělávání
VíceCentrální dogma molekulární biologie
řípravný kurz LF MU 2011/12 Centrální dogma molekulární biologie Nukleové kyseliny 1865 zákony dědičnosti (Johann Gregor Mendel) 1869 objev nukleových kyselin (Miescher) 1944 genetická informace v nukleových
Vícecdna a GENOMOVÉ KNIHOVNY
cdna a GENOMOVÉ KNIHOVNY je to soubor náhodně klonovaných fragmentů genomové DNA nebo cdna, připravené zpětnou transkripci mrna, příslušného organismu do vhodného vektoru, ve kterém může být tento soubor
VíceMolekulární biotechnologie č.9. Cílená mutageneze a proteinové inženýrství
Molekulární biotechnologie č.9 Cílená mutageneze a proteinové inženýrství Gen kódující jakýkoliv protein lze izolovat z přírody, klonovat, exprimovat v hostitelském organismu. rekombinantní protein purifikovat
VíceIzolace, klonování a analýza DNA
Izolace, klonování a analýza DNA Ing. Pavel Kotrba, Ph.D., Ing. Zdeněk Knejzlík, Ph.D., Ing. Zdeněk Chodora Ústav biochemie a mikrobiologie, VŠCHT Praha HTpavel.kotrba@vscht.czTH, HTzdenek.knejzlik@vscht.czTH,
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/
I n v e s t i c e d o r o z v o j e v z d ě l á v á n í Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním
VíceRich Jorgensen a kolegové vložili gen produkující pigment do petunií (použili silný promotor)
RNAi Rich Jorgensen a kolegové vložili gen produkující pigment do petunií (použili silný promotor) Místo silné pigmentace se objevily rostliny variegované a dokonce bílé Jorgensen pojmenoval tento fenomén
VíceStruktura a funkce biomakromolekul
Struktura a funkce biomakromolekul KBC/BPOL 7. Interakce DNA/RNA - protein Ivo Frébort Interakce DNA/RNA - proteiny v buňce Základní dogma molekulární biologie Replikace DNA v E. coli DNA polymerasa a
VíceGlobální pohled na průběh replikace dsdna
Globální pohled na průběh replikace dsdna 3' 5 3 vedoucí řetězec 5 3 prodlužování vedoucího řetězce (polymerace ) DNA-ligáza směr pohybu enzymů DNA-polymeráza I DNA-polymeráza III primozom 5' 3, 5, hotový
VíceBakteriální transpozony
Bakteriální transpozony Transpozon = sekvence DNA schopná transpozice, tj. přemístění z jednoho místa v genomu do jiného místa Transpozice = proces přemístění transpozonu Transponáza (transpozáza) = enzym
VíceTerapeutické klonování, náhrada tkání a orgánů
Transfekce, elektroporace, retrovirová infekce Vnesení genů Vrstva fibroblastů, LIF Terapeutické klonování, náhrada tkání a orgánů Selekce ES buněk, v nichž došlo k začlenění vneseného genu homologní rekombinací
VíceRekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer
Rekombinantní protilátky, bakteriofágy, aptamery a peptidové scaffoldy pro analytické a terapeutické účely Luděk Eyer Virologie a diagnostika Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i., Brno Alternativní
VíceEnzymy v molekulární biologii, RFLP. Molekulární biologie v hygieně potravin 3, 2014/15, Ivo Papoušek
Enzymy v molekulární biologii, RFLP Molekulární biologie v hygieně potravin 3, 2014/15, Ivo Papoušek Enzymy v molekulární biologii umožňují nám provádět celou řadu přesně cílených manipulací Výhody enzymů:
VíceKlonování gen a genové inženýrství
Klonování gen a genové inženýrství Genové inženýrství užite né termíny Rekombinantní DNA = DNA, ve které se nachází geny nejmén ze dvou zdroj, asto ze dvou zných druh organism Biotechnologie = manipulace
VíceGenetika bakterií. KBI/MIKP Mgr. Zbyněk Houdek
Genetika bakterií KBI/MIKP Mgr. Zbyněk Houdek Bakteriofágy jako extrachromozomální genomy Genom bakteriofága uvnitř bakterie profág. Byly objeveny v bakteriích už v r. 1915 Twortem. Parazitické org. nemají
VíceMolekulární biotechnologie č.12. Využití poznatků molekulární biotechnologie. Transgenní rostliny.
Molekulární biotechnologie č.12 Využití poznatků molekulární biotechnologie. Transgenní rostliny. Transgenní organismy Transgenní organismus: Organismus, jehož genom byl geneticky modifikován cizorodou
VíceMOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE. 2. Polymerázová řetězová reakce (PCR)
MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE 2. Polymerázová řetězová reakce (PCR) Náplň praktik 1. Izolace DNA z buněk bukální sliznice - izolační kit MACHEREY-NAGEL 2. PCR polymerázová řetězová reakce (templát gdna) 3. Restrikční
VíceKontrola genové exprese
Základy biochemie KBC/BC Kontrola genové exprese Inovace studia biochemie prostřednictvím e-learningu CZ.04.1.03/3.2.15.3/0407 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti. Translace, techniky práce s DNA
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti Translace, techniky práce s DNA Translace překlad z jazyka nukleotidů do jazyka aminokyselin dá se rozdělit na 5 kroků aktivace aminokyslin
VíceNukleosidy, nukleotidy, nukleové kyseliny, genetická informace
Nukleosidy, nukleotidy, nukleové kyseliny, genetická informace Centrální dogma Nukleové kyseliny Fosfátem spojené nukleotidy (cukr s navázanou bází a fosfátem) Nukleotidy Nukleotidy stavební kameny nukleových
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie I n v e s t i c e d o r o z v o j e v z d ě l á v á n í reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Investice do rozvoje vzdělávání Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Investice do rozvoje vzdělávání
VíceDNA se ani nezajímá, ani neví. DNA prostě je. A my tancujeme podle její muziky. Richard Dawkins: Řeka z ráje.
Genomika DNA se ani nezajímá, ani neví. DNA prostě je. A my tancujeme podle její muziky. Richard Dawkins: Řeka z ráje. Obor genetiky, který se snaží stanovit úplnou genetickou informaci organismu a interpretovat
Vícestudium množství určitého transkriptu v daném vzorku a v množství dané molekuly mrna v dané buňce a v daném
Analýza genové exprese Analýza genomu genomika Analýza transkriptomu transkriptomika Analýza proteinu - proteomika Analýza transkripce studium množství určitého transkriptu v daném vzorku a v daném čase
VíceZáklady molekulární a buněčné biologie. Přípravný kurz Komb.forma studia oboru Všeobecná sestra
Základy molekulární a buněčné biologie Přípravný kurz Komb.forma studia oboru Všeobecná sestra Genetický aparát buňky DNA = nositelka genetické informace - dvouvláknová RNA: jednovláknová mrna = messenger
VíceMetody studia exprese mrna. jádro a genová exprese 2007
Metody studia exprese mrna Buněčné jádro a genová exprese 2007 Aktivita genu je primárn ě vyjád ř ena jeho transkripcí-prvním krokem vedoucím k syntéze kódovaného proteinu. Cíle metod Ur č ení mno ž ství
VíceVyužití vektorů při klonování DNA
školní rok 2015/2016, kurz Bi6400 Využití vektorů při klonování DNA Jan Šmarda Ústav experimentální biologie Přírodovědecká fakulta MU 1 Klonování = proces tvorby klonů Klon: soubor geneticky identických
VíceNUKLEOVÉ KYSELINY. Základ života
NUKLEOVÉ KYSELINY Základ života HISTORIE 1. H. Braconnot (30. léta 19. století) - Strassburg vinné kvasinky izolace matiére animale. 2. J.F. Meischer - experimenty z hnisem štěpení trypsinem odstředěním
VíceMOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII. Martina Nováková, VŠCHT Praha
MOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII Martina Nováková, VŠCHT Praha MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE V BIOREMEDIACÍCH enumerace FISH průtoková cytometrie klonování produktů PCR sekvenování
VíceTranslace (druhý krok genové exprese)
Translace (druhý krok genové exprese) Od RN k proteinu Milada Roštejnská Helena Klímová 1 enetický kód trn minoacyl-trn-synthetasa Translace probíhá na ribosomech Iniciace translace Elongace translace
VíceZÁKLADY BAKTERIÁLNÍ GENETIKY
Zdroj rozmanitosti mikrorganismů ZÁKLADY BAKTERIÁLNÍ GENETIKY Různé sekvence nukleotidů v DNA kódují různé proteiny Různé proteiny vedou k různým organismům s různými vlastnostmi Exprese genetické informace
VíceEva Benešová. Genetika
Eva Benešová Genetika Význam nukleotidů - Energetický metabolismus (oběh energie). - Propojení odpovědi buňky na hormony a další stimuly. - Komponenty enzymových kofaktorů a dalších metabolických intermediátů.
VíceGenetika zvířat - MENDELU
Genetika zvířat DNA - primární struktura Několik experimentů ve 40. a 50. letech 20. století poskytla důkaz, že genetický materiál je tvořen jedním ze dvou typů nukleových kyselin: DNA nebo RNA. DNA je
Více-nukleové kyseliny jsou makromolekulární látky, jejichž základní stavební jednotkou je nukleotid každý nukleotid vzniká spojením:
Otázka: Molekulární základy dědičnosti Předmět: Biologie Přidal(a): Mulek NUKLEOVÉ KYSELINY -nositelkami genetické informace jsou molekuly nukleových kyselin tvořené řetězci vzájemně spojených nukleotidů,
VíceNukleové kyseliny. Nukleové kyseliny. Genetická informace. Gen a genom. Složení nukleových kyselin. Centrální dogma molekulární biologie
Centrální dogma molekulární biologie ukleové kyseliny 1865 zákony dědičnosti (Johann Gregor Transkripce D R Translace rotein Mendel) Replikace 1869 objev nukleových kyselin (Miescher) 1944 nukleové kyseliny
VíceÚvod do studia biologie. Základy molekulární genetiky
Úvod do studia biologie Základy molekulární genetiky Katedra biologie PdF MU, 2011 - podobor genetiky (genetika je obecnější) Genetika: - nauka o dědičnosti a proměnlivosti - věda 20. století Johann Gregor
VíceGenetický kód. Jakmile vznikne funkční mrna, informace v ní obsažená může být ihned použita pro syntézu proteinu.
Genetický kód Jakmile vznikne funkční, informace v ní obsažená může být ihned použita pro syntézu proteinu. Pravidla, kterými se řídí prostřednictvím přenos z nukleotidové sekvence DNA do aminokyselinové
VícePetr Müller Masarykův onkologický ústav. Genová terapie
Genová terapie Petr Müller Masarykův onkologický ústav Genová terapie =terapie využívající vpravení exogenní DNA do buněk či tkání organismu za účelem opravy fenotypu (deficience či mutace genu, vrozené
VíceMolekulární základ dědičnosti
Molekulární základ dědičnosti Dědičná informace je zakódována v deoxyribonukleové kyselině, která je uložena v jádře buňky v chromozómech. Zlomovým objevem pro další rozvoj molekulární genetiky bylo odhalení
VíceSvět RNA a bílkovin. RNA svět, 1. polovina. RNA svět. Doporučená literatura. Struktura RNA. Transkripce. Regulace transkripce.
RNA svět, 1. polovina Struktura RNA Regulace transkripce Zrání pre-mrna Svět RNA a bílkovin Sestřih pre-mrna Transport a lokalizace RNA Stabilita RNA Doporučená literatura RNA svět Alberts B., et al.:
VíceTomáš Oberhuber. Faculty of Nuclear Sciences and Physical Engineering Czech Technical University in Prague
Tomáš Faculty of Nuclear Sciences and Physical Engineering Czech Technical University in Prague Buňka buňka je základní stavební prvek všech živých organismů byla objevena Robertem Hookem roku 1665 jednodušší
VíceSchéma průběhu transkripce
Molekulární základy genetiky PROTEOSYNTÉZA A GENETICKÝ KÓD Proteosyntéza je složitý proces tvorby bílkovin, který zahrnuje proces přepisu genetické informace z DNA do kratšího zápisu v informační mrna
VíceTypy nukleových kyselin. deoxyribonukleová (DNA); ribonukleová (RNA).
Typy nukleových kyselin Existují dva typy nukleových kyselin (NA, z anglických slov nucleic acid): deoxyribonukleová (DNA); ribonukleová (RNA). DNA je lokalizována v buněčném jádře, RNA v cytoplasmě a
VíceVzdělávací materiál. vytvořený v projektu OP VK CZ.1.07/1.5.00/34.0211. Anotace. Biosyntéza nukleových kyselin. VY_32_INOVACE_Ch0219.
Vzdělávací materiál vytvořený v projektu OP VK Název školy: Gymnázium, Zábřeh, náměstí Osvobození 20 Číslo projektu: Název projektu: Číslo a název klíčové aktivity: CZ.1.07/1.5.00/34.0211 Zlepšení podmínek
VíceVyužití rekombinantní DNA při studiu mikroorganismů
Využití rekombinantní DNA při studiu mikroorganismů doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2014 1 2 Obsah přednášky 1) Celogenomové metody sekvenování 2) Sekvenování H.
VíceAutor prezentace: Doc. Mgr. Petr Galuszka, Ph.D.
k4 Konstrukce vhodného rekombinantního plasmidu pro uchování a expresi vybraných genů Škola molekulárních biotechnologií Využití molekulárního klonování uchovávání, zmnožení a manipulace s genetickou informací
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. OBVSB/Obecná virologie Tento projekt je spolufinancován Evropským
VíceGenetika. Genetika. Nauka o dědid. dičnosti a proměnlivosti. molekulárn. rní buněk organismů populací
Genetika Nauka o dědid dičnosti a proměnlivosti Genetika molekulárn rní buněk organismů populací Dědičnost na úrovni nukleových kyselin Předávání vloh z buňky na buňku Předávání vlastností mezi jednotlivci
VíceTranspozony - mobilní genetické elementy
Transpozony - mobilní genetické elementy Tvoří pravidelnou součást genomu prokaryot i eukaryot (až 50% genomu) Navozují mutace genů (inzerční inaktivace, polární mutace, změny exprese genů) Jsou zodpovědné
VíceREPLIKACE A REPARACE DNA
REPLIKACE A REPARACE DNA 1 VÝZNAM REPARACE DNA V MEDICÍNĚ Příklad: Reparace DNA: enzymy reparace nukleotidovou excizí Onemocnění: xeroderma pigmentosum 2 3 REPLIKACE A REPARACE DNA: Replikace DNA: 1. Podstata
VíceBAKTERIÁLNÍ GENETIKA. Lekce 12 kurzu GENETIKA Doc. RNDr. Jindřich Bříza, CSc.
BAKTERIÁLNÍ GENETIKA Lekce 12 kurzu GENETIKA Doc. RNDr. Jindřich Bříza, CSc. -dědičnost u baktérií principiálně stejná jako u komplexnějších organismů -genom haploidní a značně menší Bakteriální genom
VíceInovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován
Více7. Regulace genové exprese, diferenciace buněk a epigenetika
7. Regulace genové exprese, diferenciace buněk a epigenetika Aby mohl mnohobuněčný organismus efektivně fungovat, je třeba, aby se jednotlivé buňky specializovaly na určité funkce. Nový jedinec přitom
VíceBiosyntéza a metabolismus bílkovin
Bílkoviny Biosyntéza a metabolismus bílkovin lavní stavební materiál buněk a tkání Prakticky jediný zdroj dusíku pro heterotrofní organismy eexistují zásobní bílkoviny nutný dostatečný přísun v potravě
VíceStruktura, vlastnosti a funkce nukleových kyselin, DNA v jádře, chromatin.
Struktura, vlastnosti a funkce nukleových kyselin, DNA v jádře, chromatin. Nukleové base - purinové a pyrimidinové Ribonukleosidy - base + ribosa Deoxyribonukleosidy base + 2 - deoxyribosa Nukleotidy,
VíceChemie nukleotidů a nukleových kyselin. Centrální dogma molekulární biologie (existují vyjímky)
Chemie nukleotidů a nukleových kyselin Centrální dogma molekulární biologie (existují vyjímky) NH 2 N N báze O N N -O P O - O H 2 C H H O H H cukr OH OH nukleosid nukleotid Nukleosidy vznikají buď syntézou
VíceMolekulární genetika II zimní semestr 4. výukový týden ( )
Ústav biologie a lékařské genetiky 1.LF UK a VFN, Praha Molekulární genetika II zimní semestr 4. výukový týden (27.10. 31.10.2008) prenatální DNA diagnostika presymptomatická Potvrzení diagnózy Diagnostika
VíceEnzymy používané v molekulární biologii
Enzymy používané v molekulární biologii Rozdělení enzymů 1. Podle substrátové specifity: většina metod molekulární biologie je závislá na použití enzymů, jejichž substrátem jsou nukleové kyseliny. Tyto
VíceOdvětví genetiky zkoumající strukturu a funkci genů na molekulární úrovni
Otázka: Molekulární genetika a biologie Předmět: Biologie Přidal(a): Tomáš Pfohl Odvětví genetiky zkoumající strukturu a funkci genů na molekulární úrovni Zakladatel klasické genetiky - Johan Gregor Mendel
VíceÚloha protein-nekódujících transkriptů ve virulenci patogenních bakterií
Téma bakalářské práce: Úloha protein-nekódujících transkriptů ve virulenci patogenních bakterií Nové odvětví molekulární biologie se zabývá RNA molekulami, které se nepřekládají do proteinů, ale slouží
VíceHybridizace. doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz
Hybridizace doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2013 Obsah přednášky 1) Způsoby provedení hybridizace 2) Hybridizace v roztoku 3) Příprava značených sond 4) Hybridizace
VíceGENETIKA dědičností heredita proměnlivostí variabilitu Dědičnost - heredita podobnými znaky genetickou informací Proměnlivost - variabilita
GENETIKA - věda zabývající se dědičností (heredita) a proměnlivostí (variabilitu ) živých soustav - sleduje rozdílnost a přenos dědičných znaků mezi rodiči a potomky Dědičnost - heredita - schopnost organismu
VíceZáklady molekulární biologie KBC/MBIOZ
Základy molekulární biologie KBC/MBIOZ Ivo Frébort 1. Struktura a replikace DNA Literatura: Alberts a kol.: Základy buněčné biologie Espero Publishing, 2000 Garrett & Grisham: Biochemistry 2nd ed., Saunders
Více